琼胶酶基因克隆论文_曾鸿俏

导读:本文包含了琼胶酶基因克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,染色体,序列,鉴定,分子,论文,琼胶酶。

琼胶酶基因克隆论文文献综述

曾鸿俏^[1]（2017）在《琼胶降解菌的筛选与琼胶酶基因克隆》一文中研究指出浩瀚无垠的海洋环境中拥有着丰富的自然资源,其中海藻和细菌的种类尤其丰富。海藻中富含许多琼胶,而琼胶寡糖可以被琼胶降解菌降解产出,拥有很广的用途。然而制造琼胶寡糖的技术却是一个急需攻克的技术难题。目前主要采用的是酶水解法和化学法,其中酶水解法反应温和,消耗量少,同时具有专一性和高效性,成为制备琼胶寡糖最常用的方法。本实验室从海洋环境中分离筛选的出3株具有降解琼胶功能的海洋琼胶降解菌,分别编号为FG4、FG7和FG8。在显微镜下观察其形态学特征,并进行革兰氏染色和抗生素抗性实验,结果发现:FG7和FG8均为粘稠状橘红色菌落;在对氨辛青霉素(Ampicillin,Amp)、氯霉素(Chloramphenicol,Cm)、羧苄青霉素(Carbenicillin,Cb)和硫酸链霉素(Streptomycin sulfate,Str)的抗性实验中,FG7 对氯霉素(Chloramphenicol,Cm)和硫酸链霉素(Streptomycin sulfate,Str)具有抗性,FG8对氯霉素(Chloramphenicol,Cm)具有抗性。以细菌鉴定的通用引物1492R和968F对细菌进行鉴定,将获得的目的片段经过电泳检测,回收DNA片断,通过连接转化,选出克隆成功上的连到载体上的,再用T载体引物M13R(-48)和M13F(-47)进行菌液PCR扩增检测。对鉴定的16SrDNA目的片段测序,测序序列通过BLAST比对和同源性分析,初步确定FG7为弧菌属(Vibrio sp.),FG8为产微球茎属(Microbulbifer sp.)。为了进一步研究获取琼胶降解菌Vibrio sp.FG4的基因功能,利用染色体步移法对Vibrio sp.FG4的基因序列进行扩增。首先提取Vibriosp.FG4的总DNA,通过公布的琼胶酶基因序列找出与其具有同源性的基因,寻找这些基因的保守区域序列并进行引物的设计,设计出扩增保守区域的特异性引物,克隆出Vibrio sp.FG4基因的中间保守区域片段,然后利用染色体步移试剂盒提供的AP引物以及针对Vibrio sp.FG4基因组设计的特异性SP引物进行染色体步移,扩增Vibrio sp.FG4的基因片段,对克隆获得的片段进行测序。测序结果得到Vibrio sp.FG4基因的基因片段,命名为“agaFG4-B”。根据生物信息学分析表明,“agaFG4-B”基因大小为1830 bp,编码580个氨基酸,5'端的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)共有6个ORF,理论分子量为64.490 kDa,理论等电点pI值为10.86。通过NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中Blastp比对和构建系统发育树比较分析,结果表明“agaFG4-B”与假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)的CY24 agarB的琼胶酶基因为同一聚簇,具有同源性,因此说明克隆得到的“agaFG4-B”为一种琼胶酶基因片段。结合上文得知通过基因克隆的最新技术,最终得到了 Vibrio sp.FG4的1条琼胶酶基因片断,不仅丰富了琼胶降解菌基因功能的信息,而且为今后琼胶降解菌在工业上的生产应用和全面了解琼胶降解菌的基因功能及后续的表达调控提供了理论依据。同时也促进了琼胶降解菌活性物质的表达调控机制的研究,使得开发利用琼胶降解菌生产功能性寡糖创造了一定的条件,加快了其在工业生产上的应用进程。(本文来源于《海南大学》期刊2017-05-01）

张建美^[2]（2015）在《产琼胶酶微生物的筛选及基因克隆、表达和性质研究》一文中研究指出琼胶是存在于红藻细胞壁多糖间的粘性多糖,是目前世界上应用最广泛的叁大海藻胶之一。琼胶酶(Agarase)是可催化水解琼胶的一类多糖降解酶的总称,在海水养殖业、食品、医药、分子生物学研究等方面中具有非常重要的应用价值。本课题从不同环境中筛选得到40株产琼胶酶微生物,从中获得16条琼胶酶基因片段,且克隆得到一条全长基因并在大肠杆菌中实现异源表达,随后对其酶学性质进行研究。具体实验结果如下:(1)从南日岛鲍鱼养殖场、广西红树林及舟山群岛等地采集的样品中筛选得到40株产琼胶酶微生物;通过形态观察和分子生物学鉴定,这些产酶菌株主要分布在Pseudoalteromonas sp.,Vibiro sp.以及Streptomyces sp.等种属中。(2)设计6对简并引物从25株产琼胶酶菌株中扩增得到16条不同的琼胶酶基因片段。其中包括9条GH50的琼胶酶基因片段,7条GH16的琼胶酶基因片段;从中选取1条来源于Vibrio sp.ZC-1的GH50琼胶酶基因片段序列用于扩增全长基因。利用TAIL-PCR的方法扩增得到Vibrio sp.ZC-1来源的琼胶酶基因,该基因全长2853 bp,编码950个氨基酸,其中1-25位氨基酸为预测的信号肽。(3)成功构建了表达载体pET-agaZC-1,并在大肠杆菌BL21中实现了重组表达。利用亲和层析法纯化重组酶rAgaZC-1,并对其酶学性质进行研究,结果表明:其反应最适pH为7.0,在pH 6.0～8.0的范围内稳定;最适反应温度为40℃,45℃时该酶不稳定,处理10 min以上就完全失活,而低于35℃时则比较稳定;Ca2+、Mg2+、β-ME对该酶活力具有明显的促进作用。酶的动力学研究表明,rAgaZC-1对琼脂底物的Km、Vmax和kcat分别为2.428 mg/mL、36.90μmol/(mg.min)和62.847 s-1。底物特异性研究表明该酶对琼胶底物具有很强的专一性,其降解琼胶的主要产物是新琼二糖和新琼四糖。本课题通过从不同环境中筛选产琼胶酶微生物,并进行基因克隆表达以及酶学特性的研究,旨在寻找新的琼胶酶基因和为琼胶酶的开发应用奠定基础。(本文来源于《福州大学》期刊2015-06-01）

马翠萍,石超^[3]（2007）在《一种新型琼胶酶AgaB的基因克隆及生物信息学分析》一文中研究指出利用从青岛近海发现的一株高产琼胶酶的假别单胞菌CY24(Pseudoaltero-monassp.CY24)建立基因组DNA文库后,用水解圈的方法从中筛选到一个具有琼胶酶活性的阳性克隆pBA1。pBA1的序列分析结果表明,插入DNA片段的长度为6.7 kb,含有4个推测读码框架,并利用亚克隆法确定了琼胶酶的编码基因agaB。agaB基因的开放阅读框架为1 437 bp,编码478个氨基酸,理论分子量为50.9 kDa,在N末端有一个包含38个氨基酸的信号肽。推测的成熟蛋白质的分子量和等电点分别为47.2 kDa和4.83。AgaB的氨基酸序列与已知蛋白质包括所有的糖苷水解酶序列完全没有相似性;HCA的蛋白质二级结构分析结果表明,AgaB不同于其他已知琼胶酶。因此,推测AgaB为一新型的琼胶酶,代表一个新的糖苷水解酶家族。(本文来源于《青岛科技大学学报(自然科学版)》期刊2007年06期）

琼胶酶基因克隆论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

琼胶是存在于红藻细胞壁多糖间的粘性多糖,是目前世界上应用最广泛的叁大海藻胶之一。琼胶酶(Agarase)是可催化水解琼胶的一类多糖降解酶的总称,在海水养殖业、食品、医药、分子生物学研究等方面中具有非常重要的应用价值。本课题从不同环境中筛选得到40株产琼胶酶微生物,从中获得16条琼胶酶基因片段,且克隆得到一条全长基因并在大肠杆菌中实现异源表达,随后对其酶学性质进行研究。具体实验结果如下:(1)从南日岛鲍鱼养殖场、广西红树林及舟山群岛等地采集的样品中筛选得到40株产琼胶酶微生物;通过形态观察和分子生物学鉴定,这些产酶菌株主要分布在Pseudoalteromonas sp.,Vibiro sp.以及Streptomyces sp.等种属中。(2)设计6对简并引物从25株产琼胶酶菌株中扩增得到16条不同的琼胶酶基因片段。其中包括9条GH50的琼胶酶基因片段,7条GH16的琼胶酶基因片段;从中选取1条来源于Vibrio sp.ZC-1的GH50琼胶酶基因片段序列用于扩增全长基因。利用TAIL-PCR的方法扩增得到Vibrio sp.ZC-1来源的琼胶酶基因,该基因全长2853 bp,编码950个氨基酸,其中1-25位氨基酸为预测的信号肽。(3)成功构建了表达载体pET-agaZC-1,并在大肠杆菌BL21中实现了重组表达。利用亲和层析法纯化重组酶rAgaZC-1,并对其酶学性质进行研究,结果表明:其反应最适pH为7.0,在pH 6.0～8.0的范围内稳定;最适反应温度为40℃,45℃时该酶不稳定,处理10 min以上就完全失活,而低于35℃时则比较稳定;Ca2+、Mg2+、β-ME对该酶活力具有明显的促进作用。酶的动力学研究表明,rAgaZC-1对琼脂底物的Km、Vmax和kcat分别为2.428 mg/mL、36.90μmol/(mg.min)和62.847 s-1。底物特异性研究表明该酶对琼胶底物具有很强的专一性,其降解琼胶的主要产物是新琼二糖和新琼四糖。本课题通过从不同环境中筛选产琼胶酶微生物,并进行基因克隆表达以及酶学特性的研究,旨在寻找新的琼胶酶基因和为琼胶酶的开发应用奠定基础。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。