共表达PPK和GMAS全细胞催化合成L-茶氨酸

共表达PPK和GMAS全细胞催化合成L-茶氨酸

论文摘要

利用pETDuet-1质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达了多聚磷酸盐激酶(PPK)和γ-谷氨酰甲胺合成酶(GMAS),并以共表达PPK和GMAS的重组菌全细胞催化合成L-茶氨酸,优化了反应参数。SDS-PAGE结果表明,PPK和GMAS共表达成功;最佳全细胞催化反应条件为:35℃,pH=7.0,谷氨酸钠300mmol/L,乙胺盐酸盐420 mmol/L,六偏磷酸钠100 mmol/L,添加2 mmol/L起始量ATP,在100 mL反应体系中转化24 h,L-茶氨酸浓度达到199 mmol/L,谷氨酸钠的转化率达到66.34%。

论文目录

  • 1 实验部分
  •   1.1 材料与仪器
  •     1.1.1 原料、试剂及仪器
  •     1.1.2 菌种及培养基
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 目的基因扩增
  •     1.2.2 共表达重组质粒构建
  •     1.2.3 重组蛋白的表达及酶活检测
  •     1.2.4 全细胞催化合成L-茶氨酸
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 重组工程菌表达蛋白SDS-PAGE分析
  •   2.2 反应条件优化
  •     2.2.1 温度对重组工程菌催化合成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.2 pH对重组工程菌催化合成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.3 底物摩尔比对生成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.4 不同二价金属离子对生成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.5 Mg2+浓度对生成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.6 polyP浓度对生成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.7 ATP添加量对生成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.8 谷氨酸钠浓度对生成L-茶氨酸的影响
  •     2.2.9 全细胞催化生成L-茶氨酸反应进程
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 潘鑫茹,刘均忠,张宏娟,焦庆才

    关键词: 共表达,多聚磷酸盐激酶,谷氨酰甲胺合成酶,茶氨酸,再生,生物工程

    来源: 精细化工 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 有机化工

    单位: 医药生物技术国家重点实验室南京大学生命科学学院,南京医科大学药学院

    基金: 国家自然科学基金青年科学基金项目(21302100)

    分类号: TQ464.7

    DOI: 10.13550/j.jxhg.20190003

    页码: 1827-1832

    总页数: 6

    文件大小: 1152K

    下载量: 132

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