钱劼靖, 金洁[1]2006年在《干扰素-α联合高三尖杉酯碱下调K562细胞端粒酶逆转录酶及端粒酶活性诱导细胞凋亡》文中研究指明目的:研究干扰素-α(IFN-α)联合高叁尖杉酯碱(HHT)对K562细胞端粒酶逆转录酶及端粒酶的作用,并探讨其与细胞凋亡的关系。方法:IFN-α、HHT以及两药联合作用K562细胞后用MTT法检测细胞增殖,吉姆萨-瑞氏染色观察细胞形态,PI-AnnexinVFITC双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Krupp改良的荧光素标记的端粒重复扩增方法(TRAP)检测K562细胞端粒酶活性,RT-PCR方法检测hTERTmRNA表达变化。结果:5×106U.L-1IFN-α分别联合5-40μg.L-1HHT诱导K562细胞凋亡从而抑制其生长,单用HHT时IC50为27.35μg.L-1,联用5×106U.L-1IFN-α后IC50降为18.72μg.L-1;IFN-α与HHT联用明显下调hTERTmRNA表达并抑制K562细胞的端粒酶活性。结论:IFN-α联合HHT可以诱导细胞凋亡,这可能与下调细胞hTERTmRNA的表达水平,抑制端粒酶活性有关。两药联合作用强于单独用药,提示临床IFN-α联合HHT治疗慢性髓细胞白血病(CML)可能比单用HHT效果更好。
史玉叶, 曹维克, 刘小宁, 邓之奎, 郭华[2]2012年在《干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞增殖及β-catenin基因表达的影响》文中指出本研究探讨干扰素-α(IFN-α)联合高叁尖杉酯碱(HHT)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及β-环联蛋白(β-catenin)基因表达的影响。用IFN-α、HHT单药或两药联合处理后,K562细胞的增殖、凋亡、细胞周期及β-catenin mRNA表达水平分别用MTT法,流式细胞术及RT-PCR方法检测。结果显示,单用HHT能明显抑制K562细胞增殖,诱导凋亡,使细胞阻滞在G0/G1期,β-catenin表达下调,呈时间和剂量依赖性,而IFN-α无此作用。HHT组的β-catenin表达水平为0.5576±0.0373,低于空白对照组(0.9369±0.0142)。IFN-α联用HHT组β-catenin表达较单用HHT组下调更显着(0.3737±0.0529 vs 0.5576±0.0373,P<0.05)。HHT联合IFN-α对正常人骨髓单个核细胞未见明显毒性作用。结论:IFN-α联用HHT可明显增强后者的抗K562细胞作用,而β-catenin表达下调可能为其作用机制之一。
史玉叶[3]2012年在《干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞增殖和β-catenin表达的影响》文中进行了进一步梳理目的观察干扰素-α(Interferon-α, IFN-a)联合高叁尖杉酯碱(Homoharring-tonine, HHT)对慢性髓细胞白血病急红变细胞株K562的体外增殖抑制、凋亡、细胞周期及P-catenin表达的影响。方法采用MTT法检测IFN-α单用和IFN-α联合HHT对K562细胞的增殖抑制作用；采用流式细胞术检测药物单用或联用前后K562细胞的细胞周期分布及凋亡率,RT-PCR及western blot方法检测β-catenin的表达。结果①对细胞增殖抑制作用的影响IFN-a单用时,各浓度组(0,1000IU/ml,2000IU/ml,5000IU/ml和10000IU/ml)对K562细胞均无抑制作用,不同浓度HHT(10ng-100ng/ml之间)分别作用K562细胞24h、48h和72h,经改良寇氏法计算,培养24h,48h,72h的半数抑制浓度(IC50)分别为：80.68ng/ml,56.78ng/ml,35.39ng/ml, HHT对K562细胞具有生长抑制作用,增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。确定HHT的工作浓度及作用时间分别为lOng/ml与48h。IFN-a组,HHT组及两药联合组的细胞增殖活力分别为空白对照组的(100.32±8.65)%、(81.07±5.20)%和(63.51±2.48)%。②对细胞凋亡率的影响5000IU/ml的IFN-α单用、lOng/ml的HHT单用以及上述浓度的两药联合处理细胞48h后,细胞凋亡率分别为(3.52±1.33)%、(43.07±3.62)%和(57.36±3.39)%,均较对照组(1.65±2.41)%显着升高(p<0.05),两药联合组的凋亡率高于IFN-a单用组(p<0.05)和HHT单用组(p<0.05)。③对细胞周期的影响5000IU/ml的IFN-α单用、10ng/ml的HHT单用以及上述浓度的两药联合处理细胞48h后,G0/G1期百分率分别为(48.63+2.36)%、(54.28+1.22)%和(62.54+4.47)%,IFN-a单用组与对照组(48.40±2.32)%无统计学差异(p>0.05),而HHT单药组和联合IFN-a组的G0/G1期百分率均较对照组显着增高(p<0.05),且联用组高于HHT单用组(p<0.05)。④对P-catenin表达的影响5000IU/ml的IFN-α单用、lOng/ml的HHT单用以及上述浓度的两药联合处理细胞48h后,单用IFN-α组表达水平与对照组无统计学差异(p<0.05),HHT单用组和两药联合组的表达水平均低于对照组(p<0.05),而两药联合组的表达水平较单用HHT组为低(p<0.05)。⑤对正常造血细胞的影响5OOOIU/ml IFN-a单用或联用10ng/mlHHT处理正常人骨髓单个核细胞48h后,细胞凋亡率分别为：(3.86+2.19)%,(4.94+2.37)%和(6.91±1.95)%,与空白对照组凋亡率(2.92+1.58)%)相比无统计学意义(p>0.05)。结论IFN-α对K562细胞的增殖、凋亡、Go/G1期阻滞以及β-cateni表达无影响,HHT对K562细胞有显着的的增殖抑制、凋亡诱导、G0/G1期阻滞作用以及抑制β-catenin表达作用,而IFN-a联合HHT对K562细胞的增殖抑制、凋亡诱导、Go/Gl期阻滞以及抑制β-catenin表达的作用明显强于HHT单用组,表明HHT与IFN-α有协同抗CML作用,下调β-catenin表达是其作用机制之一。本研究还证明,在对K562细胞有显着细胞毒作用的浓度时,HHT单用或与IFN-α联用对正常人骨髓单个核细胞无明显毒性作用,这是HHT联合IFN-a可在临床上长期安全使用的理论基础。
钱劼靖[4]2003年在《干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞作用的研究》文中研究表明干扰素-α(Interferon-α，IFN-α)是细胞因子家族成员之一，是一种具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种生物学功能的糖蛋白，目前仍是治疗慢性髓细胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)的首选药物之一。越来越多的临床治疗经验表明，联合生物反应调节剂、细胞毒药物或抗病毒药物可发掘干扰素的治疗潜能、减轻其副作用，但机制未明。高叁尖杉酯碱(Homoharringtonine，HHT)是一种从常绿植物中提取的生物碱，最先由中国学者发现其具有抗急性白血病活性。90年代中期M.D.Anderson癌症中心的研究者将小剂量HHT用于CML患者，获得一定的临床疗效。抑制蛋白质合成被认为是HHT抗白血病活性中最为重要的机制，近年来的研究表明HHT还只有诱导CML细胞凋亡的功能。本研究以CML急变来源的细胞株K562细胞作为研究对象，通过观察IFN-α和HHT联合应用对K562细胞的作用，并研究其可能的作用机理，为CML的临床治疗提供理论依据并拓宽思路。 本实验应用MTT比色法研究IFN-α、HHT以及两药联用对K562细胞的生长抑制作用。结果表明，单用1000IU/ml、5000IU/ml、10000IU/ml和20000IU/ml IFN-α作用K562细胞3天可抑制细胞生长，并随药物浓度的增加抑制作用增强，但统计学无相关性(r=0.805，p=0.195)。5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml和40ng/ml HHT均能明显抑制K562细胞的生长，抑制率分别为14.48％、23.79％、39.16％和69.48％，有非常显着的量效关系(r=0.994，p=0.001)，IC_(50)为27.35ng/ml。各浓度HHT与5000IU/ml IFN-α联合作用K562细胞3天，细胞的抑制率分别为19.57％、43.82％、65.27％和73.77％，生长抑制作用比单用相应浓度HHT时明显增强，差异有非常显着的统计学意义 4fSlrtweEpeMWWrtwert （PHHT。－0．008，pHHTIO、pHHT。0＄lIpHHT40均小T－0，001），HHT 的 IC。。卜降到18．72ng／ml，说明两药可协同抑制 K562细胞的生LC。5000lU／ml IFN－。4 20ng／ml HHT联合作川K562细胞072小时，随作川时间的延K，抑制效果越明显，Y显种止相关 （r＝0．966，厂＝0．034）。 为进一步探讨钓物与诱导细胞凋亡之间的关系，我们采川占姆萨．瑞氏染色对细胞形态结构进行观察，发现5000lU／ml IFN＊。或40ng／ml HHT单独作川 3大的K562细胞，均术出现明显的凋亡，而两者联川的细胞片现典羽的凋亡形态学改变。我们试图川DNA凝胶电泳来进一步说明药物联用的诱导细胞凋亡作川，但在延长作川时间和／或增加 HHT联用剂量的情况卜，屯泳图均米见明显的 DNA梯形条带、川 PI．Annexin V’‘’“双染色，流式细胞仪检测显示，经40ng／ml HHT作川 3大的 K562细胞以坏死为主，凋亡率／坏死率为8．47％／20．12％；而联川 5000IU／ml IFN－口后作川K562细胞3大，凋亡率收｛死率为31．67％／17刀4％，细胞以凋亡为主。结果还显示细胞的凋亡率随着联川的HHT浓度的增加而升高。联合50001UM IF卜。与20ng／M＊＊T作川细胞24、48和刀小时，凋亡率分别为 9．67O、26．92O＄11 70．89O，凋亡率随作川时间的延K而升高。 本研究应川 Krupp改良的荧光素标记的端粒重复扩增方法（TRAP）检测 K562细胞端粒酶活性，RT－PCR方法检测 K562细胞中人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA的表达水平，探讨与药物诱导的细胞凋亡之间的关系。结果表明单川10ng／ml、20nghl和40ng／ml HHT或分别联川 5000IU／ml IFN－a作川K562细胞24小时，能抑制细胞的端粒酶活性，并且联川药物组的抑制作川更强。同时提取细胞的RNA，RT－PCR产物电泳后示K562细胞 hTERT mRNA的表达水平受到不同程度的抑制，与联川的 HHT浓度Y量效关系，抑制作川比单用 HHT更明显。5000IU／mllFN－o与20ng／nil HHT联合作川K562细胞，IITERT IRNA表达水平随作川时间的延K不断卜降。冈此我们认为 IFN－O联合 HHT诱导细胞凋亡可能与h调 hTERT mRNA的表达水平，抑制端粒酶活性有犬，这可能是两者联合治疗 C ML有效的机制之一。 综匠：所述，我们认为①单川HHT、IFN－Q对K562细胞均有个Li抑制作川，HHT对K562细胞的抑制作川存在挝效关系；②5000IU／1ill IFN－（。分别联合 5－40fig／111！HHT对K562细胞的抑制作川比单川相应浓度HHT时增强，几协同仆川，‘。联川的HNT浓度存在挝效犬系：单川H＊T时IC。；；为27．35ng／ml，联川50001L厂。川IFN－u ）厂IC。；；阴为18．72ng八刀1；50001U／ml IFN－。‘J ZOng八nl HNTllX川对K562细胞的抑制什川仟A川＋效大系；③！PN－。。’J HHT收合w川对K 5 62细胞的十K抑制’广SH细胞凋人－／1－义；④IFN－。。’jllHT仰川抑制K562细胞的端料酶恬什；问时］－训1。T【＊T；；；！ZN＊人丛．‘，’时效、汐效人系：。n厂。卜－。。收什1卫1！”晒＃细胞M广＼、侣’J卜u纠＊胞1；＊H｛r；；讯N八的人止水个．抑川仇什卜W恬川－八（，这山。。l能壮仙八叭、川VC卜11。的村＊』卜二 帅八W午例川l1‘广仙
参考文献：
[1]. 干扰素-α联合高三尖杉酯碱下调K562细胞端粒酶逆转录酶及端粒酶活性诱导细胞凋亡[J]. 钱劼靖, 金洁. 中国病理生理杂志. 2006
[2]. 干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞增殖及β-catenin基因表达的影响[J]. 史玉叶, 曹维克, 刘小宁, 邓之奎, 郭华. 中国实验血液学杂志. 2012
[3]. 干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞增殖和β-catenin表达的影响[D]. 史玉叶. 南方医科大学. 2012
[4]. 干扰素-α联合高三尖杉酯碱对K562细胞作用的研究[D]. 钱劼靖. 浙江大学. 2003