导读:本文包含了纤维特异表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,纤维,转基因,细胞系,腹膜,载体,毛囊。
纤维特异表达论文文献综述
刘欢,李文林,陈少芬,吴红,石小玉[1]（2016）在《与乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-1表达上调及意义》一文中研究指出目的探索乳腺癌间质成纤维细胞对乳腺癌作用的分子机制,研究与人乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-l(fibroblast-specific protein-1,FSP-l)的表达及对乳腺癌生长的影响。方法 Transwell方法共培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人成纤维细胞株ESF;实时RT-qPCR检测共培养的MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1mRNA水平;免疫荧光流式细胞仪检测共培养MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1蛋白表达水平;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测MDA-MB-231细胞的增殖;免疫荧光激光共聚焦显微镜观察荷瘤裸鼠乳腺癌组织FSP-1的表达,检测FSP-1对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果 MDA-MB-231细胞和ESF细胞共培养可上调ESF细胞表达FSP-1并促进MDA-MB-231细胞增殖;ESF+MDA-MB-231组MDA-MB-231细胞表达FSP-1,但在MDA-MB-231组未检测到FSP-1蛋白表达;荷瘤裸鼠MDA-MB-231细胞和ESF细胞共生长的癌组织高表达FSP-1并促进肿瘤生长。结论与人乳腺癌细胞共培养可上调人成纤维细胞FSP-1的表达并促进乳腺癌生长。(本文来源于《南昌大学学报(医学版)》期刊2016年04期）
虞飞,李斌,张晶晶,丁海麦,张学明[2]（2014）在《重组人gdnf乳腺特异表达载体转染牛胎儿成纤维细胞的研究》一文中研究指出为了制备重组人GDNF牛乳腺生物反应器,采用组织块贴壁法分离培养雌性牛胎儿成纤维细胞,连续继代培养75d,进行形态观察和染色体分析,在此基础上,转染带有新霉素抗性和红色荧光蛋白双重筛选标记的重组人gdnf乳腺特异表达载体pNR-GDNF,G418筛选阳性抗性克隆,进行PCR法鉴定。结果表明,分离培养的牛胎儿成纤维细胞具有正常的形态、分裂增殖特性和染色体数目;目的基因已整合到转基因细胞的染色体上。(本文来源于《生物技术通报》期刊2014年08期）
石继红,胡大海,白晓智,官浩,陶克[3]（2012）在《胶原蛋白特异结合性重组人IL-10的克隆、表达及其拮抗纤维化的初步研究》一文中研究指出白细胞介素10(IL-10)是一种多效细胞因子,在炎症、免疫反应以及在疾病的发生过程中发挥着重要的作用,CBD是能够特异性结合胶原蛋白的多肽序列。本文将胶原蛋白特异结合的导向肽CBD连接到IL-10的羧基端,以人外周血淋巴细胞cDNA为模板,扩增的PCR产物经克隆载体pMD20-T,连至原核表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了pET-IL10-CBD表达载体的重组菌(pET-IL10-CBD/(本文来源于《中华医学会烧伤外科学分会2012年学术年会论文汇编》期刊2012-10-19）
吴治昊,薛超,安星兰,王春生,苗向阳[4]（2012）在《转肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株的筛选》一文中研究指出为了筛选肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株,研究利用人工合成的小鼠肌肉启动子SP,连接前期工作中获得带有GFP基因的小鼠MSTN基因RNA干涉载体pR-NAT-M1,构建真核表达载体pRNAT-SP-M1,将pRNAT-SP-M1线性化后转染小鼠成纤维细胞并通过300μg/mL G418筛选获得转基因阳性细胞。结果表明:获得的转基因阳性细胞呈现正常的小鼠成纤维细胞的梭形,且在荧光显微镜下呈现出表达绿色荧光蛋白的绿色;转基因阳性细胞的生长曲线呈"S"形;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍具有正常的细胞形态和增殖特性;PCR鉴定结果显示转基因阳性细胞基因组DNA中整合有pRNAT-SP-M1序列。说明成功获得了转肌细胞特异表达的MSTN基因RNA干涉序列小鼠成纤维细胞株。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2012年09期）
肖红,高圆,梁伟,高笑宇,汪慧[5]（2012）在《毛囊特异表达载体pCDsR-UI的构建以及绒山羊胎儿成纤维细胞的体外转染和筛选》一文中研究指出构建IGF1基因的毛囊特异表达载体,可为今后通过体细胞核移植技术建立转基因克隆绒山羊准备核供体细胞.将绵羊IGF1cDNA序列,连接到含有UHS启动子序列的克隆载体p19TU的SalI、SphI位点,获得过渡质粒载体p19TUI;pCDsRed2和过渡质粒载体分别经酶切和连接构成表达载体pCDsR-UI.以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以脂质体方法转染所培养的第2代成纤维细胞,DMEM/F12+10%FBS、37℃5%CO2中培养,经添加G418筛选,获得了稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆,经特异性PCR鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.转基因前后分析细胞生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数正常.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2012年02期）
王玮,袁建龙,金永,朱兵,岳群华[6]（2011）在《构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞》一文中研究指出旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。(本文来源于《生物技术通报》期刊2011年11期）
周杨[7]（2011）在《重组人酸性成纤维细胞生长因子乳腺特异表达载体的构建及其功能的验证》一文中研究指出人酸性成纤维细胞生长因子(FGF1)在多种生物进程中都发挥重要作用,如胚胎发育、细胞生长和分化、形态发生、组织修复等,FGF1以其广泛的生物功能被认为是一种重要的用于治疗多种疾病的蛋白药物。本研究的目的是构建一个FGF1乳腺特异表达载体,用来以后制作FGF1乳腺反应器,从而在转基因牛奶中大量生产FGF1蛋白来满足临床需要。本实验中,我们构建了FGF1乳腺特异表达载体,并且在人的乳腺癌细胞系(MCF-7)中验证了该载体的功能。该载体转染MCF-7细胞后,通过EGFP和puro双重筛选得到细胞克隆,并对细胞克隆进行RT-PCR和western blot分析和细胞增殖测试。表明该载体能够成功的表达人FGF1蛋白,并且表达的蛋白具有促细胞增殖的活性。为了以后制作无筛选标记的转基因动物,我们将两个同向的loxP位点插入到了标记基因(EGFP和puro)的两侧。经EGFP和puro筛选得到的细胞系,在转入Cre重组酶表达载体后,loxP位点间的标记基因被删除,通过FACS系统分析发现转染后EGFP阳性细胞的比例降低,验证了该载体可用于标记基因的删除。此外,在FGF1基因两侧引入了突变的lox位点,用于Cre介导的交换系统。将获得的表达FGF1的细胞系同时转入Cre表达载体和含有tdTomato基因的置换载体,经荧光显微镜观察到呈现红色荧光的细胞,证明tdTomato基因可以通过Cre介导的交换系统替换FGF1基因,说明该载体可以通过Cre介导的交换作用来制作其他基因的乳腺反应器。(本文来源于《吉林大学》期刊2011-05-01）
李彬,鲍文蕾,张涛,侯鑫,郭旭东[8]（2011）在《构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞》一文中研究指出旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEF1基因毛囊特异表达载体pCDsRed-KL。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEF1基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中。(本文来源于《生物技术通报》期刊2011年03期）
彭翔,刘伏友,孙林,李瑛,肖力[9]（2011）在《不同浓度钙离子对人腹膜间皮细胞E-钙黏蛋白、成纤维细胞特异蛋白、波形蛋白表达的影响》一文中研究指出目的:观察钙浓度变化对人腹膜间皮细胞上皮细胞-间充质细胞转分化的影响,探讨腹膜透析中腹膜纤维化的可能机制。方法:以人腹膜间皮细胞永生化细胞株(HMrSV5)为研究对象,予不同浓度钙(0.25、0.75、1.25、1.75、2.25mmol/L)处理细胞48h,以不含钙处理组为对照。采用蛋白免疫印迹和间接免疫荧光染色方法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、成纤维细胞特异蛋白(fibroblast specific protein,FSP1)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:不含钙组HMrSV5细胞基本不表达E-cadherin,极低水平表达Vimentin和FSP1;而予含不同浓度钙离子处理48h后,HMrSV5中E-cadherin先呈剂量依赖性上调,1.25mmol/L组至顶峰,再呈剂量依赖性下降;而Vimentin和FSP1均在1.75mmol/L组HMrSV5中明显升高(P<0.05)并呈剂量依赖性上调。间接免疫荧光染色结果也显示,高钙组Vimentin和FSP1荧光强度比低钙组显着增强。结论:钙离子浓度的变化能诱导人腹膜间皮细胞E-cadherin、FSP1、Vimentin蛋白表达发生变化,提示钙离子可能是参与调控间皮细胞间充质转分化的一个重要因素。(本文来源于《肾脏病与透析肾移植杂志》期刊2011年01期）
马馨,宋光启,陈玥,张鹏,李子义[10]（2010）在《高赖氨酸基因乳腺特异表达载体的构建及其转染奶牛胎儿成纤维细胞的研究》一文中研究指出赖氨酸是大多数谷物的第一限制性氨基酸。对于人类来说,长期食用谷物必然导致赖氨酸的缺乏,造成人体所需氨基酸之间的不平衡,导致代谢紊乱、机体抵抗力下降等。因此,寻找高赖氨酸外源蛋白,补充赖氨酸摄入量的不足,对于机体必需氨基酸的平衡是非常重要的。本实验分别选取牛奶中富含赖氨酸的数种蛋白,将其富含赖氨酸的基因片段拼接在一起形成编码高含量赖氨酸的基因片段,人工合成全长376bp的高赖氨酸基因(HL),插入载体pBluescriptⅡSK(+)中,构建中间载体pBluescriptIISK(+)-HL(3331bp);对该质粒进行酶切鉴定后,得到376bp和2955bp两个片段,回收376bp高赖氨酸基因片段;去磷酸化后,连入乳腺特异表达载体PBC1的多克隆位点,并在载体和片段上分别设计方向鉴定引物检测高赖氨酸基因与载体的连接方向;以PGK-NEO为模板,克隆出真核细胞筛选标记新霉素抗性基因(neo),并将其插入高赖氨酸基因乳腺特异表达载体(PBC1-HL);取50日龄左右的遗传背景清楚的荷斯坦奶牛胎儿,将胎儿材料在70%乙醇中浸洗消毒后剥除胎膜,在DPBS溶液中洗2遍,在超净工作台中去除头、四肢以及内脏部分,在100mm培养皿中将其剪碎,利用胰酶消化,DMEM/high.glucose+10%FBS、38.5℃、5%CO2中培养,冷冻保存备用;利用分离的原代胎儿成纤维细胞,将G418浓度在200-750μg/mL范围内分12个梯度对G418最小致死剂量进行测定,记录G418不同浓度下细胞被全部杀死的天数,以12-14天杀死全部细胞的G418浓度作为最佳筛选浓度;利用fugene HD将线性化的高赖氨酸乳腺特异表达载体转染第二代奶牛胎儿成纤维细胞,并添加G418筛选稳定整合有目的基因的转基因细胞克隆,挑取单细胞克隆,以维持浓度继续筛选;最后获得的转基因细胞克隆,利用PCR的方法对各调控元件及目的基因进行检测。结果表明:获得连有高赖氨酸基因的中间载体pBluescriptⅡSK(+)-HL(3331bp);通过PCR检测及测序分析证明得到了目的基因插入方向正确并连入真核细胞筛选标记neo基因的乳腺特异表达载体PBC1-neo-HL(23.6Kb);通过对本实验分离的原代胎儿成纤维细胞G418最小致死剂量的测定,确定450μg/mL作为转基因细胞克隆的最佳筛选浓度,以200μg/mL作为维持浓度;通过G418筛选,获得转基因单细胞克隆44个,其中生长状态良好并鉴定为阳性的细胞克隆为7株。本实验构建的高赖氨酸基因乳腺特异表达载体及获得的转基因细胞克隆为下一步制作转基因小鼠及通过体细胞核移植技术生产转基因克隆奶牛提供了高效的表达载体及优秀的核供体细胞。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集》期刊2010-08-10）
纤维特异表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了制备重组人GDNF牛乳腺生物反应器,采用组织块贴壁法分离培养雌性牛胎儿成纤维细胞,连续继代培养75d,进行形态观察和染色体分析,在此基础上,转染带有新霉素抗性和红色荧光蛋白双重筛选标记的重组人gdnf乳腺特异表达载体pNR-GDNF,G418筛选阳性抗性克隆,进行PCR法鉴定。结果表明,分离培养的牛胎儿成纤维细胞具有正常的形态、分裂增殖特性和染色体数目;目的基因已整合到转基因细胞的染色体上。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纤维特异表达论文参考文献
[1].刘欢,李文林,陈少芬,吴红,石小玉.与乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-1表达上调及意义[J].南昌大学学报(医学版).2016
[2].虞飞,李斌,张晶晶,丁海麦,张学明.重组人gdnf乳腺特异表达载体转染牛胎儿成纤维细胞的研究[J].生物技术通报.2014
[3].石继红,胡大海,白晓智,官浩,陶克.胶原蛋白特异结合性重组人IL-10的克隆、表达及其拮抗纤维化的初步研究[C].中华医学会烧伤外科学分会2012年学术年会论文汇编.2012
[4].吴治昊,薛超,安星兰,王春生,苗向阳.转肌细胞特异表达MSTN基因RNA干涉序列的小鼠成纤维细胞株的筛选[J].黑龙江畜牧兽医.2012
[5].肖红,高圆,梁伟,高笑宇,汪慧.毛囊特异表达载体pCDsR-UI的构建以及绒山羊胎儿成纤维细胞的体外转染和筛选[J].内蒙古大学学报(自然科学版).2012
[6].王玮,袁建龙,金永,朱兵,岳群华.构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞[J].生物技术通报.2011
[7].周杨.重组人酸性成纤维细胞生长因子乳腺特异表达载体的构建及其功能的验证[D].吉林大学.2011
[8].李彬,鲍文蕾,张涛,侯鑫,郭旭东.构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞[J].生物技术通报.2011
[9].彭翔,刘伏友,孙林,李瑛,肖力.不同浓度钙离子对人腹膜间皮细胞E-钙黏蛋白、成纤维细胞特异蛋白、波形蛋白表达的影响[J].肾脏病与透析肾移植杂志.2011
[10].马馨,宋光启,陈玥,张鹏,李子义.高赖氨酸基因乳腺特异表达载体的构建及其转染奶牛胎儿成纤维细胞的研究[C].中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集.2010
论文知识图
