miR-9调控GOLPH3抑制食管癌EC109细胞的增殖和迁移

miR-9调控GOLPH3抑制食管癌EC109细胞的增殖和迁移

论文摘要

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-9在食管癌中的表达水平及其对食管癌细胞生物学功能的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测食管癌患者癌组织及其癌旁组织中miR-9及高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)基因的表达水平;miR-9模拟物转染食管癌细胞系EC109,qRT-PCR检测miR-9的表达水平;MTT试验、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验和流式细胞术检测过表达miR-9对EC109细胞生物学功能的影响。构建野生型和突变型GOLPH3双荧光素酶报告基因载体,并检测荧光素酶活性。qRT-PCR及western blot检测过表达miR-9后,GOLPH3 mRNA和蛋白质的表达水平。结果与癌旁组织相比,食管癌组织中miR-9的表达水平明显降低(P<0.01),而GOLPH3基因表达水平明显升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-9模拟物转染后,食管癌EC109细胞中miR-9的表达水平明显升高(P<0.01),且细胞增殖和迁移能力明显降低(P<0.01),其细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.01)。双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和western blot证实miR-9能与GOLPH3特异性结合(P<0.01),并介导GOLPH3 mRNA的降解(P<0.01),且GOLPH3蛋白的表达水平降低(P<0.05)。结论 miR-9在食管癌中呈低表达,并可通过调控GOLPH3参与食管癌的发生、发展。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 研究对象
  •   1.2 细胞系、试剂和仪器
  •   1.3 细胞培养和细胞转染
  •   1.4 总RNA提取与cDNA合成
  •   1.5 引物设计和实时荧光定量PCR
  •   1.6 MTT试验
  •   1.7 平板克隆形成试验
  •   1.8 Transwell试验
  •   1.9 细胞周期检测
  •   1.10 miR-9靶基因的预测及荧光素酶报告实验
  •   1.11 western blot
  •   1.12 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 miR-9和GOLPH3在组织中的表达水平
  •   2.2 实时荧光定量PCR检测各转染组miR-9的表达水平
  •   2.3 转染miR-9对食管癌细胞增殖能力的影响
  •   2.4 转染miR-9对食管癌细胞迁移能力的影响
  •   2.5 转染miR-9对食管癌细胞周期的影响
  •   2.6 双荧光素酶报告实验结果
  •   2.7 转染miR-9抑制食管癌中GOLPH3的表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 聂正超,施岚,邱广阔

    关键词: 食管癌,微小,高尔基体鳞蛋白

    来源: 临床检验杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 肿瘤学

    单位: 中国科学技术大学附属第一医院检验科

    基金: 安徽省自然科学基金(1808085QH259)

    分类号: R735.1

    DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2019.12.07

    页码: 905-910

    总页数: 6

    文件大小: 1596K

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