邻苯二甲酸二甲酯（DMP）对斑马鱼（Dauio rerio）的毒性作用机制探究

论文摘要

邻苯二甲酸酯（PAEs）是通常被用于添加在塑料制品中,使塑料变得柔软富有弹性的一类化学添加剂,由于塑料制品和个人护理用品的广泛使用而进入生物体和环境中,近年来由于其在较低的浓度下就能引起一系列机体内反应的内分泌干扰物效应而受到国内外学者广泛的关注。邻苯二甲酸二甲酯（DMP）是PAEs中最常见的一种,也是结构最简单,分子量最小的一种,由于通常认为PAEs的毒性与侧链基团的大小呈正相关,所以对DMP的毒性研究较其他常见PAEs来说相对较少。但DMP已被列为最优先被控制的污染物之一,且DMP在进入生物体后的第一级代谢产物邻苯二甲酸单酯具有更高的毒性,所以应引起关注。斑马鱼作为一种模式生物,由于其种种优越性成为研究毒性机理的优良生物模型。为了进一步探究DMP的毒性作用机制,选用斑马鱼作为生物模型,研究邻苯二甲酸二甲酯在短期急性暴露和长期慢性暴露下,对斑马鱼的毒性作用。在短期急性暴露中测定了DMP的半致死浓度LC50,并分别从蛋白和分子水平上测定了斑马鱼在氧化应激、能量代谢和免疫方面的生物标志物变化。在不同DMP浓度暴露下测定了超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的酶活变化和谷胱甘肽、丙二醛的含量变化,发现随着DMP浓度的升高,SOD、CAT、GSH均呈现先升高后下降的趋势,MDA的含量则先基本不变后又上升。在分子水平上通过实时荧光定量PCR测定了氧化应激、能量代谢和免疫相关基因的表达量变化情况。结果表明,DMP会对氧化应激有关基因的表达量产生影响,从而引起氧化损伤;并会造成有氧糖代谢途径向无氧糖酵解途径转化,同时引起非特异性免疫功能的下降。在长期毒性暴露中,选取30d、60d和90d三个时间点测定了斑马鱼体重的变化,并从分子水平上检测了关于斑马鱼调控甲状腺激素分泌的下丘脑-垂体-甲状腺（HPT）轴相关基因的表达,发现环境浓度下DMP的长期暴露会引起斑马鱼的甲状腺功能的紊乱。

论文目录

摘要

Abstract

第一章绪论

1. 邻苯二甲酸酯概述

1.1 简介及理化性质

1.2 用途、来源和污染现状

2. 邻苯二甲酸二甲酯概述

2.1 简介及理化性质

2.2 邻苯二甲酸二甲酯的代谢

3. 邻苯二甲酸酯的毒性作用研究进展

3.1 邻苯二甲酸酯的环境内分泌干扰物效应

3.2 邻苯二甲酸二甲酯的毒性作用研究进展

3.3 内分泌干扰物研究中的生物标志物

4. 斑马鱼在污染物毒性作用机制研究中的应用

4.1 斑马鱼简介

4.2 斑马鱼作为生物模型的优势

4.3 斑马鱼在环境污染物和内分泌干扰物研究中的应用

5. 研究内容和研究意义

5.1 研究内容

5.2 研究意义及创新点

第二章 DMP急性毒性暴露对斑马鱼抗氧化系统的毒性作用

1. 实验材料与器具

1.1 材料

1.2 主要仪器与设备

2. 试验方法

2.1 半致死浓度（LC50）的测定

2.2 急性毒性暴露试验

2.3 超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽转移酶（GST）活力测定

2.4 丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量测定

2.5 非变性电泳（Native-PAGE）

2.6 总RNA提取和cDNA的合成

2.7 实时荧光定量（Real-time） PCR

3. 实验结果

3.1 半致死浓度（LC50）

3.2 超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽转移酶（GST）活力

3.3 丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量

3.4 SOD酶非变性电泳结果

3.5 总RNA提取电泳检测、内参基因PCR扩增电泳检测和引物PCR检测结果

3.6 氧化应激相关基因实时荧光定量（Real-time） PCR结果

4. 讨论

5. 小结

第三章 DMP急性毒性暴露对斑马鱼能量代谢和免疫反应的毒性作用

1. 实验材料与器具

1.1 材料

1.2 主要仪器与设备

2. 试验方法

2.1 苹果酸脱氢酶（MDH）与乳酸脱氢酶（LDH）非变性电泳检测

2.2 斑马鱼肌肉和粘液总RNA的提取和cDNA的合成

2.3 实时荧光定量（Real-time） PCR

3. 实验结果

3.1 苹果酸脱氢酶（MDH）和乳酸脱氢酶（LDH）非变性电泳结果

3.2 能量代谢和免疫相关基因实时荧光定量（Real-time） PCR检测结果

4. 讨论

5. 小结

第四章 DMP长期暴露下对斑马鱼生长发育的毒性作用

1. 实验材料与器具

1.1 材料

1.2 主要仪器与设备

2. 试验方法

2.1 长期暴露试验过程中的斑马鱼体重测定

2.2 总RNA的提取和cDNA的合成

2.3 实时荧光定量（Realtime） PCR

3. 实验结果

3.1 长期暴露试验下斑马鱼幼鱼的体重变化

3.2 生长发育相关基因RT-PCR结果

4. 讨论

5. 小结

第五章总结与展望

1. 总结

2. 不足与展望

附录

致谢

参考文献

学位论文评阅及答辩情况表

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王露洁

导师: 祝茜,柴迎梅

关键词: 斑马鱼,邻苯二甲酸二甲酯,氧化应激,能量代谢,非特异性免疫,生长发育

来源: 山东大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,环境科学与资源利用

单位: 山东大学

分类号: X171.5

总页数: 62

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邻苯二甲酸二甲酯（DMP）对斑马鱼（Dauio rerio）的毒性作用机制探究

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