论文摘要
目的克隆、原核表达刚地弓形虫滑行相关蛋白45 （Tg GAP45）基因,检测重组蛋白r Tg GAP45的免疫反应性。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。根据Tg GAP45基因全长编码序列的开放阅读框设计引物,PCR扩增Tg GAP45基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a （+）载体,重组质粒转化至大肠埃希菌（E. coli） DH5α,阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定。将重组质粒pET30a （+）Tg GAP45转化至E.coli BL21 （DE3）感受态细胞,以异丙基βD硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,分别以抗His标签抗体、人抗弓形虫血清或小鼠抗弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）血清为一抗,蛋白质印迹（Western blotting）鉴定重组蛋白免疫反应性。结果刚地弓形虫GAP45基因的cDNA开放式阅读框全长为738 bp, PCR扩增结果显示,在750 bp处有一条特异性扩增条带（带His标签）,与预期大小相符。菌落PCR、双酶切以及测序结果均表明重组质粒pET30a （+）Tg GAP45构建成功。SDSPAGE结果表明,经IPTG诱导获得相对分子质量（Mr）约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析结果显示,诱导表达的蛋白为带His标签的重组蛋白,可分别被His标签抗体、人抗弓形虫血清和小鼠抗弓形虫STAg血清识别。结论刚地弓形虫RH株Tg GAP45基因片段可在原核表达系统中高效可溶性表达,该重组蛋白r Tg GAP45具有免疫反应性。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 李润花,关丽,殷国荣
关键词: 刚地弓形虫,滑行相关蛋白,基因克隆,原核表达,免疫反应性
来源: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年05期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 基础医学
单位: 太原师范学院生物系,临汾市第四人民医院微生物科,山西医科大学医学寄生虫学研究所
基金: 国家自然科学基金（No.81071374）,山西省自然科学基金（No.2013011059-4)~~
分类号: R382.5
页码: 563-567
总页数: 5
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