导读:本文包含了基因载体构建论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,载体,座子,转基因,荧光,质粒,细胞。
基因载体构建论文文献综述
邹云莲,胡边,张李琛,张进萍,朱学锴[1]（2019）在《人IL-12基因载体的构建及其在T细胞中的表达研究》一文中研究指出目的:探究T细胞携载人IL-12基因对T细胞生长和功能的影响。方法:构建表达人IL-12基因的PiggyBac转座子载体,在电转下,将携载IL-12基因的转座子系统导入新鲜分离的淋巴细胞获得持续稳定表达。通过T细胞表型分析及体外功能实验研究初步探讨T细胞携载IL-12基因的可行性。结果:借助电转可将携载有IL-12基因的PiggyBac转座子系统高效导入新鲜分离的淋巴细胞并获得高效稳定表达;IL-12的分泌可促进T细胞增殖,增加CD4阳性细胞百分比;携载IL-12基因的T细胞在肿瘤细胞刺激下可进一步促进IL-12分泌,增强T细胞的杀瘤活性。结论:在电场作用下,Piggybac转座子系统可将人IL-12基因高效载入并整合至T细胞基因组获得持续稳定表达,分泌的功能性IL-12可促进T细胞增殖,增强杀瘤活性。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年21期）
李俊龙,刘小康,王祎[2]（2019）在《TFF1基因启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及活性鉴定》一文中研究指出目的:构建含有野生型或突变型人叁叶因子1(Trefoil factor 1,TFF1)基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并研究雌激素对上述启动子转录活性的影响。方法:设计人野生型和突变型TFF1基因启动子的引物,扩增回收片段,将其克隆到含有荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中构建重组质粒,经双酶切和测序鉴定后转染胆囊癌GBC-SD细胞,24h后采用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的表达活性。结果:成功构建了野生型pGL3-TFF1质粒和雌激素应答元件(Estrogen response elements,ERE)位点突变的pGL3-TFF1-△ERE突变质粒,激活蛋白1(Activating protein-1,AP-1)位点突变的pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒。经双荧光素酶报告基因检测分析,pGL3-TFF1质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒均具有基础转录活性,与对照组比较(P<0.001)。雌激素能进一步增强野生型TFF1启动子质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒的启动子转录活性(P<0.01),而对pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒的活性无影响(P>0.05)。结论:本研究成功构建了野生型以及突变型TFF1启动子质粒,发现非经典雌激素受体结合部位——激活蛋白1(AP-1)位点对雌激素诱导的TFF1启动子转录活性增强发挥决定性作用。(本文来源于《四川生理科学杂志》期刊2019年03期）
王海禄,李杰,尹俊[3]（2019）在《CRISPR/Cas9编辑雪兔Corin基因载体的构建》一文中研究指出[目的]通过CRISPR/Cas9系统构建雪兔Corin基因编辑载体。[方法]通过在线CRISPR设计工具设计2个靶点,退火制备sgRNA双链,用BbsⅠ酶得到线性p X330载体后,经重组酶连接得到重组质粒。将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,再对其进行PCR鉴定及测序比对分析。[结果]通过特异性扩增以及测序结果表明sgRNA准确地连入载体,插入序列无突变,与预期序列高度一致,重组子阳性率为100%。[结论]成功构建了雪兔Corin基因敲除载体,为进一步利用CRISPR/Cas9技术进行雪兔Corin基因编辑工作提供了研究基础。(本文来源于《生物技术》期刊2019年02期）
仵陶,安胜军,邵铁梅,朱正歌,焦展[4]（2019）在《微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达》一文中研究指出制备和培养含微型人胰岛素基因的转基因花生植株,从而利用转基因花生表达微型人胰岛素。首先按照植物偏爱密码子设计合成了修饰C肽的微型人胰岛素基因(mini insulin,MI),其中胰岛素B链通过丙-丙-赖叁肽和A链相连接,在表达载体pBI121上构建了由花椰菜花叶病毒CAMV35S启动子驱动表达微型人胰岛素的重组质粒RIG。质粒RIG经农杆菌介导法转化至花生胚和去胚子叶中,抗生素筛选得到转基因花生苗,之后利用PCR和Western-blot对转基因花生幼叶进行分子生物学鉴定。结果显示,试验优化了农杆菌介导的花生转基因技术,并且得到了转基因花生苗;分子生物学技术鉴定结果显示,微型人胰岛素基因成功转入花生叶片基因组中,且在花生叶片中表达,其中以花生胚为外植体长出的再生苗的阳性检测率为2.27%。目前正在探索微型人胰岛素基因在花生油体中高效表达的方法,为转基因花生规模化生产微型人胰岛素提供理论基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年04期）
陈艺铭,祁宇,胡文婷,郑迪,俞丙然[5]（2019）在《基于开环反应构建新型还原响应型支化聚赖氨酸基因载体》一文中研究指出通过"一锅法"开环反应构建了一种含有双硫键的还原响应型可降解支化聚赖氨酸基因载体(SS-HP).同时通过相似的方法合成了不含双硫键的支化聚赖氨酸基因载体(CC-HP)作为对照.聚阳离子/pDNA复合物的水合粒径和电位通过动态光散射仪测定,其在还原性环境中的降解情况通过凝胶阻滞电泳、原子力显微镜测试评价. SS-HP和CC-HP的体外转染能力及细胞毒性通过荧光素酶报告基因和MTT法在脑胶质瘤C6和肝癌HepG2细胞中测定.癌细胞中过量表达的谷胱甘肽能够使SS-HP在细胞内降解,加速pDNA的释放,使该载体有良好的基因转染能力.同时,载体的可降解性以及由开环反应给载体引入的大量羟基,使载体有较低的细胞毒性. KillerRed蛋白是一种在可见光照射下能产生单线态氧的红色荧光蛋白.使用SS-HP携载pKillerRed (pKR)质粒进行体外光动力抗癌评价. SS-HP/pKR转染C6细胞后能成功表达出KillerRed蛋白,光照后可以促进肿瘤细胞的凋亡.(本文来源于《高分子学报》期刊2019年06期）
鲍宁,陈凤收,姜艳华,方波,马虹[6]（2019）在《构建ECE1 3'UTR荧光素酶报告基因载体验证其与miR-199a-5p靶向关系》一文中研究指出目的:通过构建双荧光素酶报告基因重组质粒验证miRNA-199a-5p(miR-199a-5p)与ECE1基因的靶向调控关系。方法:通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-199a-5p与ECE1基因3'UTR潜在的互补结合位点,PCR技术扩增ECE1基因3'端非翻译区,将此序列与miR-199a-5p mimics或空质粒(NC)共转染到pmirGLO-ECE1-野生型(WT)的293细胞里;将此序列突变序列与miR-199a-5p mimics或NC共转染到pmirGLO-ECE1-突变型(MUT)的293细胞里,共四组,检测四组细胞中荧光素酶活性。结果:成功构建双荧光素酶报告基因重组质粒pmirGLO-ECE1-WT和pmirGLO-ECE1-MUT。与野生型NC(4.30±0.53)组及突变型miR-199a-5p mimics组(4.465±0.3968)比较,野生型miR-199a-5p mimics组(1.686±0.4098)荧光素酶活性明显降低,P<0.05,有显着差异;突变型miR-199a-5p mimics组(4.465±0.3968)与突变型miR-199a-5p NC(4.18±0.498)组及野生型NC(4.30±0.53)组两两比较,P>0.05,无明显差异。结论:miR-199a-5p与野生型ECE1存在结合位点,miR-199a-5p对野生型ECE1重组质粒荧光活性有明显的抑制作用,证实miR-199a-5p能够靶向调控ECE1基因。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2019年02期）
覃论[7]（2019）在《铬掺杂镓酸锌纳米复合纤维基因载体材料的构建及其抗肿瘤应用研究》一文中研究指出肿瘤是一种基因调控异常引起的疾病,由多种肿瘤相关基因共同控制。基因干扰(RNAi)作为肿瘤基因治疗的一种,由于高效性和特异性成为近年来的研究热点。通过基因干扰作用靶向端粒酶逆转录酶基因抑制端粒酶活性可以实现抗癌目的。有效的基因递送是目前基因治疗最大的挑战。阳离子改性的金纳米棒(AuNRs)是一种非常有潜力的基因递送载体,通过静电结合的方式装载带负电的基因,同时借助金纳米棒的表面等离子局域共振效应实现高效的基因转染。定域药物递送体系能够最大限度地保持药物活性,实现可控的药物释放,避免全身循环造成的药物浪费和全身毒性。因此,将定域药物递送体系与基因治疗结合用于基因传输,既可以减少基因损失,提高基因局部药剂量,又可以实现基因的可控释放。铬掺杂镓酸锌材料(ZnGa2O4:Cr,ZGOC)是一种性能优异的镓酸盐基质发光材料,具有高强度的600-800nm近红外区域发光,同时它能够被可见光激发,可以利用常见的LED作为光源。本论文设计了一种基于铬掺杂镓酸锌纳米纤维和金纳米棒的复合材料,用于定域基因传输,同时实现基因在LED光照下的光响应性释放。主要工作和创新成果如下:1.采用溶胶凝胶-静电纺丝技术制备了铬掺杂镓酸锌纳米纤维。通过对助纺剂PVP用量、溶剂成分、离子浓度、外加电场大小和给胶速度等各种影响因素的探索,确定了铬掺杂镓酸锌纳米纤维的制备工艺。获得的纳米纤维结晶性好,无杂相,形貌连续,尺寸均一,直径约为100nm,同时该纳米纤维可以被紫外光或者可见光激发,发射600-800nm的近红外光,在700nm左右有两个尖锐的发射峰。烧结温度和铬离子掺杂量会影响该纳米纤维的光致发光性能:烧结温度越高,发光强度越好;铬掺杂量提高,发光强度先变强后变弱,当掺杂量为0.5%时,发光强度最高。2.通过银离子辅助种子生长法实现了金纳米棒的可控制备,获得的金纳米棒具有良好的分散性和水溶性。选用最大共振吸收峰为700 nm的金纳米棒进行表面修饰和基因装载:首先采用层层包覆的方式对金纳米棒先后进行PSS和PEI改性,获得表面正电荷密度较高的金纳米棒(Au-PEI);接着通过静电吸附作用成功装载了带负电的小干扰基因(siRNA)。另外,通过琼脂糖凝胶电泳实验证明了 Au-PEI具有良好的基因装载性能、释放性能和保护性能。3.构建了一种具有LED光响应性的复合纤维基因载体Au-PEI/siRNA@ZGOC,用于肝癌细胞的定域基因传输。通过静电吸附作用,将装载干扰基因的金纳米棒复合到铬掺杂镓酸锌纳米纤维表面,获得复合纤维基因载体,并确定了金纳米棒和纤维的复合比例。之后,一系列生物学实验证明了,该复合纤维基因递送载体具有较高的基因递送效率和优异的抗肿瘤性能,基因沉默效率从40%提高到65%。LED光照促进复合纤维实现基因干扰的机理是:LED光照复合纤维在肿瘤局部产生的温和光热效应促进了基因干扰——(ⅰ)促进了携带基因的金纳米棒从纤维上脱附;(ⅱ)增强细胞膜的流动性,促进了细胞对金纳米棒的摄取;(ⅲ)促进了 siRNA有效的内体逃逸。这叁个作用都提高了 siRNA在细胞质中积累,从而提高了 RNAi效果。(本文来源于《浙江大学》期刊2019-01-18）
张照研,王宇光,高月[8]（2018）在《CYP7A1基因启动子克隆及萤光素酶报告基因载体构建》一文中研究指出目的:克隆细胞色素P450 7A1(CYP7A1)基因启动子,构建以CYP7A1基因启动子为启动序列的双萤光素酶报告基因系统并分析其活性,为研究CYP7A1基因转录调控提供有效筛选工具。方法:采用PCR方法克隆CYP7A1基因启动子序列,连接到pUC57载体中,双酶切后连接至萤光素酶报告质粒pGL3-Basic上,构建重组萤光素酶报告质粒pGL3-CYP7A1-promoter-luc。结果:重组质粒经双酶切和测序,证实构建正确;pGL3-CYP7A1-promoter-luc质粒2、3转染HepG2细胞均具有显着性启动子活性,pGL3-CYP7A1-promoter-luc2转染24和48 h后经检测分别为对照组(pGL3-basic空载体)的13.1±2.8倍(P<0.001)和23.3±2.9倍(P<0.001);pGL3-CYP7A1-promoter-luc3转染24、48 h后,荧光响应值分别是对照组的8.4±1.6倍(P<0.001)和22.1±1.9倍(P<0.01),呈现强启动子活性。结论:构建了CYP7A1基因启动子萤光素酶报告基因重组质粒pGL3-CYP7A1-promoter-luc,为后续深入研究药物对其调控作用机制奠定了基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年05期）
孙潇,蔡梦娇,张丹,韩苏夏[9]（2018）在《Sleeping Beauty转座子介导敲低PEX2转基因载体的构建》一文中研究指出目的借助Sleeping Beauty(SB)转座系统在小鼠肝脏中稳定过表达原癌基因MYC诱导小鼠肝癌形成,并在SB转座子pT3EF1α-c-Myc基础上构建可在小鼠体内敲低PEX2的重组转基因载体。方法借助水动力法尾静脉注射(Hydrodynamic tail vein injection,HTVI)和SB转座子系统向小鼠肝脏导入携带目的基因MYC的转座子质粒,诱导小鼠肝癌形成。以载体为模板,分别扩增U6-shNC、U6-shPEX2序列,通过T4连接获得目标载体pT3EF1α-c-MycshNC、pT3EF1α-c-Myc-shPEX2。结果 (1)实验组小鼠成功诱导出肝癌。(2)经酶切和测序等方法鉴定,构建质粒完全正确。(3)细胞瞬时转染实验质粒pT3EF1α-c-Myc-shPEX2及其对照质粒pT3EF1α-c-Myc-shNC,确定在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中实验组质粒可以降低PEX2的mRNA水平。结论借助HTVI技术和SB转座系统过表达c-Myc成功诱导小鼠肝癌形成,并在SB转座子质粒pT3EF1a-c-Myc基础上构建了可在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中敲低PEX2基因的重组转基因载体。(本文来源于《西部医学》期刊2018年09期）
罗军[10]（2018）在《一套C末端荧光蛋白融合表达的果蝇定点转基因载体的系统性构建》一文中研究指出果蝇转基因技术是研究基因表达、基因调节和基因功能的重要工具。早期的果蝇转基因技术依赖于P因子。随着技术的发展,近年来发展出了基于噬菌体Phi C31转座酶的位点特异性转基因技术。这种技术比基于P因子的转基因技术效率更高,可以兼容更大的转基因片段,不需要对插入位点进行定位,并且不同的转基因载体可以插入相同的位点,有利于不同的转基因之间进行比较。除了转基因技术,近年来荧光蛋白技术也得到了长足的发展,新型的荧光蛋白不断出现,荧光蛋白的亮度、光稳定性和成熟时间得到了很大的改进。荧光蛋白在生物研究中有广泛应用,包括作为基因表达的标记、蛋白动态定位的标记、细胞形态的标记、亚细胞结构的标记、细胞活性的标记、蛋白相互作用的标记等。在果蝇研究中,荧光蛋白虽然也得到了广泛的应用,但许多新型荧光蛋白尚未得到普及,当我们在构建荧光蛋白融合表达载体时需要耗费额外的时间进行多步的克隆操作。在这里,我们系统性的构建了一整套基于Phi C31定点转基因技术的C末端荧光蛋白融合表达的果蝇转基因载体。这套转基因载体不仅结合了多种新型荧光蛋白,提供了从蓝色到红色多种不同波长的荧光蛋白可供选择,还结合了多种增强子或启动子来调节表达,包括果蝇转基因中常用的叁种二元表达系统、两种泛表达启动子和一种早期胚胎母源表达启动子。利用这套转基因载体,可以减少克隆步骤,缩短实验时间,普及荧光蛋白的应用,并且为基因表达、蛋白定位、活体成像以及蛋白相互作用等方面的研究提供重要的工具。另外,为了避免在行为学实验中转基因载体中的选择标记基因white对果蝇行为产生影响,我们同时原样系统性的建立了一套使用vermilion做为选择标记基因的荧光蛋白融合表达的果蝇定点转基因载体。我们对这些载体在体内进行了一些转基因测试,实验证明这些载体能有效的表达有功能的带有荧光蛋白标签的融合蛋白。(本文来源于《第十一届中国生命科学公共平台管理与发展研讨会摘要集》期刊2018-07-18）
基因载体构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建含有野生型或突变型人叁叶因子1(Trefoil factor 1,TFF1)基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒,并研究雌激素对上述启动子转录活性的影响。方法:设计人野生型和突变型TFF1基因启动子的引物,扩增回收片段,将其克隆到含有荧光素酶报告基因的载体pGL3-Basic中构建重组质粒,经双酶切和测序鉴定后转染胆囊癌GBC-SD细胞,24h后采用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的表达活性。结果:成功构建了野生型pGL3-TFF1质粒和雌激素应答元件(Estrogen response elements,ERE)位点突变的pGL3-TFF1-△ERE突变质粒,激活蛋白1(Activating protein-1,AP-1)位点突变的pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒。经双荧光素酶报告基因检测分析,pGL3-TFF1质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒均具有基础转录活性,与对照组比较(P<0.001)。雌激素能进一步增强野生型TFF1启动子质粒和pGL3-TFF1-△ERE突变质粒的启动子转录活性(P<0.01),而对pGL3-TFF1-△AP-1突变质粒以及pGL3-TFF1-△ERE+△AP-1双突变质粒的活性无影响(P>0.05)。结论:本研究成功构建了野生型以及突变型TFF1启动子质粒,发现非经典雌激素受体结合部位——激活蛋白1(AP-1)位点对雌激素诱导的TFF1启动子转录活性增强发挥决定性作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因载体构建论文参考文献
[1].邹云莲,胡边,张李琛,张进萍,朱学锴.人IL-12基因载体的构建及其在T细胞中的表达研究[J].中国免疫学杂志.2019
[2].李俊龙,刘小康,王祎.TFF1基因启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及活性鉴定[J].四川生理科学杂志.2019
[3].王海禄,李杰,尹俊.CRISPR/Cas9编辑雪兔Corin基因载体的构建[J].生物技术.2019
[4].仵陶,安胜军,邵铁梅,朱正歌,焦展.微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达[J].江苏农业科学.2019
[5].陈艺铭,祁宇,胡文婷,郑迪,俞丙然.基于开环反应构建新型还原响应型支化聚赖氨酸基因载体[J].高分子学报.2019
[6].鲍宁,陈凤收,姜艳华,方波,马虹.构建ECE13'UTR荧光素酶报告基因载体验证其与miR-199a-5p靶向关系[J].现代生物医学进展.2019
[7].覃论.铬掺杂镓酸锌纳米复合纤维基因载体材料的构建及其抗肿瘤应用研究[D].浙江大学.2019
[8].张照研,王宇光,高月.CYP7A1基因启动子克隆及萤光素酶报告基因载体构建[J].生物技术通讯.2018
[9].孙潇,蔡梦娇,张丹,韩苏夏.SleepingBeauty转座子介导敲低PEX2转基因载体的构建[J].西部医学.2018
[10].罗军.一套C末端荧光蛋白融合表达的果蝇定点转基因载体的系统性构建[C].第十一届中国生命科学公共平台管理与发展研讨会摘要集.2018
论文知识图
