miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

论文摘要

目的探讨miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测人支气管上皮细胞HBE、喉鳞状细胞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p、DIAPH2的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-129-5p组(转染miR-129-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-129-5p组(转染anti-miR-129-5p)、si-NC组(转染si-NC)、si-DIAPH2(果蝇形态同系物2,Drosophila Homologue of Diaphanous2,DIAPH2)组(转染si-DIAPH2)、miR-129-5p+pc DNA组(共转染miR-129-5p和pc DNA)、miR-129-5p+pc DNA-DIAPH2组(共转染miR-129-5p和pc DNA-DIAPH2),用脂质体法转染HN4、TU177细胞;Western blot检测细胞中DIAPH2、细胞周期蛋白依赖激酶1(cyclinD1)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cleaved-caspase-9)的蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-129-5p与DIAPH2的结合力。结果与人支气管上皮HBE相比,喉鳞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p表达均显著降低,DIAPH2表达显著升高(P<0.05);过表达miR-129-5p、敲减DIAPH2均可显著抑制HN4、TU177细胞增殖、促进凋亡、下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9;miR-129-5p可抑制野生型DIAPH2细胞的荧光活性,并负向调控DIAPH2的表达;过表达DIAPH2可逆转miR-129-5p对Hep-2细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论 miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向DIAPH2相关,将可为miR-129-5p靶向治疗喉鳞状细胞癌提供新的依据。

论文目录

  • 1资料与方法
  •   1.1 材料。
  •   1.2 方法。
  •     1.2.1 细胞培养。
  •     1.2.2 细胞转染与分组。
  •     1.2.3 qRT-PCR实验检测细胞中miR-129-5p和DIAPH2的表达。
  •     1.2.4 Western blot检测细胞中DIAPH2、cyclinD1、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9的蛋白表达。
  •     1.2.5 MTT法检测细胞增殖。
  •     1.2.6 Annexin V-FITC/PI流式细胞术实验。
  •     1.2.7 双荧光素酶报告基因检测。
  •   1.3 统计学处理。
  • 2结果
  •   2.1 miR-129-5p、DIAPH2在喉鳞癌细胞中的表达。
  •   2.2 过表达miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的影响。
  •   2.3 miR-129-5p靶向DIAPH2。
  •   2.4 敲减DIAPH2对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的影响。
  •   2.5 过表达DIAPH2逆转了miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的影响。
  • 3讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 许雨洲,孙占伟

    关键词: 鳞状细胞,细胞增殖,细胞凋亡,体外研究,果蝇形态同系物

    来源: 中国耳鼻咽喉头颈外科 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 肿瘤学,眼科与耳鼻咽喉科

    单位: 焦作市五官医院耳鼻咽喉头颈外科,河南省人民医院耳鼻咽喉头颈外科

    分类号: R739.65

    DOI: 10.16066/j.1672-7002.2019.12.009

    页码: 668-673

    总页数: 6

    文件大小: 781K

    下载量: 32

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