小鼠cofilin2蛋白的原核表达及纯化

论文摘要

[目的]构建小鼠cofilin2原核表达载体并纯化表达产物。[方法]以胚胎期小鼠心脏组织的c DNA为模板PCR扩增cofilin2基因,经酶切连接表达载体PGEX-4T-1后转化入大肠杆菌E. coli BL21感受态细胞中,利用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达及优化,利用SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝R-250进行染色,检测GST-cofilin2的表达情况。通过谷胱甘肽树脂（Glutathione Resin）亲和层析进行纯化,最后通过Western Blot进行验证。[结果]PCR成功扩增cofilin2基因,双酶切及测序结果表明p GEX-4T-1-cofilin2原核表达载体构建成功,SDS-PAGE鉴定表明,在22℃、200μmol/L的IPTG能诱导出大量可溶性的GST-cofilin2蛋白,分子量为43 k Da。Western Blot验证得到纯化的GST-cofilin2。[结论]成功构建小鼠cofilin2原核表达载体,纯化得到的重组小鼠cofilin2蛋白可用于后续的生物学研究。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 袁白银,刘钟颖

关键词: 原核表达,蛋白纯化,融合蛋白

来源: 生物技术 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 武汉科技大学生命科学与健康学院

基金: 国家自然基金项目(31701266),湖北省自然基金项目(2016CFB172)

分类号: Q786

DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0005

页码: 23-28

总页数: 6

文件大小: 880K

下载量: 318

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