导读:本文包含了雅致放射毛霉论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:雅致,肽酶,酵母,高效,氨肽酶,丝氨酸,发酵剂。
雅致放射毛霉论文文献综述
张欢欢[1]（2018）在《在毕赤酵母中过量表达来源于雅致放射毛霉的羧肽酶Y》一文中研究指出羧肽酶是一类从肽链的羧基端降解氨基酸残基的外肽酶,有广泛的底物特异性。与其它羧肽酶相比,羧肽酶Y不含有金属离子,对于其它羧肽酶难以降解的脯氨酸残基也表现出活性。羧肽酶Y在多肽链氨基酸测序、质谱分析、蛋白水解物的脱苦等领域有着广泛的应用。目前研究的比较充分是来源于酿酒酵母的羧肽酶Y,对于其它物种特别是来源于丝状真菌的羧肽酶Y研究较少。本实验室从雅致放射毛霉基因组中调取得到一种新型羧肽酶Y基因,成功在毕赤酵母中实现了分泌表达,但是表达量较低。本文通过选择合适的启动子、构建双质粒整合菌株、共表达分泌促进因子的方法实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中高效分泌表达,并且成功在体外用蛋白酶K实现了对雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原的激活。主要研究成果包括:(1)分别构建含有AOX1启动子和GAP启动子的雅致放射毛霉羧肽酶Y表达重组菌,通过提高抗生素浓度的筛选方法,筛选得到高效表达重组菌Zα-600-1,经甲醇诱导后胞外总蛋白的含量达到了275±20 mg·L~(-1)。(2)在得到的高效表达重组菌Zα-600-1基础的上,构建双质粒整合菌株Zα-600-1+9K和Zα-600-1+GAP,通过提高抗生素浓度筛选重组菌,得到的高效表达重组菌分别将雅致放射毛霉羧肽酶Y的分泌表达量提高到重组菌Zα-600-1的1.51倍和1.47倍。(3)在高拷贝数的重组菌株中共表达分泌促进因子BIP(Binding protein)、PDI(Protein disulfide isomerase)、ERO1(Endoplasmic oxidoreductin 1),将雅致放射羧肽酶Y酶原的分泌表达量分别提高到重组菌Zα-600-1的1.87倍、1.76倍、1.26倍,其中分泌效果最佳的重组菌经甲醇诱导后,胞外总蛋白的分泌量达到了525±15 mg·L~(-1)。(4)成功在体外用蛋白酶K对雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原进行了激活,找到了一种新的雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原的激活方式。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
张欢欢,陈昶旭,刘中美,周哲敏[2]（2018）在《雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达》一文中研究指出分别构建以2种启动子表达雅致放射毛霉羧肽酶Y的重组毕赤酵母菌株GS115,通过提高抗生素浓度筛选到具有不同拷贝数羧肽酶Y基因的重组菌株,通过对蛋白表达量的比较筛选出高效分泌表达菌株。在筛选得到的重组菌株中共表达伴侣蛋白binding protein(BIP)、protein disulfide isomerase(PDI)、endoplasmic oxidoreductin 1(ERO1),分别将羧肽酶Y酶原的分泌表达量提高到1. 87倍、1. 72倍和1. 26倍。体外羧肽酶Y酶原可以由胰蛋白酶激活。该研究实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达,为其工业化应用提供了技术支持。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2018年11期）
李昂,陈炼红,李键,张岩[3]（2017）在《雅致放射毛霉添加量对牦牛霉菌奶酪品质的影响》一文中研究指出研究毛霉添加量对牦牛霉菌奶酪品质的影响,确定最佳添加量及发酵时间。采用单因素实验设计,固定其他工艺参数,研究雅致放射毛霉的不同添加量(质量比:0.2%、0.3%、0.4%),测定成熟过程中奶酪的性能指标(感官评分、质构指标、营养成分、pH、蛋白质与脂肪分解指标)。结果表明:毛霉添加量为0.3%,奶酪品质及感官指标最佳;随着毛霉添加量增加,水分、蛋白质、脂肪含量、pH均呈下降趋势,灰分呈上升趋势。成熟至第6 d时,牦牛霉菌奶酪感官指标最佳;随成熟时间延长,pH4.6醋酸盐缓冲液可溶性氮含量、12%叁氯乙酸可溶性氮含量、硫代巴比妥酸值、酸价不断升高。因此,发酵剂添加量0.3%,发酵6 d时,牦牛霉菌奶酪品质最佳。(本文来源于《食品工业科技》期刊2017年24期）
纪海兵,刘中美,郭军玲,周哲敏[4]（2017）在《雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究》一文中研究指出本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质。本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001)。以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3’与5’端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557 bp,编码518 aa。将其酶原(pro CPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达pro CPY,产量为151.20±10.20mg/L。通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y。成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0~7.0下都有较高的稳定性。本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础。(本文来源于《现代食品科技》期刊2017年01期）
尹智美[5]（2016）在《富硒对雅致放射毛霉菌丝化学成分的影响》一文中研究指出该文主要研究富硒对雅致放射毛霉菌丝化学成分的影响,通过在液体发酵培养基中添加一定量的Na2Se O3制备富硒菌丝,研究富硒对雅致放射毛霉菌丝主要化学成分蛋白质、粗脂肪、总糖、总灰分、矿物质元素的影响。研究结果表明,富硒明显提高菌丝中总糖、总灰分、主要常量矿物元素和必需微量矿物元素的含量,并能抑制有害元素的吸收。(本文来源于《安徽农学通报》期刊2016年13期）
纪海兵[6]（2016）在《雅致放射毛霉的分离鉴定及其羧肽酶Y的基因克隆与表达》一文中研究指出腐乳白点是毛霉蛋白酶水解腐乳大豆蛋白形成过饱和游离氨基酸的结晶,主要成份为酪氨酸(L-Tyr)。腐乳中游离酪氨酸主要由毛霉内切蛋白酶和羧肽酶共同水解大豆蛋白产生,其中羧肽酶在这一过程中起主要作用。因此,羧肽酶对腐乳白点的形成有重要作用,但目前没有毛霉中羧肽酶基因序列的报道,无法对其进行深入研究。本论文从腐乳中鉴定出一株生产菌株雅致放射毛霉(Actinomucor elegans PEP001),并从雅致放射毛霉中调取羧肽酶Y(carboxypeptidase Y,CPY)的基因,同时研究了重组羧肽酶Y酶原(proCPY)在大肠杆菌(Escherichia coli Rosetta)和毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)中的表达,并对重组酶进行了纯化、体外激活及酶学性质研究。主要研究结果包括:(1)鉴定了腐乳白点主要成份为氨基酸(占白点干重的92.6%),其中酪氨酸占氨基酸总量90%以上;检测腐乳后发酵过程中发酵前期与后期发酵液中游离氨基酸变化,发现后发酵后期发酵液中酪氨酸含量较后发酵前期增加了近9倍,说明酪氨酸大量积累是在腐乳后发酵过程中受蛋白酶,特别是外切蛋白酶作用下产生的。(2)从腐乳中分离、筛选出多种微生物并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(A.elegans PEP001),并从毛霉发酵液中检测到可释放多肽C末端酪氨酸的羧肽酶活性,推测其可能为CPY;以亲缘性较近来源的真菌中CPY氨基酸保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得基因全长信息:基因全长1557个碱基,编码全长为518个氨基酸;通过软件分析预测:其由23个氨基酸的信号肽、67个氨基酸的前导肽与428个氨基酸的成熟酶构成,酶活性中心位点为S228、D434与H495。(3)proCPY在大肠杆菌中以包涵体形式表达;在毕赤酵母中成功地分泌表达。毕赤酵母表达的proCPY纯化后,通过胰蛋白酶体外激活获得成熟酶,酶活为157.2 U·mg-1。酶学性质分析表明,其最适反应pH为6.0,最适反应温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0-7.0下都有较高的稳定性。(本文来源于《江南大学》期刊2016-05-01）
钟丽芬[7]（2016）在《基于RNA-Seq的雅致放射毛霉羧肽酶研究及其基因AecpY在毕赤酵母中的表达和特性研究》一文中研究指出雅致放射毛霉是生产腐乳、腊八豆、豆豉等风味食品的主要菌种,其能分泌多种蛋白酶,对腐乳发酵后期的风味物质的形成有很重要的作用。蛋白酶是催化蛋白质中肽键水解的酶,到本世纪初,已经报导的微生物蛋白酶估计超过900种,生物体的生理活动和疾病的发生如食物的消化吸收、血液的凝固、溶血作用、炎症、血压调节、细胞分化自溶,机体衰老、癌症转移、生理活性肽的活化等,都与蛋白酶有关。蛋白酶涉及到生活的各个方面,与人类生活息息相关。丝氨酸蛋白酶是一类以丝氨酸为活性中心的重要的蛋白水解酶,在生物有机体中起着重要而广泛的生理作用。丝氨酸羧肽酶是一类属于α/β水解酶家族的真核生物蛋白水解酶,属于SC族羧肽酶中的S10家族,主要存在于植物或真菌的液泡和动物的溶酶体内,目前已从植物和真菌中分离到大量的丝氨酸羧肽酶。本论文首先对雅致放射毛霉转录组数据中的羧肽酶进行了分析,一共7种羧肽酶,主要分布在M28、S28和S10家族中,对这7种羧肽酶进行了基因序列、所属家族和进化关系等生物信息学的分析。随后进一步培养观察了雅致放射毛霉1-3 d在麸皮培养基上的生长形态,并成功克隆得到了雅致放射毛霉羧肽酶基因的全长基因AecpY,通过构建重组表达菌株p ICh-AecpY-GS115,成功表达并得到了羧肽酶rAecpY。经过对酶液进行纯化脱盐等处理得到较高纯度的目标蛋白,并对该羧肽酶的酶学性质进行了进一步的研究,研究结果表明:rAecpY的最高酶活在pH为5时,此羧肽酶适合在弱酸性条件下进行反应,属于酸性蛋白酶一类;在40℃时酶活达到最高,20℃-50℃范围内具有良好的稳定性;抑制剂PMSF对其酶活影响较大,抑制剂为EDTA时,酶活受到的影响非常小,由此可推断蛋白酶为丝氨酸羧肽酶;金属离子Zn~(2+)和Mn~(2+)对酶活有一定的促进作用,而Cu~(2+)和Fe~(2+)则对酶活有抑制作用。(本文来源于《华南理工大学》期刊2016-04-25）
管瑛[8]（2016）在《雅致放射毛霉DCY-1固态发酵豆渣的营养及功能性研究》一文中研究指出大豆是世界上重要的粮油作物之一。随着豆制品加工技术的成熟和消费需求的增长,豆浆、豆腐等大豆产品生产过程中产生的主要副产品—豆渣的数量也日益增长。除一小部分作为牲畜饲料外,大部分豆渣被当成工业废料丢弃,既污染环境,又造成资源浪费。固态发酵是一种成本低、利用率高、污染少的生产方式,不仅能够实现豆渣资源的大规模利用,还可以提高原料的营养及功能性价值,具有广阔的应用前景。发酵豆渣是我国南方许多省份的一种传统食品,习惯上称为霉豆渣,具有悠久的历史,其多以家庭小作坊形式生产,因此缺少规范的生产工艺,存在发酵菌株不确定,发酵条件不可控,从而造成产品易受杂菌污染,产品质量不稳定等后果。这些问题严重阻碍了发酵豆渣作为高膳食纤维食品的开发与推广,也不利于豆渣资源的工业化利用。因此,从传统霉豆渣成品中分离到一种可用于豆渣发酵的新菌株DCY-1,最后经过菌种的纯化和鉴定,确定该菌株为雅致放射毛霉,进而将该菌株制作成纯种孢子型米粉发酵剂接种到豆渣中,研究了其对豆渣发酵特性及发酵过程中营养和功能活性的变化,为其作为一种新型功能性食品提供一定的理论基础。具体研究内容与结果如下:1.发酵菌株的分离鉴定及豆渣发酵条件的确定从湖北黄石阳新县传统食品—霉豆渣成品中分离得到一株可用于豆渣发酵的新菌株DCY-1,经过形态学观察、分子生物学的手段对该菌株进行鉴定,最终将菌株DC Y-1鉴定为毛霉科(Mucoraceae)的雅致放射毛霉(Actinomucor elegans)。以产品感官评价得分与氨基酸态氮含量作为综合评价指标,最终确定雅致放射毛霉DCY-1发酵条件为:豆渣初始含水量为70%,发酵温度25℃,发酵时间60 h,发酵剂接种量为1%。2.豆渣发酵过程中化学性质及营养特性的变化按优化后的最佳条件发酵豆渣,对发酵前后豆渣的营养成分进行测定,结果表明粗蛋白从28.14%上升至30.61%;粗脂肪从12.05%上升至13.32%,可溶性膳食纤维从6.01%上升至11.71%,同时豆渣蛋白的氨基酸组成也发生了改变,改善了豆渣的基本营养价值。对发酵过程中pH、总酸含量、还原糖、糖化酶活进行动态监控,结果表明在发酵过程中,pH基本随发酵时间的延长而提高,只是在发酵初期有轻微下降的趋势;总酸的变化则与pH相反;还原糖含量随着发酵时间延长而增加,还原糖从未发酵前的7.63 mg/10 g增加至44.36 mg/10 g;在发酵60 h时,糖化酶增加至2789.52 U/g。3.发酵过程中对豆渣蛋白质降解及ACE抑制活性的影响通过SDS-PAGE蛋白电泳技术及RP-HPLC肽谱分析技术研究了豆渣蛋白质的降解情况,发现豆渣中大分子的蛋白质随着发酵的进程被降解成分子量较小的蛋白质和多肽。分别对发酵过程中可溶性蛋白、蛋白酶活、蛋白质水解度和10 kDa以下多肽含量进行测定,结果表明,整个发酵过程中,蛋白酶活不断上升,最终可达1319.33 U/g;可溶性蛋白含量在0～36 h增加较快,36 h之后基本稳定,最大值为11.9 mg/g;豆渣蛋白的水解度由1.28%提高至15.10%;10 kDa以下多肽含量由27.72 mg/g增加至115.57 mg/g。此外,采用HPLC法测定了豆渣蛋白质的ACE抑制活性,抑制率由27.22%提高至61.17%。4.发酵过程中总多酚含量及体外抗氧化活性的影响用福林酚法测定了豆渣发酵过程中总多酚含量,并对其体外抗氧化活性进行研究。结果表明,随着发酵时间的延长,豆渣中的总酚含量和体外抗氧化能力均有显着提高,其中豆渣中总酚含量在48 h达到最大,为2.07 mg/g。其铁离子还原力(FRAP)、还原潜力、Fe2+金属螯合能力、DPPH自由基清除活性、ABTS自由基的清除活性和羟基自由基清除活性分别提高了 2.54、2.36、2.67、3.00、4.03和4.38倍。皮尔森相关性也表明豆渣中的总酚含量与抗氧化活性的变化有关,其中总酚含量与FRAP、还原潜力、DPPH自由基清除活性、ABTS自由基清除活性、羟基自由基活性、Fe2+金属离子螯合的相关系数分别为 0.966、0.850、0.803、0.885、0.793 和 0.891。(本文来源于《南京农业大学》期刊2016-04-01）
庞书彦,赵华,刘阳,陆海波,赵立庭[9]（2016）在《雅致放射毛霉壳聚糖提取方法的研究》一文中研究指出壳聚糖是甲壳素部分脱乙酰的产物,天然存在于一些真菌细胞壁中,具有良好的生物相容性和生物可降解性,被广泛用于食品、医药等领域。采用稀硫酸法、碱-酸法、碱-酸结合α-淀粉酶法对雅致放射毛霉壳聚糖提取的影响,得出碱-酸结合α-淀粉酶法提取壳聚糖效果最佳。对碱-酸结合α-淀粉酶法进行条件优化,结果表明,最佳提取条件为:1mol/L Na OH在121℃处理30min,4%(v/v)盐酸在95℃处理6h,添加4%(v/v)的α-淀粉酶在90℃处理2h。采用该方法提取壳聚糖,壳聚糖得率可达16.91%,利用茜素红法测得壳聚糖纯度为92.83%。(本文来源于《中国食品添加剂》期刊2016年03期）
马纳纳[10]（2015）在《基于RNA-Seq的雅致放射毛霉AS3.2778氨肽酶研究》一文中研究指出雅致放射毛霉(Actinomucor elegans),在我国是传统食品腐乳酿造加工中常见的优质菌种之一。该丝状真菌可分泌多种蛋白酶系,能较好地水解大豆蛋白等植物蛋白,对腐乳后期发酵过程中风味物质的形成起重要作用。由于该毛霉遗传背景不清晰,其蛋白酶系组成及相关基因都未有报道,限制了其蛋白酶分子水平的研究。本论文首次对麸皮固体培养基上培养48h的Actinomucor elegans AS3.2778进行基于RNA-Seq的转录组测序,得到其蛋白酶酶系的转录表达情况。对转录组数据分析发现,该菌转录组中共有蛋白酶基因106个,其中氨肽酶基因21个。论文进一步重点分析了该菌氨肽酶序列特征、家族分类以及进化关系,并通过实时荧光定量PCR实验和酶活测定实验分析比较了四个时间点氨肽酶的表达量和酶活差异情况,更好解释毛霉在不同生长时期需要产生相应的氨肽酶来满足自身的生长及生理需求。转录组数据显示,毛霉产生的氨肽酶共21种,分属于M1,M17,M24,S9等七个蛋白酶家族,其中大多数氨肽酶是金属蛋白酶。邻接法构建的系统进化树表明同一家族的蛋白酶往往聚在一个进化树枝上。毛霉形态学观察显示,其生长至第2天时菌丝体洁白且浓密,达到旺盛时期;电子显微镜观察结果表明毛霉从第2天开始产生孢子,且孢子数随着培养时间延长而增多。对第1d,2d,3d和4d四个时期的毛霉cDNA进行实时荧光定量PCR验证,发现5号基因(Genbank登录号为KP973585)在第3天的表达量是21种氨肽酶基因中最高的,且大部分基因在第3-4天的表达量达到最大值。第1d,2d,3d和4d的粗酶液酶活测定结果表明:在pH6.5和pH8.0条件下,毛霉粗酶液对所选的十种底物水解程度明显高于pH5.0和pH9.5条件下的水解程度。其中pH6.5时对底物Phe-pNA水解度最高,说明Phe-pNA是毛霉氨肽酶的最适底物,pH6.5是毛霉氨肽酶的最佳pH,且不同时间点的氨肽酶在不同pH条件下对同一底物的酶活也是有差异的。综合以上研究结果表明:雅致放射毛霉具有丰富的蛋白酶系,该菌在第2-3天长势旺盛,氨肽酶表达活跃,酶活相对较高,相关研究为进一步了解该菌的蛋白酶基因及其分子克隆等研究奠定了基础。(本文来源于《华南理工大学》期刊2015-06-01）
雅致放射毛霉论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
分别构建以2种启动子表达雅致放射毛霉羧肽酶Y的重组毕赤酵母菌株GS115,通过提高抗生素浓度筛选到具有不同拷贝数羧肽酶Y基因的重组菌株,通过对蛋白表达量的比较筛选出高效分泌表达菌株。在筛选得到的重组菌株中共表达伴侣蛋白binding protein(BIP)、protein disulfide isomerase(PDI)、endoplasmic oxidoreductin 1(ERO1),分别将羧肽酶Y酶原的分泌表达量提高到1. 87倍、1. 72倍和1. 26倍。体外羧肽酶Y酶原可以由胰蛋白酶激活。该研究实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达,为其工业化应用提供了技术支持。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
雅致放射毛霉论文参考文献
[1].张欢欢.在毕赤酵母中过量表达来源于雅致放射毛霉的羧肽酶Y[D].江南大学.2018
[2].张欢欢,陈昶旭,刘中美,周哲敏.雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达[J].食品与发酵工业.2018
[3].李昂,陈炼红,李键,张岩.雅致放射毛霉添加量对牦牛霉菌奶酪品质的影响[J].食品工业科技.2017
[4].纪海兵,刘中美,郭军玲,周哲敏.雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究[J].现代食品科技.2017
[5].尹智美.富硒对雅致放射毛霉菌丝化学成分的影响[J].安徽农学通报.2016
[6].纪海兵.雅致放射毛霉的分离鉴定及其羧肽酶Y的基因克隆与表达[D].江南大学.2016
[7].钟丽芬.基于RNA-Seq的雅致放射毛霉羧肽酶研究及其基因AecpY在毕赤酵母中的表达和特性研究[D].华南理工大学.2016
[8].管瑛.雅致放射毛霉DCY-1固态发酵豆渣的营养及功能性研究[D].南京农业大学.2016
[9].庞书彦,赵华,刘阳,陆海波,赵立庭.雅致放射毛霉壳聚糖提取方法的研究[J].中国食品添加剂.2016
[10].马纳纳.基于RNA-Seq的雅致放射毛霉AS3.2778氨肽酶研究[D].华南理工大学.2015
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