王雁军[1]2003年在《外周血淋巴细胞替代肿瘤细胞筛选敏感抗肿瘤药物的可行性研究》文中指出背景：恶性肿瘤是一类危及人类健康的严重疾病。目前对恶性肿瘤的治疗方法主要包括外科手术、放疗和化疗叁种。化疗因强调全身治疗而别于治疗局部性肿瘤的外科手术和放射治疗，是治疗肿瘤的不可替代的方法。然而大量临床及实验研究表明，同样临床分期、同样病理类型、采用相同的化疗方案的肿瘤患者，有着不同的治疗反应及预后；另外，许多肿瘤细胞对化疗药物的敏感性可以随化疗的进行而发生改变。因此个体化疗，即针对不同个体给予不同的化疗方案，受到了重视。尽管利用患者的肿瘤细胞在体外进行敏感药物筛选试验是实施个体化疗的一个很好的方法，但在我国肿瘤患者往往由于多种原因在化疗前也失去了直接利用肿瘤细胞培养筛选敏感化疗药物的机会。因此寻找一种容易获得的、可代替肿瘤细胞进行药物敏感试验的实验标本具有重要意义。 人类基因组计划的完成表明，在同一个体中，其体细胞与肿瘤细胞的基因组相同。尽管不同组织、不同细胞、在不同的条件下蛋白质表达及功能状态有较大的差别，但在相同的外界打击情况下，同宿主的不同细胞应具备相似的抗打击潜能。所以，我们推测同宿主的体细胞与肿瘤细胞对化疗药物的敏感性也应相似，对药物杀伤所产生的反应基本相同。在肿瘤细胞难以获得时，同宿主的外周血淋巴细胞替代肿瘤细胞筛选敏感抗肿瘤药物是可行的。 目的：通过比较同宿主的肿瘤细胞和外周血淋巴细胞对作用机制不同的抗肿瘤药的反应的差异以及相关关系，旨在证明外周血淋巴细胞替代肿瘤细胞进行化疗敏感药物筛选的可行性。 方法：应用MTT法检测表阿霉素、氨甲喋呤、长春新碱、5-氟尿嘧啶、顺铂、卡铂、环磷酰胺以及足叶乙甙8种化疗药物对13例乳腺癌肿瘤细胞的抑制率，检测表阿霉素、氨甲喋呤、盖诺、长春新碱、5—氟尿嘧啶、威猛、顺铂、卡铂、环磷酰胺以及足叶乙甙10种作用机制不同的抗肿瘤药对9例大肠癌细胞的抑制率，观察同类行不同个体对药物反应的差异性。应用MTT法检测表阿霉素、氨申喋岭、盖诺、长春新碱、5一氟尿，嗜陡、威猛、顺铂、卡铂、环磷酞胺以及足叶乙贰10种作用机制不同的抗肿瘤药物对之7例肿瘤患者的肿瘤细胞和外周血淋巴细胞德抑制率，分析同宿主的肿瘤细胞和外周血淋巴细胞对作用机制不同.的抗肿瘤药的反应的差异以及相关关系、 结果:(i)表阿霉素、氨甲喋岭、长春新碱、5二氟尿奄陡、顺铂、卡铂、环磷酞胺以及足叶乙贰1勺种化疗药物对13例乳腺癌细胞的抑制率的乎均值分别为3 1.1538%，32.7692%，46.141石59/0，34、153戮、抵3名4夕拓，多2巧15浑%，54;4615%，40 .2308%，42、61540/0;各种药物的高度敏感率分别为次他欲撇匀，力、1瑰(3/注3)，38.5%(5/13)，7、7%(1/13)，3名、5o/d(5夕13)、53.息喊7/13)、右9.洲(乡之1么)，‘3名、5%’(5/13)、38.5%(夕13))、敏感率分别为3歌5吸5几孙，鞠落喊4/1孙，乌愿与城3八孙、从、3%归13)、61·5%(8/13)，23.1%(3了13)，).79/O，(岌/13)，25.4喊2八3)、驹恐试纷飞3)、耐药率分别为53.8%口/Tl，3)，46.2%(扮13)，23.1%侈/l3)、3t0.既(4/13)、‘d%tD21匀，游‘理吸7/飞:3)，23·1%(3/l3)，23·汉喊夕度3)，30.名%(4/1斗;各组药物的抑制率的标准差分别为13.6405%，13.46仃g叽，之4力之卯叽、 12力石飞3眺、，l么S飞，3右%、之52它右8瑞，加污石乡挥%、26.3加g%，21一663溉:极差分别为的，3梦、舫、妮、肠、黝、右3、叭;幼、表阿霉素、氨甲喋吟、盖诺、长春新碱、占一氟尿吻睫、威猛顺铂、卡铂、坏磷l酞胺以及足叶乙试1勺种作角机制不同一的抗肿瘤药物对乡例大骗癌细胞的乎均抑制率分别为32.867%、，3.s、1:56%、4L4%、力治6沉、秘冬它梦吮、翁、俩拜%，5孰356%、65 .856%，25.278’o/0以及如.站既;高度敏感汾别为的3耽移/9)、的.3%(3为)，44商%(4/9)、55.6o/o(5/9)，“.70/0(6/9)、55.石%口9)，66.7%佰脚，‘77.魏(加)、砧方吮卜/9大敏感率为o%(o/9)，1 1 .1%(1/9)，1 1.1嗽l/9)、11.1%c(1均，公.乏喊之沟)，44耳%讲为)，灯%(份今)，00/6(0/0)，44.4o/o(4/9)、22.2%口沙)，耐药率为石叹7%(6脚，弱..枷诊2夕)、哄典%(如外33.3o/0(3/9)，11.1o/e(1必、既(O陈333%’(〕两、笼煞拭之陈恻卿吻、的万%(3陈抑制率的标准差为勿，6oA，2叭5%，33为%，儿、讯，乃渺九、娇脚珑、翁、飞%、劝治%、1毛%、31 .20/0;极差为甄为，84，的，良，弥、息息、矶一奶、8.0、同类型不同息着的月中瘤细饱对药物的反应有很大的差异性‘(劲表阿霉素、氨甲碟1吟、盖诺、长春新碱、5一氟尿哦健、威猛、顺铂、卡铂、环磷酸胺、足奸乙贰功补作角机布g不同的抗肿瘤药物对之7例’同例患者的肿瘤细胞和琳色细胞对的平均抑制率分别是:肿瘤细饱41.263仑%，41.263心%，33.5初寸饥，24.聪11%、55息容8污%、始.5净S梦残、3女44仑T%、39.78’5八、37.1519%，32名劝概、琳巴细胞细胞扔之乙选协儿、如.3绷%、4e6.3’9招%、18·3481%，37·3481%，41.481%，34.洲%，26.0勿%、肠.乃究吮、4么渔珑琳、上迷仍种作角机制不L同的抗肿瘤药物对27例向例患者的肿瘤细?
尹家俊[2]2003年在《叁氧化二砷对人胃癌细胞端粒酶活性的影响及端粒酶在人胃癌基因治疗中的应用》文中研究说明中国传统医药学在防治肿瘤的历史长河中积累了丰富的经验，其理法方药和各种治则的运用有许多独到之处，这是中西医结合防治肿瘤的主要基础。积极和充分地汲取现代科学技术，包括现代医学的一切先进成果，开展肿瘤扶正培本、活血化淤、清热解毒、化痰去湿、以毒攻毒、疏肝理气等治则与免疫调节、微循环、细胞生物学、分子生物学、生化学、基因工程学等新技术的深入探讨，将对癌症起因机理，防治方法提供可论证数据，以阐明控制癌症发生发展、防止复发转移等方面的理论。以毒攻毒的治则见于我国科学家率先采用砒霜(叁氧化二砷)疗法，在治疗急性早幼粒细胞白血病中已从细胞和分子生物学的角度阐明了作用机理，其制剂亚砷酸注射液被批准为我国二类新药，为美国食品与药品管理局(FDA)正式批准应用。砒霜疗法用于晚期肝癌、淋巴系统肿瘤可能有效，为其它消化道肿瘤、实体癌的治疗带来曙光。 胃癌在我国各种恶性肿瘤中占首位，每年死于胃癌的患者约16万。因此，针对胃癌治疗的研究成为临床和基础研究工作的重点，特别是随着人类基因组计划的完成，基因治疗将成为二十一世纪肿瘤治疗的重点策略。端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白聚合酶，它能以自身的RNA作为模板合成端粒，弥补端粒丢失，对维持端粒长度，使细胞获得永生化起重要作用。端粒酶是迄今发现的一个最为广谱和特异的肿瘤标志物，与细胞衰老、永生化和肿瘤的发生、发展有密切关系。端粒酶之所以能成为肿瘤治疗的新靶点，在于大多数正常组织中没有活性或活性极低，而85％以上的恶性肿瘤具有很高的端粒酶活性。人的端粒酶复合物由多种成份组成，但是端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)却是控制端粒酶活性的关键组分。在细胞永生和肿瘤进展过程中端粒酶的激活需要诱导hTERT的表达。最近的研究报道，hTERT基因与端粒酶活性具有密切的相关性。因此，利用hTERT基因作为肿瘤治疗的靶点，将使基因治疗更具有明确的靶向性。基于此思路，我们首先研究了叁氧化二砷对人胃癌细胞端粒酶活性的影响及可能的作用机制，为叁氧化二砷作为端粒酶抑制剂用于胃癌的治疗提供新的理论依据。其次，我们探讨了端粒酶逆转录酶基因在人胃癌细胞基因治疗中的作用。 论文一 二氧化二砷对人胃癌BGC．823细胞端粒酶的影响 目的研究叁氧化二砷对人胃癌BGC七23细胞端粒酶的影响及可能的作用机制。方法以不同浓度的叁氧化二砷作用于人胃癌BGC七23细胞，通过MTT法测定细胞活力；流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡；IRAP PCR ELISA方法检测细胞端粒酶活性的变化；RTICR半定量方法检测细胞端粒酶hTERT基因InRNA的转录水平。结果叁氧化二砷可明显抑制人胃癌BGC七23细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，引起细胞的端粒酶活性明显下降，显着抑制细胞hTERT基因的转录。结论AsZO3可明显抑制人胃癌BGC七23细胞的增殖，抑制作用随叁氧化二砷浓度的升高及作用时间的延长而增强。AsZO3可抑制BGC七23细胞的端粒酶活性，BGC七23细胞端粒酶活性的下调与AsZO3作用时间和浓度有关，呈现明显的时间一剂量效应关系。叁氧化二砷对人胃癌BGC七23细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现：一是诱导细胞凋亡，另一个是通过下调hTER基因InRNA的转录来下调细胞的端粒酶活性。 论文二 端粒酶反义hTERT基因逆转录病毒载体的构建 目的构建反义人端粒酶逆转录酶（1fir．nx）基因真核表达载体。方法一步法从人慢性髓原白血病细胞株K562细胞中提取总RNA，通过逆转录多聚酶链式反应（RT－PCR）扩增出人端粒酶逆转录酶基因起始密码子至下游长 156个碱基的DNA片断，反向连人逆转录病毒载体pLNCX的限制性内切酶Hnd Ill和 Cel酶切位点上，即构建成htw的反义表达载体，并经酶切鉴定和测序确认。结果测序证明，构建的表达载体中的目的基因正确地反向插入到逆转录病毒载体pLNCX的多克隆位点上。所构建的反义hTERT基因真核表达载体与设计完全一致。结论成功构建了人端粒酶hTER基因反义表达载体，为进一步研究反义hTERT基因转染对胃癌细胞端粒酶及生物学行为的影响奠定了基础。 论文叁 端粒酶反义hTER基因转染对人胃癌细胞系的影响 目的将构建成功的人端粒酶反义hTW基因逆转录病毒载体转染人未分化 胃癌细胞系HGC．27，并观察其对人胃癌细胞生物学特性的影响，探讨反义hTERT基因治疗的可行性。方法通过RT－PCR扩增出人端粒酶hTERT基因起始密码子下游长156hp的cDNA片段，将其反向插入到逆转录病毒载体pLNCX上，构建hTERT基因的反义表达载体，并经酶切鉴定和测序确认。将反义表达载体经脂质体介导转染人未分化胃癌细胞系 HGC．27，通过 Southern blot检测外源反义基因的整合；RTPCR及DNA测序法检测反义基因的转录：RTICR半定量方法检测被封闭目 的基因 InRNA的转录水平；IKM PCR ELISA方法检测细胞的端粒酶活性；流式 2细胞促检测细胞周期变化。结果外源反义hTERT基因已整合到细胞基因组之
张子明, 柴国静, 宋淑霞[3]2019年在《肿瘤相关巨噬细胞的极化及其对肿瘤治疗的影响》文中进行了进一步梳理可塑性和多样性是巨噬细胞的重要特征,根据其功能不同,巨噬细胞被分为经典活化型即M1型,替代活化型即M2型。诱导M1和M2型巨噬细胞分化的条件不同,M1和M2型巨噬细胞的表型及功能也存在差异。在多数肿瘤微环境中存在M2型的巨噬细胞,该细胞通过产生多种细胞因子及蛋白酶参与肿瘤血管形成,并促进肿瘤的增殖及转移。因此,靶向抑制M2型巨噬细胞分化、清除M2型巨噬细胞等措施已成为肿瘤治疗研究的重要领域。本文主要对巨噬细胞的极化、肿瘤微环境对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响及靶向肿瘤相关巨噬细胞的治疗策略进行综述。
参考文献：
[1]. 外周血淋巴细胞替代肿瘤细胞筛选敏感抗肿瘤药物的可行性研究[D]. 王雁军. 大连医科大学. 2003
[2]. 叁氧化二砷对人胃癌细胞端粒酶活性的影响及端粒酶在人胃癌基因治疗中的应用[D]. 尹家俊. 大连医科大学. 2003
[3]. 肿瘤相关巨噬细胞的极化及其对肿瘤治疗的影响[J]. 张子明, 柴国静, 宋淑霞. 中国免疫学杂志. 2019
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