仔猪粪便DNA中产气荚膜梭菌主要毒素基因检测及荧光定量PCR计数方法的建立

仔猪粪便DNA中产气荚膜梭菌主要毒素基因检测及荧光定量PCR计数方法的建立

论文摘要

为探究产气荚膜梭菌(Cp)及其产生的β2毒素对7日龄内仔猪腹泻的影响,本试验利用PCR技术对江西不同地区96份仔猪粪样DNA进行分析。首先检测产气荚膜梭菌α、β、β2、ε、ι、CPE毒素基因来推断Cp存在和基因型,然后对不同地区的β2毒素基因全长进行测序比对、MEGA7构建进化树,最后采用荧光定量PCR对携带CpA(β2+)的健康、腹泻样品中的Cp菌数进行测定。结果显示:α毒素基因在健康、腹泻仔猪的检测率分别为85.4%(41/48),81.3%(39/48),β2毒素基因则分别为79.2%(38/48),77.1%(37/48);β、ε、CPE及ι毒素基因未能检测到,综合各分型毒素检测结果,阳性粪样存在的Cp均为A型。β2基因全长除九江地区得到的β2基因在第706~733bp缺失28个碱基,其他地区β2全长序列不多于3个碱基的差异,与GenBank登录号AJ537530.1对应序列同源性最高。携带CpA(β2+)的健康、腹泻粪样同浓度DNA中Cp菌数为104~105 CFU,经SPSS17分析,差异不显著(P>0.05)。结果表明,江西地区的猪源β2毒素基因保守性较高,但仔猪腹泻与β2毒素基因存在与否和Cp菌数没有明显的相关关系,是否与毒素表达有关有待进一步的研究,本试验结果为研究Cp致病机制提供了依据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 参考菌株与病料采集
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 粪样DNA及参考菌株DNA提取
  •   1.4 引物设计合成和毒素基因检测
  •   1.5 粪样中毒素基因的检测
  •   1.6 β2毒素基因扩增及进化树分析
  •   1.7 荧光定量PCR标准品制备
  •   1.8 荧光定量PCR测定粪样总DNA中Cp菌数
  • 2 结果
  •   2.1 毒素基因的检测结果
  •   2.2 β2全长基因引物扩增退火温度与特异性
  •   2.3 β2毒素基因差异性及进化树
  •   2.4 荧光定量PCR与统计学分析结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 韩春生,戴益民,王林康,王婧祺,周姣,张锦华

    关键词: 仔猪,产气荚膜梭菌,毒素基因,毒素,荧光定量

    来源: 中国兽医学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 江西农业大学动物科学技术学院,江西省畜禽疫病诊断与防控重点实验室

    基金: 国家自然科学基金资助项目(31460651),江西省科技支撑计划资助项目(20142BBF6001),江西省教学改革课题资助项目(JXJG-14-3-11)

    分类号: S852.61

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.01.11

    页码: 57-62

    总页数: 6

    文件大小: 1257K

    下载量: 188

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