猪Hsp40基因过表达与干扰重组慢病毒载体的构建

论文摘要

热休克蛋白40（Hsp40）作为Hsp70蛋白的分子伴侣,在病毒生命周期中扮演重要角色,笔者拟通过慢病毒感染技术分别建立Hsp40基因过表达和沉默的猪肺泡巨噬细胞系,为以后开展猪Hsp40蛋白调控猪圆环病毒2型（PCV2）复制的机制研究提供有效模型。提取猪肺泡巨噬细胞（PAM）的总RNA,反转录成cDNA后用于Hsp40基因编码区的扩增,并将其克隆到慢病毒过表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GreenPuro。测序正确后,设计针对Hsp40基因的4条shRNA干扰序列和1条阴性对照序列,并将其分别插入到慢病毒干扰载体pCDH-U6-MCS-EF1-GreenPuro。将上述6个载体分别与3个辅助载体pVSV-G、pRev和p Gag/Pol共转染293T细胞进行病毒包装,测定其滴度后用于感染PAM细胞,采用RT-qPCR和Westernblot方法对Hsp40的表达效果进行鉴定。猪Hsp40基因过表达和沉默重组慢病毒的获得为进一步研究Hsp40蛋白对PCV2复制的影响和机制奠定了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吕其壮,卓严玲,章烨雯,邓家华,谭小梅,林谦

关键词: 基因,过表达,干扰,慢病毒载体

来源: 中国兽医科学 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 玉林师范学院-生物与制药学院,广西农产资源化学与生物技术重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31860708),广西自然科学基金项目(2017GXNSFBA198025),广西高校中青年教师基础能力提升项目(2017KY0548)

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0220

页码: 76-84

总页数: 9

文件大小: 2281K

下载量: 229

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