导读:本文包含了毕氏酵母论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,基因,密码子,糖苷酶,蛋白,白介素,丝氨酸。
毕氏酵母论文文献综述
任莉琼,吴敬,陈晟[1]（2019）在《共表达N-乙酰转移酶提高Aspergillus nidulans α-葡糖苷酶在毕氏酵母中的表达研究》一文中研究指出葡糖苷酶以低聚寡糖为底物,通过切割非还原末端α-1,4糖苷键以获得葡萄糖基,同时转苷生成α-1,6糖苷键,广泛应用于低聚异麦芽糖生产、代谢生理研究、疾病预防治疗等各个领域。Aspergillus nidulans来源的α-葡糖苷酶在毕氏酵母中外源表达时存在酶活较低、蛋白质降解等问题,为进一步提高α-葡糖苷酶表达量,共表达N-乙酰转移酶(Mpr1)以降低发酵过程细胞受到的氧化胁迫,提高酶活。以实验室保藏的P. pastoris KM71/pPIC9K-AgbB为出发菌株,构建共表达菌株Pichia pastoris KM71/pPIC9K-AgbB/pPICZA-Mpr1,经过摇瓶发酵120h,α-葡糖苷酶转苷酶酶活和蛋白质含量可达22. 56U/ml和0. 52mg/ml,分别是出发菌株摇瓶产酶的1. 92倍和1. 27倍。在此基础上进行3. 6L罐发酵温度和甲醇诱导浓度优化,在25℃,以1%的甲醇浓度诱导发酵最高酶活和蛋白质含量可达128. 12U/ml和1. 81mg/ml,分别是起始菌株上罐产酶的1. 96倍和1. 50倍。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年10期）
王楠,俞黎黎,崔玉宝[2]（2017）在《粉尘螨变应原Der f 2在毕氏酵母中表达及圆二色谱分析》一文中研究指出目的克隆粉尘螨变应原Der f 2编码基因,并构建毕氏酵母表达体系,对表达产物进行圆二色分析。方法提取粉尘螨总RNA,根据GenBank中的序列设计并合成简并引物,PT-PCR扩增Der f 2全长基因,与pGAPZα-A载体连接后转化至E.coli Top10F',取阳性克隆并测序;将pGAPZα-A-Der f 2用BlnⅠ进行线性化,电转化至GS115感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,采用SDS-PAGE验证表达产物,用His Trap HP亲和柱纯化重组蛋白Der f 2,进行圆二色谱扫描分析。结果 PCR扩增获得Der f 2编码基因,成功构建表达质粒pGAPZα-A-Der f 2,SDS-PAGE验证表明该质粒在GS115感受态细胞中正常表达,表达产物分子质量单位为14.9ku,重组蛋白Der f 2纯化后进行圆二色谱数据分析,其二级结构α-螺旋占41.2%,转角占10.3%,β-折迭占26.8%,不规则卷曲占21.7%。结论尘螨变应原Der f2在毕氏酵母中成功表达,为该变应原的进一步研究及规模生产和应用奠定了基础。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2017年06期）
阮美生,周天龙,黎荣,郭龙华[3]（2015）在《毕氏酵母表达的EV71 VP1蛋白免疫原性研究》一文中研究指出目的研究毕氏酵母表达的肠道病毒71(EV71)VP1的免疫原性,为研究EV71的亚单位疫苗提供实验依据。方法用生物信息学分析EV71的VP1序列,优化在酵母表达的密码子。表达质粒p PICZa A-VP1电转毕氏酵母,并在甲醇诱导下表达VP1,VP1用Ni-NTA亲合层析得到纯化并用Western blot分析鉴定。用小鼠模型评估其免疫原性和疫苗效果。结果重组的VP1能有效诱导BALB/c小鼠产生抗-VP1抗体,免疫后的血清中抗VP1抗体能中和EV71病毒。对新生小鼠的被动保护进一步证实了VP1接种的小鼠抗血清的预防效应。结论重组VP1蛋白保留了其免疫原性,是一种候选的EV71疫苗。(本文来源于《热带医学杂志》期刊2015年11期）
钟开新,陈丽芝,李阳源[4]（2015）在《里氏木霉α-半乳糖苷酶基因agl2在毕氏酵母中高效表达》一文中研究指出通过反转录PCR从里氏木霉Rut C-30基因中克隆到α-半乳糖苷酶基因agl2,将其构建到具有AOX1强启动子的表达载体p PIC9K中,线性化后转化到毕氏酵母GS115中进行表达。结果表明agl2基因在毕氏酵母GS115中得到了高效表达,在50 L发酵罐中高密度发酵168 h,酶活达最高值1 106 U/m L。经PCR产物鉴定,结果表明agl2基因已整合到毕氏酵母GS115基因组中。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2015年04期）
孙伟[5]（2015）在《毕氏酵母中重组人白介素15的表达纯化及其生物学活性鉴定研究》一文中研究指出白介素15 (interleukin-15, IL-15)作为一种炎症因子,与IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-21一样同属4α超螺旋细胞因子家族。人源IL-15位于4号染色体短臂,含8个外显子和5个内含子,成熟IL-15编码114个氨基酸序列,分子量大小为14-15KDa,主要表达于单核细胞、巨噬细胞及树突状细胞中。IL-15主要的生物学功能为诱导T细胞、B细胞和自然杀伤细胞(natural killer cell, NK cell)的分化已及促进T细胞、B细胞和NK细胞的增殖。作为一种多效细胞因子,IL-15在免疫,肿瘤发生,过敏性反应及自身免疫疾病中均发挥着重要作用。在本研究中,我们构建了一种C端带His标签和Myc标签的重组人白介素15 (rhIL-15)的表达载体pPICZaA-Pro-hIL-15-Tag。重组表达载体经转化毕氏酵母表达菌株X-33后,阳性表达菌株rhIL-15表达产量高达75mg/L。X-33菌株表达的rhIL-15经镍离子亲和层析柱、DEAE阴离子交换柱纯化后纯度可达95%。毕氏酵母表达的重组白介素15存在不同程度的N-糖基化修饰形式,其分子量比预测理论分子量偏大。毕氏酵母中表达纯化的rhIL-15可促进小鼠CTLL-2及人NK细胞的增殖,具有良好的生物学活性。(本文来源于《安徽大学》期刊2015-05-01）
王宏英,李娜,李秀娜,王振宇,徐梅[6]（2014）在《纤溶酶抑制剂textilinin-1在毕氏酵母的表达及应用》一文中研究指出目的研究真核表达的textilinin-1蛋白纯化品对纤溶酶抑制作用。方法根据textilinin-1的天然氨基酸序列,按照毕氏酵母偏好密码子进行优化,合成textilinin-1基因,重组到pPICZα载体上,并转化至Pichia p.X-33菌种中,实现高效分泌表达,并进行重组textilinin-1活力单位的定义及小鼠断尾试验。结果通过高密度发酵及两步柱层析纯化,最终从10L发酵液中得到6g纯度达97.0%以上的重组textilinin-1。活性研究表明,重组textilinin-1对纤溶酶的活性具有抑制作用,并对tPA所致的小鼠出血倾向有一定的抑制作用。结论重组textilinin-1可抑制纤溶酶活性,并对纤溶性出血小鼠模型有止血作用,具有开发为止血药的潜力。(本文来源于《蛇志》期刊2014年03期）
钟开新,陈丽芝,李阳源[7]（2014）在《共表达内质网响应蛋白HAC1对α-半乳糖苷酶在毕氏酵母中表达的影响》一文中研究指出为提高毕氏酵母(Pichia pastoris)中重组α-半乳糖苷酶的表达,将来源于P.pastoris GS115的hac1基因构建至pPIC9K表达载体中,转化到重组P.pastoris中与α-半乳糖苷酶共表达。研究结果表明,在AOX1启动子控制下,HAC1过表达提高了重组P.pastoris中α-半乳糖苷酶蛋白表达含量,使α-半乳糖苷酶活性提高了2.2倍。经PCR产物鉴定,结果表明重组P.pastoris基因组中插入hac1基因。经50 L发酵罐甲醇诱导168 h,Gal-HAC1-4#工程菌最终酶活达到6 560 U/mL,比Gal-21#工程菌提高了27%。甲醇诱导后Gal-HAC1-4#发酵液中粗蛋白浓度均高于Gal-21#工程菌。表明共表达HAC1蛋白可提高毕氏酵母产α-半乳糖苷酶蛋白的能力。(本文来源于《生物技术通报》期刊2014年07期）
陈金峰,韩艳霞,焦婵[8]（2014）在《大豆GmCAT4基因在毕氏酵母中的表达和功能鉴定》一文中研究指出利用生物信息学分析了大豆GmCAT4蛋白的结构,其目的蛋白编码492个氨基酸,分子量为56.7 kD,等电点约为6.80,同时预测了蛋白质的二级和高级结构。利用双酶切的方法从克隆载体pMD19-T-GmCAT4上双酶切下目的基因的cDNA,然后将其和表达载体pPIC9K进行连接,构建重组载体pPIC9K-GmCAT4,经电击转化入毕氏酵母,PCR证实了GmCAT4基因已整合进酵母基因组。目的蛋白经甲醇诱导后,在上清和细胞内均有表达,发酵液上清粗酶活性为124.3 kU·L-1,诱导后的酵母对NaCl和H2O2表现出一定的抗性。(本文来源于《大豆科学》期刊2014年03期）
欧广云,熊智强,周圣靓,王勇,李平[9]（2014）在《阿维链霉菌来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及其在毕氏酵母中的异源表达》一文中研究指出本文旨在构建阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因(pss)的重组质粒,研究其在毕氏酵母中的异源分泌型表达。利用PCR技术克隆阿维链霉菌来源的pss基因,再通过电转化方法将重组质粒pOG-01转入毕氏酵母KM71中,构建重组工程菌KP1。实验结果表明,阿维链霉菌来源的磷酯酰丝氨酸合成酶基因在毕氏酵母KM71中成功表达,2 mL菌体上清催化50 mmol/L卵磷脂,转酯反应的转化率为58%,酶活为4.83 U/mL。(本文来源于《工业微生物》期刊2014年01期）
暴元元,赵青君,徐婷婷,陈锐博,赵卫东[10]（2013）在《人β防御素3与植物巴西甜蛋白基因密码子的优化及其在毕氏酵母中的表达》一文中研究指出根据人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的氨基酸序列,按照酵母密码子的偏爱性,合成了14段末端具有粘合位点的核苷酸序列,经连接、PCR扩增,使人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的编码序列通过1段序列(含凝血酶切割位点)连接成为嵌合基因,将其插入到pPIC9K载体中,构建重组表达载体pPIC9K-hBD3-Bra.SalⅠ,BglⅡ单酶切后,分别电击转化到毕赤酵母GS115中,构建野生型和乙醇氧化酶缺陷型酵母工程菌株GS115-pPIC9K-hBD3-Bra.筛选鉴定后,以体积分数为0.5%的甲醇进行诱导,缺陷型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的90%,纯度较高,野生型工程菌株表达的目的蛋白约占上清蛋白的57.8%.(本文来源于《河南农业大学学报》期刊2013年01期）
毕氏酵母论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的克隆粉尘螨变应原Der f 2编码基因,并构建毕氏酵母表达体系,对表达产物进行圆二色分析。方法提取粉尘螨总RNA,根据GenBank中的序列设计并合成简并引物,PT-PCR扩增Der f 2全长基因,与pGAPZα-A载体连接后转化至E.coli Top10F',取阳性克隆并测序;将pGAPZα-A-Der f 2用BlnⅠ进行线性化,电转化至GS115感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,采用SDS-PAGE验证表达产物,用His Trap HP亲和柱纯化重组蛋白Der f 2,进行圆二色谱扫描分析。结果 PCR扩增获得Der f 2编码基因,成功构建表达质粒pGAPZα-A-Der f 2,SDS-PAGE验证表明该质粒在GS115感受态细胞中正常表达,表达产物分子质量单位为14.9ku,重组蛋白Der f 2纯化后进行圆二色谱数据分析,其二级结构α-螺旋占41.2%,转角占10.3%,β-折迭占26.8%,不规则卷曲占21.7%。结论尘螨变应原Der f2在毕氏酵母中成功表达,为该变应原的进一步研究及规模生产和应用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毕氏酵母论文参考文献
[1].任莉琼,吴敬,陈晟.共表达N-乙酰转移酶提高Aspergillusnidulansα-葡糖苷酶在毕氏酵母中的表达研究[J].中国生物工程杂志.2019
[2].王楠,俞黎黎,崔玉宝.粉尘螨变应原Derf2在毕氏酵母中表达及圆二色谱分析[J].中国病原生物学杂志.2017
[3].阮美生,周天龙,黎荣,郭龙华.毕氏酵母表达的EV71VP1蛋白免疫原性研究[J].热带医学杂志.2015
[4].钟开新,陈丽芝,李阳源.里氏木霉α-半乳糖苷酶基因agl2在毕氏酵母中高效表达[J].微生物学杂志.2015
[5].孙伟.毕氏酵母中重组人白介素15的表达纯化及其生物学活性鉴定研究[D].安徽大学.2015
[6].王宏英,李娜,李秀娜,王振宇,徐梅.纤溶酶抑制剂textilinin-1在毕氏酵母的表达及应用[J].蛇志.2014
[7].钟开新,陈丽芝,李阳源.共表达内质网响应蛋白HAC1对α-半乳糖苷酶在毕氏酵母中表达的影响[J].生物技术通报.2014
[8].陈金峰,韩艳霞,焦婵.大豆GmCAT4基因在毕氏酵母中的表达和功能鉴定[J].大豆科学.2014
[9].欧广云,熊智强,周圣靓,王勇,李平.阿维链霉菌来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及其在毕氏酵母中的异源表达[J].工业微生物.2014
[10].暴元元,赵青君,徐婷婷,陈锐博,赵卫东.人β防御素3与植物巴西甜蛋白基因密码子的优化及其在毕氏酵母中的表达[J].河南农业大学学报.2013
论文知识图
