导读:本文包含了本地毛形线虫论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:线虫,旋毛虫,蛋白,杂交瘤,基因,序列,杆状。
本地毛形线虫论文文献综述
郑宝亮,边传周,王秀荣,宋铭忻[1]（2010）在《本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析》一文中研究指出为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取T.nativa肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的T.spiralis相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为T.nativa49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2010年10期）
李冬梅,王秀荣,路义鑫,马广鹏,花丽茹[2]（2008）在《本地毛形线虫49 ku ES蛋白结构基因在昆虫细胞中的表达》一文中研究指出根据BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统的供体质粒,设计表达引物,从克隆质粒上扩增本地毛形线虫(Trichinella nativa)49kuES结构蛋白基因TNPG,酶切后与供体质粒连接,在大肠杆菌中克隆,将克隆有外源基因的供体质粒转化DH10Bac感受态菌,该菌含有杆状病毒穿梭载体,供体质粒中的外源基因在辅助质粒编码的转座酶作用下,通过转座而插入杆状病毒基因组中,筛选含有重组质粒的Bacmid DNA,用脂质体介导法转染昆虫细胞获得重组病毒。SDS-PAGE电泳显示表达蛋白为36ku的融合蛋白,Western blot检测表明表达的融合蛋白能够被小鼠旋毛虫的阳性血清识别。实验结果表明,本地毛形线虫的ES融合蛋白的制备将在诊断方法的建立和免疫研究方面具有很好的应用前景。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2008年12期）
韩周,姜曰晓,李继红,肖文左,宋铭忻[3]（2008）在《本地毛形线虫49ku ES重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究》一文中研究指出目的研究本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白对小鼠的免疫保护作用。方法以表达的本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白免疫小鼠,共免疫3次。末次免疫后10d,每只小鼠攻击感染200条本地毛形线虫感染性肌幼虫,检测本地毛形线虫7日龄成虫数、雌虫体外产新生幼虫数以及感染35d肌幼虫数,并且计算减虫率,应用自制的ELISA方法测定各组小鼠血清抗体OD值。结果成虫减虫率、新生幼虫减虫率、肌幼虫减虫率分别为9.4%、70.2%和71.3%,免疫组血清抗体水平远远高于佐剂对照组和感染对照组(P<0.01)。结论本地毛形线虫肌幼虫49ku ES重组蛋白诱导小鼠产生较好的抗本地毛形线虫的保护性免疫。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2008年02期）
袁金钱,路义鑫,韩彩霞,宋铭忻[4]（2007）在《本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析》一文中研究指出根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物,用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增了HSP70基因,将目的基因克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ进行单、双酶切鉴定。测序结果表明,成功克隆了本地毛形线虫HSP70基因。序列分析表明,HSP70基因比较保守,不同物种之间氨基酸的同源性在40%~80%。与布氏旋毛虫HSP70序列相比,CDS区多出9个碱基,但核苷酸序列和氨基酸同源性分别为98%和94%,存在1个糖基化位点和1个潜在的信号肽位点。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2007年12期）
姜曰晓,路义鑫,王君,宋铭忻[5]（2007）在《本地毛形线虫49 Ku ES重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出采用纯化的本地毛形线虫49KuES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株制备腹水。获得两株稳定分泌抗重组蛋白McAb的杂交瘤细胞株D5和C1。试剂盒鉴定两株McAb均属IgM亚类,其轻链均为K链;间接ELISA检测细胞培养液上清和腹水效价,结果显示,两株细胞培养液上清均达到1∶1.28×10~3,腹水效价均达到1∶1.28×10~4;Westetrn blot结果表明,获得的两株McAb均能特异性的识别约49Ku处的ES抗原;间接ELISA结果显示两株McAb与日本血吸虫成虫、猪囊尾蚴囊液、猪蛔虫、猪鞭虫抗原均无交叉反应,表明两株McAb特异性良好。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2007年11期）
郑宝亮,王秀荣,路义鑫,李冬梅,闫清波[6]（2007）在《本地毛形线虫49 Ku ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达》一文中研究指出提取Trichinella nativa(T.nativa)肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa 49 Ku ES蛋白的结构基因。基因克隆后测序,序列测定结果表明:目的基因TNPG长度为951 bp,核苷酸序列同已发表的Trichinella spiralis(T.spiralis)相应的序列P49同源性为97.68%,所推导的氨基酸序列同源性为95.24%。将目的基因TNPG插入到原核表达载体pET-30a的BamHⅠ酶切位点处,并转化到感受态表达菌中进行诱导表达。结果显示TNPG在原核表达菌BL-21中获得了高效表达,表达产物为40.8 Ku的融合蛋白,表达量达到菌体总蛋白的22.8%。通过Western blot分析,表达产物可以被小鼠T.nativa和T.spiralis阳性血清以及它们的中国地理株的小鼠血清特异性识别。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2007年07期）
郑宝亮,付守申,郜相君,马辉,郑鸣[7]（2007）在《利用改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA》一文中研究指出利用胃蛋白酶消化小鼠肌肉,获取了旋毛虫种本地毛形线虫(T.nativa)的肌幼虫虫体。利用TRIZOL混合虫体直接提取肌幼虫的总RNA,通过分光光度计Ultrospec 3000检测结果,以及用RT-PCR方法扩增出了编码T.na- tiva 49 kDa的ES蛋白结构基因,后续试验结果显示改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA效果很理想。(本文来源于《郑州牧业工程高等专科学校学报》期刊2007年02期）
姜曰晓[8]（2007）在《本地毛形线虫49ku ES重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病，其分布几乎遍及全球各地。该病不仅严重危害人体健康，而且还给畜牧业及食品工业带来重大的经济损失，所以及时准确的诊断并治疗旋毛虫病显得至关重要。鉴于旋毛虫病的危害性，研制敏感性高、特异性强的旋毛虫病诊断试剂和保护性高的基因工程抗体，对于防治旋毛虫病有重要的实际意义。本研究选用pET-30a表达载体表达本地毛形线虫49ku ES抗原，利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，为建立检测旋毛虫循环抗原方法和旋毛虫病早期诊断试剂盒及基因工程抗体的研制提供理想、必备的试验材料。利用本地毛形线虫49ku ES重组蛋白免疫Balb／C小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株，制备腹水进行纯化。采用间接ELISA方法测定杂交瘤细胞上清液和小鼠腹水效价；用Southern Biotechnology Associates，Inc的SBA Clonotyping~(TM)System／AP对单克隆抗体进行亚类鉴定；Dot-ELISA和Western blot试验检测单克隆抗体的特异性；间接ELISA方法检测单克隆抗体与日本血吸虫成虫抗原、猪囊尾蚴囊液抗原、猪蛔虫抗原、猪鞭虫抗原是否存在交叉反应。结果表明：获得两株抗ES49ku ES重组蛋白杂交瘤细胞株，分别命名为D5和C1；两株杂交瘤细胞上清液和腹水效价均达到1∶1280和1∶12800；均能稳定分泌敏感性强高、特异性强高的IgM类McAb，轻链为κ链；两株单克隆抗体均能特异性识别约49ku处的24h ES抗原；且不与日本血吸虫成虫抗原、猪囊尾蚴囊液抗原、猪蛔虫抗原、猪鞭虫抗原反应发生交叉反应。单克隆抗体的获得为旋毛虫病的研究和建立检测旋毛虫循环抗原方法奠定了基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2007-04-05）
韩周,路义鑫,宋铭忻[9]（2006）在《本地毛形线虫49ku ES重组蛋白ELISA检测方法建立及免疫保护作用》一文中研究指出鉴于旋毛虫病的危害性,研制敏感性高、特异性强的旋毛虫病诊断试剂,以及保护性高的旋毛虫病疫苗,对于防治旋毛虫病有重要的实际意义。旋毛虫感染过程中ES抗原直接暴露于宿主的免疫系统,是诱导宿主产生免疫反应的主要靶抗原。在旋毛虫病的免疫病理、免疫诊断及免疫预防方面具有重要作用。本试验利用pET-30a表达载体,成功地表达了本地毛形线虫49 ku ES结构蛋白,SDS-PAGE分析表明:该重组融合蛋白分子量大约是40．8 ku,该蛋白以包涵体的形式存在,并且诱导4 h左右,表达量达到高峰。Western blot 分析表明,该蛋白可被小鼠本地毛形线虫阳性血清特异地识别,提示该融合蛋白可以作为诊断和预防旋毛虫病的良好抗原。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集》期刊2006-08-01）
宋铭忻,路义鑫,孙光,田松,郑宝亮[10]（2004）在《本地毛形线虫ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达》一文中研究指出旋毛虫病是一种流行于世界各地的重要人畜共患寄生虫病。旋毛虫肌幼虫ES 抗原来源于体外培养的旋毛虫肌幼虫的排泄分泌物中。作为检测抗原,它具有灵敏度高和特异性强等特点:作为免疫原,它可以诱导动物产生较强的免疫保护力,因此具有双重的免疫学功能。但由于来源困难而限制了它的研究和利用。针对这一问题,本实验用重组DNA 技术从本地毛形线虫(Trihinella nativa,T2)中分得49ku 抗原的编码基因片段并进行克隆、表达及检测。通过对T2肌幼虫收集后的体外培养及ES 蛋白抗原性的分析,确定了旋毛虫ES 抗原可以引发较强的特异性免疫反应。根据ES 抗原基因序列设计并合成了一对PCR 引物。利用加Trizol 研磨提取T2的总RNA 并利用紫外分光光度计测定样品总RNA 含量后,用RT-PCR 方法分别扩增出了T2的目的基因TNPG。将PCR 产物与pMDl8-T 载体连接并经过大肠杆菌增殖后送检测序。序列分析结果表明:扩增出的目的基因TNPG 长度为95Ibp,核苷酸序列同已发表的旋毛形线虫(Trihinellaspiralis,T1)的序列有一定的差异;同源性分析表明,二者核苷酸序列同源性为98.63%,推导氨基酸序列同源性为99.054%。从克隆载体上切下目的基因后,将之插入到原核表达质粒pET-30a的BamHl酶切位点处,将重组原核表达质粒pET-30a-TNPG 转化到BL-21感受态表达菌中。经IPTG诱导表达,超声波裂解及处理表达菌后,用SPS-PAGE分析表达产物。结果表明:TNPG 基因在原核表达菌BL-21中获得了高效表达,表达产物为40.8KDa 的融合蛋白,表达量达到菌体总蛋白的22.8%。通过Western blot 分析,证明其表达产物可以被鼠旋毛虫病阳性血清特异性识别。本实验揭示,在大肠杆菌中表达的T249ku 重组蛋白,是研制旋毛虫基因重组抗原良好的侯选抗原。其在旋毛虫病的检测和免疫方面具有潜在的开发和应用价值。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集》期刊2004-11-01）
本地毛形线虫论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统的供体质粒,设计表达引物,从克隆质粒上扩增本地毛形线虫(Trichinella nativa)49kuES结构蛋白基因TNPG,酶切后与供体质粒连接,在大肠杆菌中克隆,将克隆有外源基因的供体质粒转化DH10Bac感受态菌,该菌含有杆状病毒穿梭载体,供体质粒中的外源基因在辅助质粒编码的转座酶作用下,通过转座而插入杆状病毒基因组中,筛选含有重组质粒的Bacmid DNA,用脂质体介导法转染昆虫细胞获得重组病毒。SDS-PAGE电泳显示表达蛋白为36ku的融合蛋白,Western blot检测表明表达的融合蛋白能够被小鼠旋毛虫的阳性血清识别。实验结果表明,本地毛形线虫的ES融合蛋白的制备将在诊断方法的建立和免疫研究方面具有很好的应用前景。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
本地毛形线虫论文参考文献
[1].郑宝亮,边传周,王秀荣,宋铭忻.本地毛形线虫49ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析[J].动物医学进展.2010
[2].李冬梅,王秀荣,路义鑫,马广鹏,花丽茹.本地毛形线虫49kuES蛋白结构基因在昆虫细胞中的表达[J].中国预防兽医学报.2008
[3].韩周,姜曰晓,李继红,肖文左,宋铭忻.本地毛形线虫49kuES重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究[J].中国兽医杂志.2008
[4].袁金钱,路义鑫,韩彩霞,宋铭忻.本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析[J].中国兽医科学.2007
[5].姜曰晓,路义鑫,王君,宋铭忻.本地毛形线虫49KuES重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J].中国预防兽医学报.2007
[6].郑宝亮,王秀荣,路义鑫,李冬梅,闫清波.本地毛形线虫49KuES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达[J].中国预防兽医学报.2007
[7].郑宝亮,付守申,郜相君,马辉,郑鸣.利用改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA[J].郑州牧业工程高等专科学校学报.2007
[8].姜曰晓.本地毛形线虫49kuES重组蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[D].东北农业大学.2007
[9].韩周,路义鑫,宋铭忻.本地毛形线虫49kuES重组蛋白ELISA检测方法建立及免疫保护作用[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集.2006
[10].宋铭忻,路义鑫,孙光,田松,郑宝亮.本地毛形线虫ES蛋白结构基因的分子克隆及原核表达[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集.2004
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