导读:本文包含了高效表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干扰素,黄芩,载体,基因,高效,碳水化合物,蛋白。
高效表达载体论文文献综述
蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳[1]（2019）在《靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建》一文中研究指出性反转是指动物表现的性别特征与其应有的性别相反的现象。性反转小鼠可作为动物模型研究哺乳动物性别分化机制、性别控制技术以及研究人类性别连锁疾病发病机理和防治方法。已有研究证明,在胚胎期敲除雄性小鼠的Y染色体将获得XO基因型的性反转小鼠。本研究设计了6个不同的sgRNA,使共能介导Cas9蛋白作用于小鼠Y染色体上的多拷贝基因—Rbmy(RNA-binding motif gene),通过比较不同的sgRNA介导Cas9对靶序列的切割效率,最终筛选出一条能够高效介导Cas9靶向Rbmy基因的sgRNA6,该sgRNA6在体外切割效率达到100%,细胞内切割突变效率为15.4%,利用该sgRNA6构建了靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体。利用该载体转染小鼠雄性睾丸间质瘤细胞,成功获得了XO基因型的单细胞克隆团。本研究所构建的靶向Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统表达载体可用于小鼠胚胎注射,为获得Y染色体敲除的XO型性反转小鼠模型提供基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年12期）
王朋宝,张晶晶,石菁,王威,曹智[2]（2019）在《抗草甘膦与磷高效吸收基因双价表达载体的构建及对甘蓝型油菜的遗传转化》一文中研究指出【目的】甘蓝型油菜是产油效率较高的油料作物,在其生长过程中往往伴随着土壤环境中磷素匮乏及杂草胁迫,严重影响着最终产量和品质.因此,同时解决有效磷匮乏及草害问题已经成为目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了与草甘膦抗性(eCTP和EPSPS)和磷高效吸收(Pht1;2和phyA)的相关目的基因,随后构建了双价植物表达载体,通过农杆菌介导法转化甘蓝型油菜,对转化植株进行PCR检测筛选,并通过qRT-PCR法对筛选的阳性植株内目的基因的表达进行定量分析.【结果】将PCR扩增得到的片段经琼脂糖凝胶电泳检测,结果符合预期.测序结果也与GenBank注册序列同源性高度一致,可用于后续试验.对转基因油菜进行草甘膦抗性筛选和PCR扩增检测,共获得5株转基因阳性植株.实时荧光定量结果发现转基因阳性植株内phyA和EPSPS基因的表达量均较对照植株有显着提高.【结论】本研究成功构建了抗草甘膦和磷高效吸收基因双价植物表达载体,获得的转基因阳性植株同时兼具草甘膦抗性及磷素高效吸收利用的特性,为培育甘蓝型油菜优良种质资源提供了理论依据.(本文来源于《甘肃农业大学学报》期刊2019年03期）
张晓雪,张晓辉,宋江萍,邱杨,王海平[3]（2018）在《萝卜CRISPR/Cas9高效表达载体系统》一文中研究指出中国是萝卜的起源地之一,拥有丰富的地方品种和种质资源。但是,萝卜是一种再生顽拗型植物,遗传转化困难,制约了萝卜的功能基因组研究和基因工程育种。CRISPR/Cas9是一种广泛应用于人类细胞及动植物的基因编辑工具。但在萝卜中尚无成功的案例报道。为了建立萝卜的基因编辑技术,本研究中构建了3个萝卜特异性CRISPR/Cas9高效表达载体系统。通过序列比对从萝卜基因组中检索U6基因,提取U6基因上游序列,根据U6启动子特征元件确定萝卜U6启动子片段。从萝卜基因组DNA中PCR扩增出2个U6启动子,利用infusion无缝克隆方法替换CP024(中国农业科学院蔬菜花卉研究所崔霞研究员惠赠)载体上的番茄U6启动子,获得2个萝卜U6启动子驱动sgRNA的CRISPR/Cas9载体。随后,在其中一个载体的LB和RB处分别装载甘蓝卷叶病毒(CaLCV)的CR和AL-CR片段,以增强CRISPR/Cas9在植物细胞中的拷贝数。随后,针对萝卜PDS基因设计sgRNA,利用GoldenGate克隆法构建靶向载体,电转农杆菌,侵染萝卜外植体及萌发的种子,并转化拟南芥,检验这3个载体的基因编辑效率。通过测序,证明所构建的3个载体与设计相符。通过调整buffer和优化反应流程,提高了sgRNA的装载效率。利用靶向PDS基因的构建物转化拟南芥,在T0代即可获得具有突变表型的植株。利用该载体侵染萝卜外植体,可获得白色愈伤组织;侵染萌发的萝卜种子,7d后观察到子叶上形成少量白化斑块。通过PCR和酶切检测,获得突变型条带。表明这3个CRISPR/Cas9载体可以在萝卜细胞中实现基因编辑。这套专门针对萝卜设计的高效CRISPR/Cas9表达载体系统将为萝卜基因功能研究、新种质创制以及萝卜与其他物种远缘杂交后的染色体工程研究提供有用的工具。(本文来源于《中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集》期刊2018-10-17）
侯增淼,李晓颖,高恩,杨小琳,赵金礼[4]（2019）在《高效毕赤酵母表达载体的改造与应用》一文中研究指出构建一种可促进外源蛋白在毕赤酵母中高表达的载体,实现在同一载体中外源基因与二硫键异构酶共表达,同时失活YPS1基因。以p PICZαA载体为骨架载体,将酵母YPS1基因C端和N端非功能区序列连接至p PICZαA载体,获得重组载体p PICZαA-YPSΔ;将酵母PDI基因序列连接至p PICZαA载体,获得重组载体p PICZαAPDI,再以重组载体p PICZαA-PDI为模板通过PCR获得PDI表达盒,然后将PDI表达盒连接至重组载体p PICZαAYPSΔ,筛选获得高效表达载体p PICZαA-PDI-YPSΔ。最后,将外源基因HSA、h GH导入此载体,转化毕赤酵母GS115,检测HSA和h GH蛋白的表达。结果显示,高效表达载体p PICZαA-PDI-YPSΔ构建成功,外源蛋白HSA、h GH利用此载体,可获得高表达,具有很好的工业前景。(本文来源于《生物学杂志》期刊2019年01期）
高何瑞[5]（2018）在《几种高效表达载体的构建及基于宏基因组库改造pfLamA葡聚糖酶的研究》一文中研究指出分子克隆是生物技术、遗传学、制药、蛋白质生物化学、结构生物学等领域的重要基础。近年来,随着下一代测序技术(Next-generation sequencing,NGS)的快速发展和应用,产生了大量的基因组信息。为了在功能研究中分析和利用这些重要的基因组信息,需要有效的分子克隆和蛋白质表达工具。现有的克隆和表达载体在克隆效率、表达方式和蛋白纯化方式等方面仍需进一步改进。为此,本研究设计和构建了一系列新型质粒载体,为解决上述难题提供了重要的工具。本研究采用新构建的质粒对激烈火球菌β-1,3-内切葡聚糖酶(pf LamA)基因和里氏木霉内切木聚糖酶(Hj-Xyn)基因进行了分子克隆、异源表达和蛋白纯化。同时还利用新构建载体,通过宏基因组区段改组的方式,对pfLamA进行了分子改造。首先,为了解决现有pET载体克隆效率不够高、容易出现假阳性、克隆位点的选择不够灵活等问题,本研究构建了一种迷你型的新质粒载体pANY2。该载体利用ccdB为负筛选标记,具有更高的克隆效率,而且假阳性率很低。此外,该载体的多克隆位点可以同时满足粘性末端克隆、平末端克隆和重组酶克隆的需要。更重要的是,该酶切位点还含有特殊设计的AhdI酶切位点,可以在实验室自制T载体,进行无背景的TA克隆。另外,该质粒还有T7启动子和组氨酸标签,可以满足蛋白质高效表达和纯化的需要。同时具备上述多种特征,属于国内外首创,这也决定了本质粒具有广泛的应用前景。第二,为了解决目前温度诱导型质粒的克隆效率低的问题,本研究构建了一种包含cIts857-pR/pL温敏调控原件的新质粒载体pANY3,既能显着提高克隆的效率,又可以实现温度诱导型蛋白表达。同时本研究还进一步分析了诱导温度对蛋白质表达水平和酶活力的影响,结果表明,诱导温度对于不同的蛋白的表达水平的影响差异非常显着,因此对诱导温度的优化十分必要。以往研究中多采用42℃固定温度进行诱导表达,而本研究结果对于纠正这一做法有重要的参考价值。第叁,现有的表达载体都只能进行单向表达,对于固定的目的基因来说,一次克隆步骤最终只能得到一个目标重组质粒。本研究构建了一种新型的双向表达质粒,可以通过TA克隆同时获得两个目标重组质粒。这两个目标重组质粒中的目的基因的插入方向相反,在不同的启动子作用下,可以分别实现IPTG诱导表达或温度诱导表达。这样既可以一步平行获得两个克隆,还可以方便的比较两种表达系统对同一个基因的表达效率。这种双向表达载体属于国内外首创,也对相关的研究具有重要的参考价值。第四,常用的基于组氨酸标签的重组酶纯化方法具有成本高的缺点,另外咪唑的使用也常常影响到酶活性。本研究构建了一种新的质粒载体pANY6,既可以进行高效的分子克隆,又可以采用简单的盐沉淀方法实现重组蛋白的纯化。该质粒含有具有自断裂功能的内含肽(Intein)及类弹性蛋白(ELP)的融合标签标签,利用ELP标签可通过沉淀步骤分离融合蛋白,并通过内含肽切去ELP标签。另外,本研究还探索了将ELP沉淀纯化过程与尿素变性、复性纯化包涵体过程相偶联,这样就能够有效避免了传统透析法除尿素的耗时操作。采用这种简便的偶联策略进行pfLamA纯化,最终纯化浓度提高近3倍,而总酶活提高近50%。这一研究结果对于不溶性的重组蛋白的纯化具有特别重要的意义。第五,本研究还采用新构建的克隆载体,采用宏基因组区段改组的方式,对pf LamA进行了分子改造。通过宏基因组16s测序,确定土壤样品的微生物组成,在此基础上通过pfLamA保守区设计简并引物,通过PCR从土壤基因组中获取与pfLamA具有同源性的DNA片段,通过重迭延伸重组全长基因,然后连接到质粒载体上构建突变体库,并进行活性筛选。这种宏基因组区段改组的方法在国内外未见报道,因此,本研究为土壤微生物酶的分子改造提供新思路,同时也验证了新型表达载体在构建突变库方面的有效性。综上所述,本研究设计和构建了一系列新型质粒载体,并在此基础上实现了pf LamA和Hj-Xyn的分子克隆、异源表达、蛋白纯化,和基于宏基因组改组策略的蛋白分子改造。这些新的质粒载体及其相关的研究方法对于同类研究具有非常重要的参考价值,并有望在生物科学、生物技术、农业和食品等领域具有广泛的运用前景。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2018-06-11）
刘奕彤[6]（2017）在《热纤梭菌阿魏酸酯酶的酶学特性分析及其植物高效表达载体构建》一文中研究指出阿魏酸和半纤维素、木质素共价交联形成木质素—阿魏酸—阿拉伯木聚糖复合物,是禾本科植物细胞壁形成坚固抗降解屏障的重要分子基础。在植物中异源表达阿魏酸酯酶(Ferulic acid esterase,FAE),可水解细胞壁中的阿魏酸酯键,促进细胞壁解聚,有效降低木质纤维素降解转化的成本,但目前仍面临转基因的常温FAE酶活性干扰宿主植物生长发育、降低抗逆性等技术挑战,而采用嗜热FAE酶基因进行遗传转化是一种重要的替代策略。本文对一种来源于热纤梭菌(Clostridium thermocellum)的嗜热FAE酶的酶学特性开展了系统的研究,并构建了该嗜热FAE酶编码基因的植物高效表达载体,为培育木质纤维素易降解的新型能源植物奠定了基础,其主要研究结果如下:1)分别克隆了热纤梭菌C.thermocellum XynZ的阿魏酸酯酶催化域(FAE)及该阿魏酸酯酶催化域和碳水化合物结合域(FAE-CBM6)编码基因,与pET22b连接分别构建了原核表达重组质粒pET22b-FAE和pET22b-FAE-CBM6,并在大肠杆菌BL21(DE-3)中实现异源表达,分别获得分子量约为29.0 kDa和45.0 kDa的重组蛋白产物。2)分析比较了温度、pH、底物、金属离子等因子对FAE和FAE-CBM6这两种重组嗜热阿魏酸酯酶活性的影响。结果表明,它们的最适温度分别为60℃和70℃,最适pH值分别为6.0和7.0。FAE酶在pH 5.0-pH 9.0范围内比较稳定,而FAE-CBM6酶在pH 4.0-pH 9.0范围内比较稳定;FAE酶在70℃或75℃下孵育2 h后其相对酶活仍能维持在60%以上,而FAE-CBM6酶在70℃孵育2 h后仍能维持80%以上的酶活。Mn2+和Zn2+对于FAE酶的酶活有促进作用,但Mg2+、Cu2+、Ni2+有抑制作用;而Cu2+和Zn2+对FAE-CBM6酶活有明显抑制作用。在同一反应条件下,FAE-CBM6的酶活一般比FAE的高,说明CBM6结合域的存在对该嗜热阿魏酸酯酶活性有促进作用。3)根据禾本科植物玉米(Zea mays)密码子偏好性对嗜热阿魏酸酯酶的编码基因序列进行了优化,并人工合成了优化后的基因序列,在此基础之上,通过与单子叶植物Ubiquitin强启动子、增强子Ω序列以及不同亚细胞定位信号肽(质外体或内质网定位信号肽)编码序列进行组合,构建了该嗜热阿魏酸酯酶基因的多种植物高效表达载体。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-05-31）
李果明,雷桅,税晓容[7]（2016）在《黄芩CHS基因的分子克隆、序列分析及其高效表达载体的构建》一文中研究指出黄芩是一种传统的中药,黄芩苷是其重要的药用成分之一,具有广泛的药理作用并被用于多种疾病的治疗,具有巨大的药用价值和经济价值。CHS是催化黄芩苷合成限速步骤的关键酶,其表达量对黄芩苷的积累起关键的作用。本研究利用基因工程的手段,构建黄芩的CHS过表达载体,并将其导入根癌农杆菌中,拟在黄芩中持续表达CHS,促进黄芩苷合成。基于NCBI上公布的黄芩基因信息,设计特异引物,通过RT-PCR技术扩增CHS的c DNA全长序列,并利用生物信息学软件对序列进行分析,在引物两端引入特异酶切位点,将目的序列CHS通过限制性内切酶酶切和连接的方式,构建载体p BI 121-35S-CHS。通过PCR和酶切的方法进行验证,获得黄芩CHS基因的高效表达载体,可直接用于黄芩的遗传转化,使CHS基因表达量增加,促进黄芩苷的合成。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2016年10期）
刘晨[8]（2016）在《金属硫蛋白突变体的烟草植物高效表达载体探讨》一文中研究指出金属硫蛋白通常由α和β两个结构域组成,其中α的结构域构成包括Cd~(2+)和Hg~(2+),小鼠突变体则在大肠杆菌中进行搭建,并获得了转基因植株。为了更好地增强外源基因在烟草中的表达效果,可以在基因起始密码子ATG附近融入适合植物需要的碱基组合AACAATG,这种组合有利于将突变体基因插入具有35S强启动子的植物双元表达载体p GPTVd35S-BAR中,并获得αα突变体的植物双元表达载体。在该次研究中,将采用PCR-Southern和蛋白Dot-blotting检测方法,证明αα突变体可以在烟草中良好地表达。同时,在抗重金属的实验中证明转基因烟草能够在Cd400中良好的生长。(本文来源于《科技资讯》期刊2016年12期）
李红,刘成倩,严华祥,王家豪,易建中[9]（2016）在《猪干扰素-δ基因原核表达载体的构建及高效表达》一文中研究指出干扰素(interferon,IFN)因具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性及免疫调节作用而备受关注。本研究根据GenBank上公布的猪IFN-δ核苷酸序列设计1对引物,通过PCR方法扩增出猪IFN-δ基因,片段大小为513bp,并将其克隆到原核表达载体上得到重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌Transetta BL21(DE3)受体菌,经SDS-PAGE电泳分析,结果表明,pET-30a-DsbA-IFN-δ表达量较高,表达的融合蛋白分子质量约20ku,且主要以包涵体形成存在,经Western blotting分析发现表达的融合蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2016年04期）
李红,刘成倩,严华祥,王家豪,易建中[10]（2016）在《猪干扰素-δ基因原核表达载体的构建及高效表达》一文中研究指出干扰素因具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性及免疫调节作用而受到重视。本研究根据GenBank上公布的猪IFN-δ核酸序列设计1对引物,通过RT-PCR方法扩增出猪IFN-δ基因,其大小为513 bp,并将其克隆到原核表达栽体上,得到重组质粒。将重组质粒转化大肠杆茵Transetta BL(DE3)感受态细胞,经SDS-PAGE电泳分析,结果表明pET-30a-DsbA-IFN-δ表达量较高,表达的融合蛋白分子质量约20 kD,且主要以包涵体形成存在,经Western blotting分析发现表达的融合蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。(本文来源于《第叁届规模化养猪新技术国际研讨会论文集》期刊2016-03-09）
高效表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】甘蓝型油菜是产油效率较高的油料作物,在其生长过程中往往伴随着土壤环境中磷素匮乏及杂草胁迫,严重影响着最终产量和品质.因此,同时解决有效磷匮乏及草害问题已经成为目前油菜研究的重要方向.【方法】采用PCR法克隆得到了与草甘膦抗性(eCTP和EPSPS)和磷高效吸收(Pht1;2和phyA)的相关目的基因,随后构建了双价植物表达载体,通过农杆菌介导法转化甘蓝型油菜,对转化植株进行PCR检测筛选,并通过qRT-PCR法对筛选的阳性植株内目的基因的表达进行定量分析.【结果】将PCR扩增得到的片段经琼脂糖凝胶电泳检测,结果符合预期.测序结果也与GenBank注册序列同源性高度一致,可用于后续试验.对转基因油菜进行草甘膦抗性筛选和PCR扩增检测,共获得5株转基因阳性植株.实时荧光定量结果发现转基因阳性植株内phyA和EPSPS基因的表达量均较对照植株有显着提高.【结论】本研究成功构建了抗草甘膦和磷高效吸收基因双价植物表达载体,获得的转基因阳性植株同时兼具草甘膦抗性及磷素高效吸收利用的特性,为培育甘蓝型油菜优良种质资源提供了理论依据.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
高效表达载体论文参考文献
[1].蒋璐蔓,李崇,杨晓峰,彭俏丽,吴珍芳.靶向小鼠Rbmy基因的CRISPR/Cas9系统高效切割位点筛选及其表达载体构建[J].畜牧与兽医.2019
[2].王朋宝,张晶晶,石菁,王威,曹智.抗草甘膦与磷高效吸收基因双价表达载体的构建及对甘蓝型油菜的遗传转化[J].甘肃农业大学学报.2019
[3].张晓雪,张晓辉,宋江萍,邱杨,王海平.萝卜CRISPR/Cas9高效表达载体系统[C].中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集.2018
[4].侯增淼,李晓颖,高恩,杨小琳,赵金礼.高效毕赤酵母表达载体的改造与应用[J].生物学杂志.2019
[5].高何瑞.几种高效表达载体的构建及基于宏基因组库改造pfLamA葡聚糖酶的研究[D].沈阳农业大学.2018
[6].刘奕彤.热纤梭菌阿魏酸酯酶的酶学特性分析及其植物高效表达载体构建[D].江苏大学.2017
[7].李果明,雷桅,税晓容.黄芩CHS基因的分子克隆、序列分析及其高效表达载体的构建[J].基因组学与应用生物学.2016
[8].刘晨.金属硫蛋白突变体的烟草植物高效表达载体探讨[J].科技资讯.2016
[9].李红,刘成倩,严华祥,王家豪,易建中.猪干扰素-δ基因原核表达载体的构建及高效表达[J].中国畜牧兽医.2016
[10].李红,刘成倩,严华祥,王家豪,易建中.猪干扰素-δ基因原核表达载体的构建及高效表达[C].第叁届规模化养猪新技术国际研讨会论文集.2016
论文知识图
