抗布鲁氏杆菌OMP28卵黄抗体的制备及评价

抗布鲁氏杆菌OMP28卵黄抗体的制备及评价

论文摘要

为了获得抗布鲁氏杆菌的特异性卵黄抗体,试验采用人工合成基因的方法获得含布鲁氏杆菌omp28基因的质粒,通过酶切、连接将目的基因与pET-32a载体进行连接,构建重组质粒pET-32aomp28,重组质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达,将得到的重组蛋白用Ni亲和柱纯化,然后用其免疫产蛋鸡,通过间接ELISA检测免疫抗体效价,并用Western-bolt验证抗体结合力。结果表明:布鲁氏杆菌omp28基因得到表达,并获得了抗布鲁氏杆菌OMP28的特异性卵黄抗体IgY,在五免后抗体效价可达1∶16 000,经Western-bolt验证有目的条带出现。说明获得的特异性抗体IgY与OMP28蛋白有较强的结合力。

论文目录

  • 1 材料
  • 2 方法
  •   2.1 pET-32a-omp28表达质粒的构建和鉴定
  •   2.2 重组菌的诱导表达
  •   2.3 重组蛋白的纯化及浓度的检测
  •   2.4 产蛋鸡的免疫
  •   2.5 特异性卵黄抗体IgY的提取
  •   2.6 IgY抗体效价的检测
  •   2.7 特异性抗体的纯化及鉴定
  • 3 结果与分析
  •   3.1 表达载体的构建
  •   3.2 重组蛋白的诱导表达
  •   3.3 重组蛋白的纯化及浓度的检测
  •   3.4 抗体效价的测定
  •   3.5 IgY抗体的纯化
  •   3.6 Western-blot验证与抗原的结合能力
  • 4 讨论
  • 5 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨艳丽

    关键词: 布鲁氏杆菌,基因,卵黄抗体,原核表达,蛋白纯化,间接

    来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年14期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 新疆农业大学动物医学院

    分类号: S852.4

    DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.09.0193

    页码: 136-139

    总页数: 4

    文件大小: 211K

    下载量: 85

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