导读:本文包含了大肠杆菌中融合表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:大肠杆菌,蛋白,肠激酶,活性,毒素,黄曲霉,抑菌。
大肠杆菌中融合表达论文文献综述
曾凤娇,杨琳,刘建国,田源,陈靖[1]（2019）在《牙龈卟啉单胞菌血凝集素黏附结构域ha2基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化》一文中研究指出目的在原核表达质粒pET21a-ha2成功构建的基础上,诱导目的基因在大肠杆菌中表达,进行表达产物的纯化及鉴定。方法原核表达质粒pET21a-ha2经PCR鉴定后,转入大肠杆菌Rosetta感受态细胞诱导筛选,经SDS-PAGE电泳检测,IPTG诱导表达。通过包涵体的变复性、Millipore超滤系统的滤浓缩、Ni-TA层析分离纯化HA2蛋白。结果原核表达质粒pET21a-ha2转化大肠杆菌经IPTG诱导后,成功表达HA2蛋白,大小约15 kD,与预计目的蛋白大小相同。HA2纯化蛋白浓度为0.449 mg/mL,经测序与NCBI蛋白数据库比对无突变。结论 pET21a-ha2可在大肠杆菌中成功表达,并成功得到纯化的HA2蛋白。(本文来源于《遵义医学院学报》期刊2019年04期）
李旺,史敦胜,丁轲,曹平华,赵龙妹[2]（2019）在《黄曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大肠杆菌中的融合表达》一文中研究指出通过GenBank公布的黄曲霉毒素分解酶基因序列,合成ADTZ基因引物。从发霉的玉米样品中提取混合菌液,经菌液PCR扩增,筛选ADTZ基因片段,构建表达载体,将目的基因转化到大肠杆菌中,并进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测表达产物大小和浓度。通过酶解试验检测表达产物对AFB1的降解能力。结果成功从发霉玉米混菌悬液中扩增到ADTZ基因,该基因序列全长2 088 bp,与已报道的ADTZ基因相似度达到99%。该基因可在大肠杆菌中进行融合表达,表达产物蛋白大小为118.5 kDa。重组大肠杆菌培养后获得的粗酶液可降解发霉玉米中的AFB1,降解率达到77.69%。(本文来源于《食品与机械》期刊2019年07期）
董萌萌[3]（2019）在《利用SUMO融合技术在大肠杆菌中表达抗菌肽BSN-37》一文中研究指出近年来,随着传统抗生素的不合理使用,致使残留问题日益严重,耐药菌株不断出现。因此,寻找抗生素替代物迫在眉睫。抗菌肽是生物体在抵抗外来微生物入侵时产生的一类防御性小肽,因其独特的优势有望成为抗生素的替代物。由于天然抗菌肽来源有限,从生物体内提取步骤繁琐,获得产量不高;化学合成法虽然可大量获得抗菌肽,但其合成成本相对较高;因此,通过基因工程实现抗菌肽的体外表达是今后的研究重点和发展方向。抗菌肽BSN-37是本实验室具有自主知识产权的牛源抗菌肽,该抗菌肽是由37个氨基酸组成(序列为:FRPPIRRPPIRPPFYPPFRPPIRPPIFPPIRPPFRPP),分子量为3.3 kDa,前期的研究结果发现该抗菌肽具有较好的抗菌活性。为了获得高效的抗菌肽BSN-37,同时克服抗菌肽BSN-37对宿主细菌的破坏作用,本试验采用融合表达的方式,在大肠杆菌中表达具有较好抑菌活性的抗菌肽BSN-37。根据抗菌肽BSN-37的氨基酸序列和大肠杆菌偏爱密码子,反向翻译出其基因片段,合成BSN-37基因,大小为126 bp,并将其克隆至PUC57载体中,命名为PUC-BSN-37。将原核表达载体pGEX-6p-1和目的基因PUC-BSN-37经BamH I和Xho I分别双酶切后,通过T4 DNA连接酶进行连接并转化大肠杆菌DH 5α,构建pGEX-6p-1-BSN-37重组质粒,对重组质粒进行PCR、双酶切以及测序鉴定;将构建好的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经SDS-PAGE和Western Blot检测显示:空载体工程菌在26 kDa处有明显的标签蛋白GST的表达,而含有BSN-37的融合蛋白在30 kDa处表达不明显或表达量很低。为了提高抗菌肽BSN-37表达产量,本研究选择了SUMO分子伴侣在大肠杆菌中表达抗菌肽,以PUC-BSN-37为模板,分别设计含有Xho I和Hind III双酶切位点的上下游引物,扩增出目的基因BSN-37;将融合型表达载体pCold-SUMO与目的基因BSN-37经Xho I和Hind III分别双酶切后,通过T4DNA连接酶进行连接并转化大肠杆菌DH 5α,构建pCold-SUMO-BSN-37重组质粒,并对重组质粒进行菌液PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的阳性质粒pCold-SUMO-BSN-37转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经过对表达条件的优化,摸索出表达的最佳条件。结果显示:终浓度为0.4μM的IPTG在37℃、pH 7.2的条件下诱导6 h,表达效果最好。经SDS-PAGE电泳检测,表达产物是以可溶性形式存在。由于BSN-37的N-端加了His标签,因而利用亲和层析的方法进行目的蛋白的纯化,并通过SDS-PAGE和Western Blot对其表达量进行检测;将纯化后的目的蛋白用SUMO蛋白酶在4℃酶切12 h获得融合蛋白,经过浓缩除盐后再次进行纯化,获得目的蛋白;通过双层琼脂扩散试验对目的蛋白进行活性检测。结果显示:上清液中检测到的目的蛋白约为25 kDa,而标签蛋白大小约为19 kDa,与预期结果相符;酶切后的目的蛋白对沙门氏菌CVCC541具有良好的抑菌活性。综上所述,本研究利用融合技术将抗菌肽BSN-37在大肠杆菌中获得可溶性表达,检测到了相应的抗菌活性,为进一步研究牛源抗菌肽的表达以及开发新型抗菌药物奠定基础。(本文来源于《河南科技学院》期刊2019-06-01）
王京红,于晓甜,唐铭泽,杨洪鸣,唐金宝[4]（2019）在《牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的非融合表达及生物学活性分析》一文中研究指出该研究尝试利用大肠杆菌表达体系以非融合蛋白形式表达牛肠激酶轻链(EK_(LC))。利用基因重组技术构建重组表达载体p6×His-D_4K-EK_(LC)并转化至E. coli DH5α,37℃过夜培养,超声破壁法释放菌体蛋白并收集包涵体,考察包涵体在不同浓度下的复性效率。复性后的目的蛋白经金属离子亲和层析纯化,并以EK_(LC)自切方式移除重组EK_(LC)的N-端6×His-D_4K序列得到具有天然N-端氨基酸序列的EK_(LC),酶活性测定结果显示该研究所制备的重组EK_(LC)高于商品化牛肠激酶。重组EK_(LC)在大肠杆菌中非融合表达成功,为实现EK_(LC)的经济、高效制备研究奠定了实验基础。(本文来源于《药物生物技术》期刊2019年01期）
刘晓阳,刘凌志,李彤,汪建华,张惟材[5]（2018）在《人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的融合表达与纯化》一文中研究指出目的:在大肠杆菌中表达并纯化人铜锌超氧化物歧化酶(HuSOD1)。方法:合成HuSOD1编码基因,PCR扩增后连入pMAL-p5x质粒构建融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,IPTG诱导表达,NBT法测定HuSOD1酶活,利用麦芽糖结合蛋白亲和层析柱纯化MBP-HuSOD1融合蛋白,经因子Ⅹa酶切及分子筛柱层析纯化HuSOD1蛋白。结果:构建了pMAL-p5x-HuSOD1表达载体,在大肠杆菌中实现了高表达,目的蛋白占全菌蛋白的30%,其中可溶性表达占63%,具有超氧化物歧化酶活性;通过亲和层析纯化得到纯度大于95%的融合蛋白MBP-HuSOD1,经因子Ⅹa酶切后纯化得到纯度约90%的HuSOD1蛋白。结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得有活性的MBP-HuSOD1,经进一步酶切、纯化后得到HuSOD1。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2018年05期）
龚国利,张帝,苏鹏,魏媛,王忠忠[6]（2018）在《杂合抗菌肽MT在大肠杆菌中的融合表达》一文中研究指出为了在大肠杆菌中表达杂合抗菌肽Magainin-Thanatin(MT).通过大肠杆菌密码子偏爱性优化两抗菌肽基因序列,SOE-PCR技术构建克隆载体并测序;将其转化至表达菌株Escherichia coli BL21(DE3)中构建基因工程菌,表达产物做抑菌活性分析.结果在本研究中经SOE-PCR拼接后得到了杂合肽片段,成功构建了表达载体pGEX-6P-1-MT;转化后得到了重组菌株pGEX-6P-1-MT/BL21(DE3);获得诱导产物分子质量约3.35kDa;其对大肠杆菌DH5α、金黄色葡萄球菌等均有抑制作用.这表明杂合肽MT可以在大肠杆菌BL21(DE3)中融合分泌表达且具有抗菌活性.(本文来源于《陕西科技大学学报》期刊2018年03期）
王录军,段强德,冯丽丽[7]（2018）在《大肠杆菌热稳定肠毒素Ⅰ和卵清蛋白融合蛋白的表达及免疫原性分析》一文中研究指出为探究大肠杆菌热稳定肠毒素Ⅰ(Heat-stable toxin typeⅠ,STa)和鸡卵清蛋白(Chicken ovalbumin)串联表达的3×STa-ovalbumin重组融合蛋白的免疫原性,原核表达融合蛋白后,经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠,利用ELISA方法测定免疫小鼠血清中抗STa抗体的滴度,应用体外中和试验检测抗体对STa毒素的中和作用。SDSPAGE检测结果显示,融合蛋白分子质量约42 ku;Western blot分析结果显示,融合蛋白可被STa阳性血清特异性识别。小鼠免疫试验结果表明,融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导机体产生的抗STa抗体滴度达到2.33,并且产生的抗体能在体外中和STa的毒性作用。以上结果表明,3×STaovalbumin融合蛋白具有良好的免疫原性。(本文来源于《河南农业科学》期刊2018年04期）
张齐,牛庆昌,姜琳,黄君,马俊[8]（2018）在《非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定》一文中研究指出利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、16h条件下对目的蛋白rSjLys的融合标签Trx-His-S tag进行完全酶切,通过Ni 2+-NTA层析柱纯化得到纯度大于99%的非融合的海参溶菌酶SjLys。实验结果表明,作为i型溶菌酶,与rSjLys比较,非融合海参溶菌酶对指示菌溶壁微球菌具有明显的抑菌作用。(本文来源于《大连工业大学学报》期刊2018年02期）
葛俊伟,宋满满,赵鹏,夏爽,关乃瑜[9]（2017）在《产肠毒素大肠杆菌STa突变体、LTB和STb融合蛋白在乳酸菌中组成型分泌表达及其免疫原性分析》一文中研究指出为获得产肠毒素大肠杆菌(ETEC)抗原STa突变体(mSTa)、LTb和STb融合蛋白在乳酸菌表达系统中组成型分泌表达,本研究将mSTa、LTb、STb叁价抗原融合基因,克隆于p23启动子-USP45分泌信号肽之后,插入到乳酸乳球菌表达载体pTX8048中,构建了重组表达载体pTX-sls,将其电转化到宿主菌乳酸乳球菌L.lactisNZ9000中进行表达,应用westernblot、ELISA方法鉴定蛋白表达情况。将重组乳酸乳球菌pTX-sls/NZ9000口服免疫BALB/c小鼠,分别测定了免疫后不同时间血清中特异性IgG、粪便中特异性的sIgA水平以及血清的中和活性;采用MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测Th细胞免疫类型。结果显示,目的蛋白mSTa-LTB-STb以分泌形式组成型表达,可被阳性血清所识别。在免疫小鼠血清和粪便中均可检测到特异性IgG、sIgA,血清抗体具有一定的中和毒素作用。结果表明,该重组乳酸乳球菌具有作为口服疫苗的潜在应用价值,本研究为研制ETEC乳酸菌活载体口服疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2017年12期）
张文杰,马慧霞,许国强,靳洋洋,杜瑶[10]（2017）在《Thanatin和orf_91鲨肝肽融合基因在大肠杆菌中的表达及重组产物抗菌活性研究》一文中研究指出随着抗生素的广泛使用,耐药性问题日益严重,抗菌肽的高效抗菌作用为解决这一问题提供了可能。抗菌肽是一种阳离子小肽,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌均有较好的抑制作用,但抗菌肽天然含量很低难以满足需求,重组表达常会对宿主菌有危害性。鲨鱼肝脏具有免疫调节、代谢调控等作用,本研究从条纹斑竹鲨的肝脏中筛选众多鲨肝肽,可能具有某些潜在功能。根据抗菌肽等电点高的特点,筛选出等电点与抗菌肽Thanatin相近的鲨肝肽orf_91,将融合基因与本实验室的特殊载体pETduet-His-SUMO相连,通过原核表达的方法将两段多肽融合在一起,以期提高抗菌肽的抑菌效果,并实现抗菌肽的大量表达。本研究最终实验共得到两种重组融合多肽,一种是抗菌肽在融合多肽的N端,另外一种是鲨肝肽在N端。将得到的重组蛋白进行抗菌活性初步分析,通过综合两个浓度组初步得到结论:两种重组蛋白对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抑菌活性比Thanatin高;重组蛋白or_91th对革兰氏阳性菌的MIC小于3.04×10~(-6)mol/L,而Thanatin和重组蛋白,thor_91小对革兰氏阳性菌的MIC大于3.04×10~(-6)mol/L,因此or_91th即抑菌活性最高。由此得,重组蛋白与Thanatin相比较,获得的蛋白表达量质量浓度增加,虽然摩尔浓度降低了,但是在相同摩尔浓度之下,两种重组蛋白的抑菌活性比Thanatin的抑菌活性明显增加,特别是重组蛋白or_91th的抑菌活性大大增加,且在设置的高摩尔浓度下,重组蛋白or_91th的抑菌能力比常用抗生素的抑菌能力强,在低浓度下(3.04×10~(-6)mol/L),重组蛋白or_91th的抑革兰氏阳性菌能力比常用抗生素强,还发现两种蛋白的抗菌活性及表达量均得到了提高,值得进一步研究。(本文来源于《华东地区生物化学与分子生物学学会联合会2017年学术交流会暨安徽省生物化学与分子生物学学会理事会议论文集》期刊2017-10-27）
大肠杆菌中融合表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过GenBank公布的黄曲霉毒素分解酶基因序列,合成ADTZ基因引物。从发霉的玉米样品中提取混合菌液,经菌液PCR扩增,筛选ADTZ基因片段,构建表达载体,将目的基因转化到大肠杆菌中,并进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测表达产物大小和浓度。通过酶解试验检测表达产物对AFB1的降解能力。结果成功从发霉玉米混菌悬液中扩增到ADTZ基因,该基因序列全长2 088 bp,与已报道的ADTZ基因相似度达到99%。该基因可在大肠杆菌中进行融合表达,表达产物蛋白大小为118.5 kDa。重组大肠杆菌培养后获得的粗酶液可降解发霉玉米中的AFB1,降解率达到77.69%。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
大肠杆菌中融合表达论文参考文献
[1].曾凤娇,杨琳,刘建国,田源,陈靖.牙龈卟啉单胞菌血凝集素黏附结构域ha2基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化[J].遵义医学院学报.2019
[2].李旺,史敦胜,丁轲,曹平华,赵龙妹.黄曲霉毒素分解酶基因克隆及其在大肠杆菌中的融合表达[J].食品与机械.2019
[3].董萌萌.利用SUMO融合技术在大肠杆菌中表达抗菌肽BSN-37[D].河南科技学院.2019
[4].王京红,于晓甜,唐铭泽,杨洪鸣,唐金宝.牛肠激酶轻链在大肠杆菌中的非融合表达及生物学活性分析[J].药物生物技术.2019
[5].刘晓阳,刘凌志,李彤,汪建华,张惟材.人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的融合表达与纯化[J].生物技术通讯.2018
[6].龚国利,张帝,苏鹏,魏媛,王忠忠.杂合抗菌肽MT在大肠杆菌中的融合表达[J].陕西科技大学学报.2018
[7].王录军,段强德,冯丽丽.大肠杆菌热稳定肠毒素Ⅰ和卵清蛋白融合蛋白的表达及免疫原性分析[J].河南农业科学.2018
[8].张齐,牛庆昌,姜琳,黄君,马俊.非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定[J].大连工业大学学报.2018
[9].葛俊伟,宋满满,赵鹏,夏爽,关乃瑜.产肠毒素大肠杆菌STa突变体、LTB和STb融合蛋白在乳酸菌中组成型分泌表达及其免疫原性分析[J].中国预防兽医学报.2017
[10].张文杰,马慧霞,许国强,靳洋洋,杜瑶.Thanatin和orf_91鲨肝肽融合基因在大肠杆菌中的表达及重组产物抗菌活性研究[C].华东地区生物化学与分子生物学学会联合会2017年学术交流会暨安徽省生物化学与分子生物学学会理事会议论文集.2017
论文知识图
