人类小RNA miR-941调控细胞有丝分裂

人类小RNA miR-941调控细胞有丝分裂

论文摘要

miR-941是迄今唯一报道的人类特有小RNA,它在人类进化枝的出现可能与人类物种产生和进化有关;它在人类大脑前额叶等脑组织中优势表达,但其在人类细胞结构和功能的正常维持与执行中的作用尚不得而知。通过Edu检测方法我们发现miR-941能够促进细胞增殖,通过定量PCR、活细胞工作站观察和免疫荧光染色研究发现miR-941对增殖的促进是通过调控细胞有丝分裂实现的。miR-941过表达能明显促进细胞有丝分裂,表现在有效缩短分裂期,从而增强分裂能力。而miR-941的缺失会造成一系列有丝分裂异常包括分裂时间的延长甚至分裂期阻滞,以及单极与多极纺锤体、中心体复制与分离障碍、胞质分裂失败等异常的分裂表型。此外,miR-941的重要靶基因、参与完整有丝分裂的重要激酶Aurora B在miR-941缺失时出现分裂中期分布移位和末期解聚异常,暗示miR-941对有丝分裂进行调控有可能通过影响Aurora B及其涉及的调控机制进行。人类进化过程中最显著的变化是大脑体积增加和皮层的扩张,而有丝分裂功能异常是人类大脑发育严重畸形小头症的首要原因,因此对人类特有基因miR-941参与有丝分裂功能进一步的深入研究,可能对miR-941在人类进化中的贡献有所阐释。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  •   一、人类特有小RNA miR-941
  •   二、有丝分裂
  •   三、人类大脑进化与有丝分裂功能密切相关
  •   四、miRNA在有丝分裂中的功能
  • 第二章 材料与方法
  •   一、细胞培养
  •     1. 细胞复苏
  •     2. 细胞传代培
  •     3. 细胞冻存
  •   二、HeLa细胞瞬转miR-941过表达和敲低RNA
  •     1. RNAs准备
  •     2. 细胞瞬时转染
  •   三、miR-941过表达和敲低的HeLa细胞中基因表达水平检测
  •     1. Total RNA抽提
  •     2. Total RNA反转录
  •     3. miRNA提取
  •     4. 茎环引物法逆转录miRNA
  •     5. PCR检测引物特异性
  •     6. 琼脂糖凝胶电泳
  •     7. 荧光定量PCR
  •   四、miR-941过表达和敲低的HeLa细胞表型鉴定
  •     1. 细胞形态观察
  •     2. 细胞增殖检测
  •     3. 细胞迁移检测
  •     4. 流式细胞术检测检测HeLa细胞凋亡
  •     5. 周期检测
  •   五、免疫荧光染色观察细胞亚结构和蛋白分布
  •   六、Western blot蛋白水平检测
  •     1. 蛋白质样品的准备
  •     2. BCA法测定蛋白浓度
  •     3. SDS-PAGE电泳
  •     4. 转膜(湿转)
  •     5. 封闭及孵育抗体
  •     6. 发光检测
  •   七、细胞周期同步化
  • 第三章 结果与讨论
  •   一、HeLa细胞中转染miR-941过表达和敲低RNA
  •     1. 鉴定转染系统效率
  •     2. 转染细胞中miR-941的表达水平检测
  •   二、miR-941对HeLa细胞增殖和其他表型的影响
  •     1. miR-941促进HeLa细胞增殖
  •     2. miR-941对HeLa细胞迁移、凋亡、坏死和周期的影响
  •   三、miR-941对HeLa细胞有丝分裂的影响
  •     1. miR-941增加有丝分裂细胞,加速分裂进程
  •     2. miR-941缺失阻碍细胞分裂进程
  •     3. miR-941缺失引起有丝分裂异常
  •   四、miR-941敲低导致Aurora B分布异常
  •     1. miR-941敲低导致分裂中期Aurora B分布异常
  •     2. miR-941敲低可能导致末期Aurora B分布异常
  • 展望
  • 参考文献
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 李梦雯

    导师: 俞海菁

    关键词: 有丝分裂,人类进化

    来源: 云南大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学,生物学

    单位: 云南大学

    分类号: Q987

    总页数: 46

    文件大小: 3510K

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