牛奶中活沙门氏菌BCAC-EMA-Rti-LAMP快速检测方法的研究

牛奶中活沙门氏菌BCAC-EMA-Rti-LAMP快速检测方法的研究

论文摘要

研究以沙门氏菌的invA基因序列设计特异性引物,结合蒙脱石封闭的活性炭(BCAC)吸附、叠氮溴化乙锭(EMA)前处理牛奶样品,建立了一种基于实时荧光环介导等温扩增法(Rti-LAMP)非预增菌快速检测牛奶中低浓度活沙门氏菌的方法。以每份25 mL牛奶样品,人工模拟不同浓度沙门氏菌污染,用4.0 g蒙脱石封闭的活性炭吸附处理样品,然后对回收精制的细菌样品用4.0μg/mL EMA终浓度作用处理,提取细菌样品DNA用于RtiLAMP扩增检测,该方法检测灵敏度为1×101CFU/mL活沙门氏菌,整个检测过程约5 h。以沙门氏菌国标检测法为参照,采用BCAC-EMA-Rti-LAMP检测生鲜牛奶样品27份,结果显示:2种方法均检测到同一份沙门氏菌阳性牛奶样品,而BCAC-EMA-Rti-LAMP另检测到3份牛奶样品沙门氏菌阳性。研究表明,建立的BCAC-EMARti-LAMP检测方法较国标检测法更灵敏、快速,可用于牛奶沙门氏菌污染的快速检测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌种与试剂
  •     1.1.2 仪器与设备
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 细菌培养
  •     1.2.2 E-Rti-LAMP法
  •     1.2.3 BCAC-Rti-LAMP法
  •     1.2.4 BCAC-EMA-Rti-LAMP法
  •     1.2.5 细菌DNA模板的制备
  •     1.2.6 Rti-LAMP反应
  •     1.2.7 生鲜牛奶样品沙门氏菌污染的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 纯培养沙门氏菌的Rti-LAMP检测方法的建立
  •   2.2 预增菌培养的Rti-LAMP检测模拟沙门氏菌污染的牛奶
  •   2.3 BCAC前处理非预增菌Rti-LAMP检测模拟沙门氏菌污染的牛奶
  •   2.4 基于BCAC-Rti-LAMP法结合EMA检测模拟污染牛奶中活沙门氏菌
  •   2.5 检测生鲜牛奶样品沙门氏菌污染
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张天添,陈鹄,吴国平,舒梅,林丽萍,钟婵

    关键词: 牛奶,沙门氏菌,实时荧光环介导等温扩增法,蒙脱石封闭的活性炭,叠氮溴化乙锭

    来源: 江西农业大学学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 江西农业大学食品科学与工程学院/南昌市农产品加工与质量控制重点实验室

    基金: 国家自然科学基金项目(31560480,31760483),江西省自然科学基金项目(20171ACB20013)~~

    分类号: TS252.7

    DOI: 10.13836/j.jjau.2019139

    页码: 1192-1199

    总页数: 8

    文件大小: 1517K

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