紫苏叶水提物对阿霉素致HK-2细胞氧化损伤的保护及机制

论文摘要

目的:探讨阿霉素（ADR）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）发生氧化损伤后,紫苏叶水提取物（PFAE）对其细胞活性、氧化损伤标记物及细胞凋亡等关键因子的影响。方法:ADR刺激HK-2细胞建立损伤模型,使用N-乙酰半胱氨酸（NAC）或不同浓度PFAE(5,15,45 g·L-1)干预后,采用细胞增殖/毒性检测（CCK-8）法检测细胞存活率,结合光镜下细胞形态变化,筛选出PFAE保护细胞的最佳浓度。后续实验分为6组:空白组,ADR(0.05 g·L-1)组,PFAE(15 g·L-1)组,ADR+PFAE（0.05+15）g·L-1组,NAC(0.81 g·L-1)组,ADR+NAC（0.05+81）g·L-1组。检测细胞匀浆中的丙二醛（MDA）,超氧化物歧化酶（SOD）和细胞总抗氧化能力,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TUNEL）染色法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞线粒体凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9和3（Caspase-9,Caspase-3）,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）包括其剪切体的表达,及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路中p38丝裂素活化蛋白激酶（p38 MAPK）,细胞外信号调节激酶（ERK）,c-Jun氨基端激酶（JNK）及其磷酸化蛋白的表达。结果:与空白组比较,ADR组的细胞活性显著降低（P<0.01）,与ADR组比较,5,15 g·L-1的PFAE和NAC能促进细胞的增殖（P<0.01）。与空白组比较,ADR组抗氧化能力和SOD水平显著降低（P<0.01）,MDA和ROS的水平显著增高（P<0.01）,与ADR组比较,ADR+PFAE组和ADR+NAC组抗氧化能力和SOD水平显著升高（P<0.01）,MDA和ROS的水平显著下降（P<0.01）。与空白组比较,ADR组细胞凋亡率上升（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2,cleaved Caspase-9/Caspase-9,cleaved Caspase-3/Caspase-3,cleaved PARP/PARP水平显著上升（P<0.01）,MAPKs通路中的p38 MAPK,ERK和JNK的磷酸化蛋白表达明显增高（P<0.05,P<0.01）;与ADR组比较,PFAE或NAC干预后减轻了细胞凋亡率,降低了凋亡蛋白的相对比值,并且抑制了MAPK信号通路中p38 MAPK,ERK蛋白的磷酸化（P<0.01）,但对磷酸化的JNK蛋白表达无影响。结论:PFAE可以减轻ADR诱导的HK-2细胞氧化损伤,并发挥抗氧化作用,通过线粒体凋亡途径和ERK/p38 MAPK信号通路来抑制细胞凋亡。

论文目录

1 材料

1.1 药物

1.2 细胞

1.3 试剂

1.4 仪器

2 方法

2.1 ADR诱导HK-2细胞损伤模型

2.2 CCK-8法检测细胞活性

2.3 检测细胞抗氧化能力及SOD, MDA, ROS的水平

2.4 TUNEL法检测细胞凋亡

2.5 流式法检测细胞凋亡

2.6 蛋白免疫印迹法（Western blot）检测相关蛋白的表达

2.7 统计学分析

3 结果

3.1 ADR对HK-2细胞生长的影响

3.2 PFAE对ADR损伤的HK-2细胞形态的变化和活性影响

3.3 PFAE对总抗氧化能力, SOD, MDA和ROS水平的影响

3.4 PFAE对ADR诱导的细胞凋亡的影响

3.5 对PFAE调控MAPK信号转导通路发挥抗氧化作用的影响

4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 祝一叶,周恩超,高坤,黄国顺,李蔚,夏平

关键词: 紫苏叶水提物,肾小管上皮细胞,阿霉素,氧化应激,线粒体凋亡

来源: 中国实验方剂学杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 中药学

单位: 南京中医药大学附属医院

基金: 国家自然科学基金项目(81873270),江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目(WSN-012),江苏省中医院“高峰学术”人才项目(y2018rc17)

分类号: R285

DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20191238

页码: 50-57

总页数: 8

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