α-硫辛酸增强人脐带间充质干细胞免疫抑制作用的实验研究

α-硫辛酸增强人脐带间充质干细胞免疫抑制作用的实验研究

论文摘要

核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, NRF2)是细胞抗氧化应激的关键分子,激活NRF2可以有效逆转干细胞的衰老表型。该文主要研究NRF2激动剂α-硫辛酸(α-lipoic acid, ALA),增强脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)免疫抑制能力。培养第5代和第18代的UC-MSCs,通过β-gal染色、CCK-8及免疫荧光检测细胞增殖能力和衰老表型。Western blot检测衰老相关蛋白p16以及NRF2信号通路相关分子NRF2、Ser40磷酸化的NRF2(pS40-NRF2)蛋白表达。qRT-PCR检测细胞免疫调节抑制因子吲哚胺-2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1, IDO-1) mRNA表达水平的差异,流式细胞术检测UC-MSCs抑制外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)增殖能力的差异。结果显示, UC-MSCs在体外长期扩增过程中增殖能力降低并表现出衰老表型; Western blot检测NRF2及pS40-NRF2蛋白表达降低; IFN-γ依赖的IDO-1的mRNA表达水平显著降低,抑制PBMC增殖能力下降。ALA作用后β-gal染色阳性细胞数量减少并促进细胞增殖; IDO-1的mRNA表达增加以及抑制PBMC增殖的能力增强。该研究结果提示, ALA可以延缓UC-MSCs的衰老,并增强其免疫抑制能力。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要试剂和仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 配置普通培养基、PBMC培养基
  •     1.2.2 实验设计分组
  •     1.2.3 CCK-8细胞增殖检测
  •     1.2.4 β-半乳糖苷酶 (β-gal) 染色
  •     1.2.5 实时荧光定量PCR
  •     1.2.6 Western blot检测
  •     1.2.7 免疫荧光染色
  •     1.2.8 PBMC分离培养
  •     1.2.9 PBMC增殖实验
  •     1.2.1 0 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 UC-MSCs体外长期扩增中伴随细胞增殖能力的降低和衰老表型
  •   2.2 UC-MSCs体外长期扩增中伴随NRF2/ARE通路相关蛋白表达降低
  •   2.3 UC-MSCs体外长期扩增中IFN-γ依赖的IDO-1表达降低
  •   2.4 UC-MSCs体外长期扩增中伴随免疫抑制能力的降低
  •   2.5 NRF2激活剂ALA延缓UC-MSCs衰老并促进增殖
  •   2.6 NRF2激活剂ALA增强UC-MSCs免疫抑制能力
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 章杰,姚欢,吴梦云,李娅莎,杨珂

    关键词: 硫辛酸,脐带间充质干细胞,细胞复制性衰老,免疫抑制

    来源: 中国细胞生物学学报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆市干细胞治疗工程技术研究中心

    基金: 重庆市自然科学基金(批准号:cstc2017jcyjAX0171,cstc2014jcyjA10090)资助的课题~~

    分类号: R329.2

    页码: 867-874

    总页数: 8

    文件大小: 2405K

    下载量: 133

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