牛结核分枝杆菌早期标识性分泌性蛋白MPB70、MPB83基因的串联表达及其抗原性鉴定

牛结核分枝杆菌早期标识性分泌性蛋白MPB70、MPB83基因的串联表达及其抗原性鉴定

论文摘要

为获得一种具有抗原性的牛结核分枝杆菌(MB)感染早期标识物MPB70、MPB83分泌性蛋白的串联抗原蛋白,本研究利用DNAStar生物信息软件对MB感染早期标识性分泌性蛋白MPB70、MPB83抗原结构区域进行预测后设计合成相应引物,并在两个片段之间引入16位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术获得MBP70与MBP83基因的抗原优势区核苷酸串联片段,将其连接至原核表达载体pGEX-6p-1中经诱导、表达,结果显示构建的重组表达载体获得高效表达,目的抗原蛋白的分子质量约58 ku,纯化后重组蛋白的纯度>90%,经免疫BALB/c小鼠4次后,抗体效价达到1∶51 200。本实验获得了具有明显抗原活性的MB感染早期分泌性蛋白串联抗原MPB70+MPB83,为后续进一步研发MB早期感染标识物快速检测试剂盒奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要实验材料
  •   1.2 MPB70、MPB83基因主要抗原域确定
  •   1.3 重叠延伸PCR (SOE-PCR) 技术融合MPB70及MPB83基因
  •   1.4 重组原核表达质粒的构建
  •   1.5 重组基因工程菌的诱导表达及鉴定
  •   1.6 MPB70+MPB83融合蛋白免疫小鼠试验
  • 2 结果
  •   2.1 MPB70、MPB83主要抗原域确定
  •   2.2 MPB70、MPB83基因扩增及SOE-PCR扩增结果
  •   2.3 重组原核表达载体的构建及鉴定
  •   2.4 重组基因工程菌的诱导表达及蛋白纯化
  •   2.5 MPB70+MPB83融合蛋白小鼠免疫结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 布日额,陈金龙,叶俊,吴金花,锡林高娃,王金良

    关键词: 结核分枝杆菌,串联表达

    来源: 中国预防兽医学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心,内蒙古民族大学生命科学学院,山东绿都生物科技有限公司,山东省滨州畜牧兽医研究院,内蒙古民族大学动物科技学院

    基金: 内蒙古自治区科技创新引导项目(KCBJ2018026),内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题(MDK2018001,MDK2018004),内蒙古自治区“草原英才”人才工程(乳源性致病菌防控技术研究创新人才团队项目)(第7批)

    分类号: S852.61

    页码: 622-626

    总页数: 5

    文件大小: 1104K

    下载量: 101

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