成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸

论文摘要

克隆来源于Pantoea agglomerans的苯丙氨酸氨基变位酶基因（pam）,构建表达载体,转入大肠杆菌中进行异源表达,采用亲和层析制备电泳纯的重组酶（PaPAM）,用于催化合成β-苯丙氨酸。结果表明:成功克隆得到基因pam,长度为1626bp,编码541个氨基酸长度的PaPAM,构建了大肠杆菌表达载体pET28a-pam,转入E.coliBL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯的重组PaPAM。MS和NMR表征结果表明,重组PaPAM能异构化a-苯丙氨酸为β-苯丙氨酸,在最适条件下（30℃、pH 9、1.5 mol/L NH4+）,酶活力达到2.5 kU/g,在30～50℃、pH 8～10下PaPAM具有较高的稳定性,金属离子Na+、Mg2+、Ca2+、Fe3+对PaPAM的活性影响较小,表面活性剂SDS和Triton100对PaPAM有较强抑制作用,在最佳反应条件下,底物的转化率达到92%。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱龙宝,杨瑾,葛飞,陶玉贵,宋平

关键词: 成团泛菌,苯丙氨酸氨基变位酶,苯丙氨酸,基因克隆,异源表达,生物工程

来源: 精细化工 2019年03期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工

单位: 安徽工程大学生物与化学工程学院

基金: 国家自然科学基金(31671797),安徽省高校自然科学基金(KJ2016A801),安徽工程大学拔尖人才项目(2016BJRC006)~~

分类号: TQ460.4

DOI: 10.13550/j.jxhg.20180834

页码: 449-454+460

总页数: 7

文件大小: 1306K

下载量: 131

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