肺腺癌细胞源性外泌体活化的人THP-1巨噬细胞促进肺癌细胞的侵袭

肺腺癌细胞源性外泌体活化的人THP-1巨噬细胞促进肺癌细胞的侵袭

论文摘要

目的研究肺腺癌细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化的作用及受外泌体作用后的巨噬细胞对肺癌细胞生物学行为的影响。方法提取A549和H1299肺腺癌细胞外泌体, Western blot法检测其表面标志物CD9、 CD63进行鉴定。100 ng/mL佛波酯(PMA)处理人THP-1细胞48 h,实时定量PCR检测细胞CD68的mRNA水平。200μg/mL外泌体处理贴壁巨噬细胞24 h后,实时定量PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 CD163的mRNA水平, IMMULITE 1000化学发光免疫分析仪检测白细胞介素6(IL-6)、 IL-8、 IL-10的蛋白水平;将外泌体处理后的巨噬细胞分别与A549细胞和H1299细胞共培养,通过TranswellTM实验检测肺腺癌细胞侵袭能力,实时定量PCR检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、 MMP9的mRNA水平。结果 CD9、 CD63在外泌体高表达, PMA诱导后的巨噬细胞高表达CD68,外泌体处理后的巨噬细胞iNOS表达降低, CD163、 TNF-α、 IL-6、 IL-8、 IL-10表达水平均增加;外泌体处理后的巨噬细胞与肺腺癌细胞共培养,可增强肺腺癌细胞的侵袭能力并促进MMP2、 MMP9的表达。结论肺腺癌细胞来源的外泌体可以诱导巨噬细胞极化,表现为M1/M2的混合表型,进而增强肺癌细胞的自身侵袭能力。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 THP-1细胞培养及PMA诱导
  •     1.2.2 外泌体提取
  •     1.2.3 外泌体鉴定
  •     1.2.4 化学发光法检测IL-6、 IL-8和IL-10的水平
  •     1.2.5 实时荧光定量PCR检测TGF-β、 TNF-α、 基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9, MMP9)、 MMP2、 iNOS、 CD68、 CD163的mRNA水平
  •     1.2.6 外泌体活化后的巨噬细胞分别与A549和H1299细胞TranswellTM共培养
  •     1.2.7 TranswellTM共培养后细胞侵袭实验
  •     1.2.8 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 肺腺癌细胞来源的外泌体高表达CD9和CD63
  •   2.2 PMA 诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞
  •   2.3 外泌体处理巨噬细胞的形态发生改变且TNF-α、 IL-6、 IL-8、 IL-10分泌增加
  •     2.3.1 外泌体处理的巨噬细胞形态发生变化
  •     2.3.2外泌体对巨噬细胞的极化变化
  •   2.4 外泌体处理的巨噬细胞增加肺腺癌细胞的侵袭能力并促进MMP2、 MMP9的表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈良远,杨阳,黄春莉,曹鹏驹,吴秋妹,陈少婷,陈发林

    关键词: 肺癌,外泌体,巨噬细胞,侵袭,细胞

    来源: 细胞与分子免疫学杂志 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 肿瘤学

    单位: 福建医科大学省立临床医学院福建省立医院检验科,甘肃省人民医院检验中心

    基金: 福建省自然科学基金(2017J0105),福建省卫生计生委中青年骨干人才培养项目(2018-ZQN-08)

    分类号: R734.2

    DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.008884

    页码: 967-972

    总页数: 6

    文件大小: 1850K

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