PO/AH区注入RN-1734对孕酮致大鼠体温升高的影响

PO/AH区注入RN-1734对孕酮致大鼠体温升高的影响

论文摘要

目的:机体的体温是维持内环境稳态的重要因素之一,除病理情况下体温出现明显升高或降低以外,通常还表现出体温的生理性波动,特别是女性在月经周期表现为双相体温的变化,即在卵泡期体温较低,在排卵后基础体温升高约0.3-0.6℃。关于月经周期中黄体期体温升高的机制,通常认为是由于孕酮作用于下丘脑的体温调节中枢,进而改变机体新陈代谢水平或皮肤血流量,但其发挥作用的具体生物学机制还不清楚。瞬时受体电位香草酸受体4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)是瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)蛋白家族成员之一,是位于细胞膜上的一种重要的离子通道,参与体内多种生理功能的调节过程。目前的研究表明,该通道是一种多向的非选择性阳离子通道,可透过Ca2+、K+、Mg2+和Na+,但Ca2+的通透率相对较高。在体内,TRPV4可被多种刺激所激活,包括物理因素(如可被27℃以上的温热刺激激活等)、内源性和外源性化学因素(如特异性激动剂4-α-佛波醇-12,13-二葵酸等)以及低p H值(p H<6)。随着对其温度感受特性和渗透压感受特性的研究,TRPV4已被视为体内的热传感器和渗透压传感器。TRPV4在哺乳动物大多数组织中均有表达,包括心脏、内皮、外周神经系统和中枢神经系统。其中,在中枢神经系统主要表达在下丘脑、海马、皮层等部位。研究发现,在体温调节中枢下丘脑前部(preoptic-anterior hypothalamus area,PO/AH)有TRPV4的表达,且在机体的体温调节过程中,尤其是对正常体温的维持起重要作用。如前所述,孕酮作用于下丘脑体温调节中枢可致黄体期体温升高,而下丘脑PO/AH区的TRPV4通道具有参与维持正常体温的功能。因此,我们推测TRPV4可能是孕激素致体温升高的重要功能靶分子。本研究主要探讨下丘脑PO/AH区TRPV4是否参与雌性大鼠性周期中孕酮致体温升高的过程。研究方法:观察正常雌性SD大鼠动情周期体温及血中孕酮水平的变化;制备去卵巢大鼠模型,给予去卵巢大鼠不同剂量孕酮后观察体温变化;在正常大鼠动情后期在PO/AH区给予TRPV4特异性阻断剂RN-1734,观察大鼠体温的变化。分别给予去卵巢大鼠孕酮和/或RN-1734,观察体温变化;检测大鼠动情周期中PO/AH区细胞膜TRPV4表达水平。采用取大鼠阴道分泌物涂片、HE染色确定大鼠动情周期,无线遥感技术检测各实验条件下大鼠的体温变化,电化学发光法检测血清孕酮浓度,免疫荧光确定TRPV4的表达,Real-time PCR和Western Blot技术检测不同时间点大鼠PO/AH区TRPV4 m RNA和蛋白表达水平。结果:1.在雌性大鼠动情周期的不同阶段,体温变化与体内孕酮水平呈正相关关系。2.在去卵巢大鼠给予不同剂量的孕酮,显示剂量依赖性体温升高。3.正常大鼠动情后期预先在PO/AH区给予TRPV4特异性阻断剂RN-1734,大鼠体温升高的幅度明显下降。4.PO/AH区给予RN-1734能够明显降低预先腹腔注射孕酮的去卵巢大鼠的体温升高幅度。5.正常雌性大鼠动情后期下丘脑PO/AH区中TRPV4 m RNA和蛋白表达量最高。结论:1.孕酮可使去卵巢大鼠体温升高。2.在体温调节中枢PO/AH区给予TRPV4特异性阻断剂,能够降低孕酮致大鼠体温升高的幅度。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 英文缩略语
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  •   2.1 材料
  •     2.1.1 实验动物
  •     2.1.2 试剂
  •     2.1.3 仪器
  •   2.2 方法
  •     2.2.1 大鼠动情周期的观察
  •     2.2.2 大鼠在性周期中的体温变化及孕酮水平检测
  •     2.2.3 不同孕酮水平对去卵巢大鼠体温的影响
  •     2.2.4 在PO/AH区给予RN-1734 后对正常大鼠动情后期体温的影响
  •     2.2.5 在预先给予孕酮的去卵巢大鼠的PO/AH区给予RN-1734 对体温的影响
  •     2.2.6 免疫荧光技术检测PO/AH区 TRPV4 表达
  •     2.2.7 检测PO/AH区 TRPV4 mRNA表达水平
  •     2.2.8 检测PO/AH区 TRPV4 蛋白表达水平
  •   2.3 数据处理
  • 3 结果
  •   3.1 阴道涂片确定大鼠动情周期
  •   3.2 正常雌性大鼠动情周期中血液孕酮水平和体温的变化
  •   3.3 给予去卵巢大鼠不同剂量孕酮后观察体温变化
  •   3.4 在正常大鼠动情后期在PO/AH区给予TRPV4 特异性阻断剂RN-1734,观察体温的变化
  •   3.5 分别给予去卵巢大鼠孕酮和/或RN-1734,观察体温变化
  •   3.6 下丘脑PO/AH区 TRPV4 的表达
  •   3.7 大鼠动情周期中PO/AH区 TRPV4 MRNA表达量
  •   3.8 大鼠动情周期中PO/AH区细胞膜TRPV4 表达水平
  • 4 讨论
  • 5 结论
  • 本研究创新性的自我评价
  • 参考文献
  • 综述
  •   参考文献
  • 攻读学位期间取得的研究成果
  • 致谢
  • 个人简介
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 段雨岑

    导师: 曹宇

    关键词: 孕酮,视前区下丘脑前部,瞬时受体电位香草酸受体,动情周期,体温

    来源: 中国医科大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 中国医科大学

    基金: 国家自然科学基金(No.31340074)

    分类号: Q492

    DOI: 10.27652/d.cnki.gzyku.2019.001149

    总页数: 46

    文件大小: 1830K

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