牛磺酸对乳房链球菌感染引起的氧化应激影响及其机制

论文摘要

[目的]本文旨在探究牛磺酸对乳房链球菌（Streptococcus uberis）感染引起的氧化应激反应的影响及机制。[方法]用70 mmol·L-1牛磺酸（taurine）处理牛乳腺上皮细胞（MAC-T）4 h,加入S.uberis[感染复数（MOI）=10]继续培养3 h,收集细胞;用靶向siRNA干扰牛磺酸的2个转运载体（TauT、PAT1）的表达,再用70 mmol·L-1牛磺酸处理4 h,收集样品。通过Western blot、流式细胞术、试剂盒（ABTS法、TBA法、WST-1法、钼酸铵法等）、免疫荧光等方法,检测Keap1和Nrf2蛋白的表达,活性氧（ROS）和细胞内总抗氧化能力（T-AOC）水平,丙二醛（MDA）含量,超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性及Nrf2蛋白在细胞中的定位。[结果]S.uberis感染能够显著降低T-AOC水平及提高MDA和ROS含量,使SOD和CAT活性显著提高（P<0.05）。与S.uberis感染组相比,牛磺酸预处理后感染细菌显著提高胞内T-AOC水平及SOD和CAT活性,降低MDA和ROS含量,并抑制Keap1的表达,促进Nrf2的表达及入核（P<0.05）;抑制牛磺酸转运载体TauT、PAT1的表达后,Keap1的降低及Nrf2的升高被显著抑制（P<0.05）。[结论]牛磺酸可能通过转运载体TauT、PAT1进入乳腺上皮细胞,并通过激活Keap1-Nrf2信号通路缓解S.uberis感染引起的氧化应激反应。

论文目录

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.2 试验方法

1.2.1 牛乳腺上皮细胞培养

1.2.2 乳房链球菌培养

1.2.3 牛磺酸预处理

1.2.4 乳房链球菌侵染试验

1.2.5 蛋白提取及电泳条件

1.2.6 siRNA转染

1.2.7 流式细胞检测

1.2.8 免疫荧光染色

1.2.9 细胞破碎

1.2.10 生化指标测定

1.3 数据处理与分析

2 结果与分析

2.1 乳房链球菌感染及牛磺酸预处理对细胞内活性氧（ROS）水平的影响

2.2 乳房链球菌感染及牛磺酸预处理对细胞抗氧化水平的影响

2.3 乳房链球菌感染及牛磺酸预处理对Keap1、Nrf2表达的影响

2.4 乳房链球菌感染及牛磺酸预处理对Nrf2表达及其在细胞中定位的影响

2.5 抑制牛磺酸转运对Keap1、Nrf2蛋白表达的影响

2.6 牛磺酸缓解乳房链球菌感染引起的氧化应激机制

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王正磊,周艺琳,周美意,董心仪,臧琦铭,PHOUTHAPANE Vanhnaseng,苗晋锋

关键词: 牛乳腺上皮细胞,乳房链球菌,牛磺酸,氧化应激

来源: 南京农业大学学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 南京农业大学动物医学院

基金: 国家重点研发计划项目(2017YFD0501000),国家自然科学基金项目(31672515)

分类号: S852.4

页码: 491-498

总页数: 8

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牛磺酸对乳房链球菌感染引起的氧化应激影响及其机制

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