牛腺病毒5型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

牛腺病毒5型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

建立针对牛腺病毒5型六邻体(Hexon)基因的实时荧光定量TaqMan PCR检测方法。根据牛腺病毒5型Hexon基因高度保守区设计引物和TaqMan探针,绘制标准曲线,对其灵敏度、特异性、重复性进行验证,建立牛腺病毒5型实时荧光定量TaqMan PCR快速检测方法。结果显示,构建的重组质粒pUC57-BAV5,标准曲线在102~107拷贝数之间有较好的线性关系,相关系数为0.975 2,建立检测方法的最低检测限为32拷贝/μL;应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒、牛呼吸道合胞体病毒无交叉反应;重复性试验表明,同一浓度的20个平行样品的变异系数为1.4%。牛腺病毒5型TaqMan探针荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可以用于牛腺病毒5型的快速、准确的检测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株
  •   1.2 试剂
  •   1.3 引物与探针设计
  •   1.4 BAV-5阳性菌株构建
  •   1.5 荧光定量PCR反应体系
  •   1.6 标准曲线建立
  •   1.7 敏感性试验
  •   1.8 特异性检验
  •   1.9 重复性检验
  • 2 结果
  •   2.1 标准品的鉴定
  •   2.2 荧光定量PCR标准曲线
  •   2.3 荧光定量PCR灵敏度检测
  •   2.4 荧光定量PCR特异性检测
  •   2.5 荧光定量PCR重复性检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 安微,陈世界,王史,张婧,杨苗,薛昌华,余姓鸿,林华

    关键词: 牛腺病毒型,基因,探针,荧光定量

    来源: 畜牧与兽医 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 四川出入境检验检疫局检验检疫技术中心,海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心

    基金: 四川出入境检验检疫局科技项目(SK201703)

    分类号: S852.653

    页码: 101-104

    总页数: 4

    文件大小: 327K

    下载量: 150

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