论文摘要
核酸适配体具有类似蛋白抗体的性质,在靶标特异性识别与检测中引起越来越广泛的关注。小分子物质通常与环境污染和人类健康密切相关,然而小分子物质与核酸文库在性质上差异较小,在筛选过程中没有足够的活性位点,难以固定,因而其核酸适配体筛选难度更大。本研究采用体外合成一条生物素修饰的碱基序列,通过氢键与随机文库3′-末端进行互补配对,将其固定在链霉亲和素修饰的纳米磁珠上。随后,加入不同浓度的百草枯靶分子孵育,洗脱得到百草枯特异性的亲和性ssDNA,对其进行非对称PCR扩增后,得到下一轮筛选所需的富集ssDNA库。经过9轮筛选后,将所得亲和性ssDNA进行克隆测序,最终得到15条百草枯的亲和ssDNA序列。对亲和性序列进行聚类分析和二级结构预测,再根据同源性等条件从中筛选出6条ssDNA序列进行亲和力测定。结果表明,PQ-15序列对百草枯的亲和力最高,解离常数（Kd）为（54±4） nmol/L。最后,利用PQ-15核酸适配体作为百草枯的识别分子,以阳离子化合物聚集的纳米金作为传感信号,建立了基于核酸适配体识别的百草枯农药比色检测方法,检出限为25.2 nmol/L,其它竞争性分子对百草枯检测无明显干扰,实际样品中百草枯的加标回收率为91.1%～99.6%。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 冉旭东,吴远根
关键词: 核酸适配体,百草枯,筛选,比色检测,纳米金
来源: 分析化学 2019年04期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技
专业: 化学,有机化工,植物保护
单位: 贵州大学贵州省发酵工程与生物制药重点实验室,贵州大学酿酒与食品工程学院
基金: 国家自然科学基金项目(Nos.21565009,31760486),贵州省科学技术基金项目(黔科合基础[2016]1403号),贵州省教育厅招标项目(黔教合KY字[2014]261号)资助~~
分类号: O657.3;TQ450.263
DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.191013
页码: 567-575
总页数: 9
文件大小: 4075K
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