拟南芥CTSP3基因GUS载体构建及转基因植株的筛选鉴定

拟南芥CTSP3基因GUS载体构建及转基因植株的筛选鉴定

论文摘要

[目的]深入研究植物基因CTSP3的基因表达模式及其对重金属镉胁迫的响应机制,以野生型拟南芥为材料构建CTSP3-GUS重组质粒及GUS转基因植株。[方法]通过提取野生型拟南芥的DNA,克隆其启动区基因片段,将基因片段和pART27-GUS质粒双酶切后连接,转化到大肠杆菌感受态细胞中,菌落PCR和测序获得阳性单克隆。然后将CTSP3-GUS重组质粒转入农杆菌感受态GV3101,获得阳性单菌落。接着采用浸花法侵染野生型拟南芥,最后通过抗性筛选和PCR鉴定获取CTSP3-GUS转基因植株。[结果]成功克隆CTSP3启动区基因片段,构建出重组质粒,获得了CTSP3-GUS转基因植株。[结论]获得CTSP3-GUS转基因植株,为接下来进一步研究该基因在植物响应镉胁迫机制中的功能奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 材料。
  •     1.1.2 主要试剂及酶类。
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 拟南芥无菌苗培养。
  •     1.2.2 拟南芥DNA的提取。
  •     1.2.3 CTSP3启动区基因片段的克隆。
  •     1.2.4 大肠杆菌的转化。
  •     1.2.5 农杆菌的转化。
  •     1.2.6 花序侵染法获取转基因拟南芥。
  •     1.2.7 转基因阳性植株鉴定。
  • 2 结果与分析
  •   2.1 拟南芥CTSP3启动区基因片段的克隆
  •   2.2 目的片段和质粒双酶切
  •   2.3 连接和大肠杆菌转化后阳性克隆鉴定
  •   2.4 农杆菌转化及花序浸染
  •   2.5 CTSP3 -GUS转基因植株的抗性筛选
  •   2.6 CTSP3 -GUS转基因阳性植株的鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 孟云,陶曼芝,吴席,曹树青,樊婷婷

    关键词: 拟南芥,载体,转基因植株

    来源: 安徽农业科学 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 合肥工业大学食品与生物工程学院

    基金: 中央高校基本科研业务费专项(JZ2018HGTB0248)

    分类号: Q943.2

    页码: 84-86

    总页数: 3

    文件大小: 401K

    下载量: 572

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