桃转录因子PpWRKY11的克隆及表达分析

桃转录因子PpWRKY11的克隆及表达分析

论文摘要

WRKY转录因子能够响应生物及非生物胁迫。本研究基于前期实验室桃花芽休眠解除前后表达量明显下调的Prupe.1G071400基因进行研究,通过定量PCR表明此结果与前期实验结果相符合,证明该基因可能与桃花芽休眠解除密切相关。从桃‘中油四号’叶片克隆了Prupe.1G071400基因,通过生物信息学分析,命名此基因为PpWRKY11; PpWRKY11蛋白编码282个氨基酸,包含特有WRKY结构域。进化树分析发现PpWRKY11与蔷薇科苹果和梨等亲缘关系最为相近;亚细胞定位显示PpWRKY11定位于细胞核中;酵母双杂显示PpWRKY11蛋白没有自主激活活性,进一步对PpWRKY11进行筛库,筛选出互作的蛋白;构建PGEX-PpWRKY11原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导出符合大小的蛋白,发现PpWRKY11蛋白主要在沉淀中。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验材料与处理
  •   1.2 RNA提取及基因的克隆
  •   1.3 生物信息学分析
  •   1.4 亚细胞定位
  •   1.5 农杆菌侵染法转化烟草叶片
  •   1.6 PpWRKY11自激活鉴定及酵母筛库
  •   1.7 PpWRKY11蛋白的表达及SDS-PAGE检测
  • 2 实验结果
  •   2.1 PpWRKY11基因的克隆及生物信息学分析
  •   2.2 休眠期界定及Pp WRKY11在休眠期的表达分析
  •   2.3 PpWRKY11蛋白的亚细胞定位
  •   2.4 PpWRKY11蛋白自激活与酵母筛库
  •   2.5 PpWRKY11原核表达和SDS-PAGE
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王庆杰,张泽杰,高彦刚,陈修德,肖伟,付喜玲,李玲,李冬梅,高东升

    关键词: 芽休眠,基因克隆,亚细胞定位,基因表达

    来源: 植物生理学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,园艺

    单位: 作物生物学国家重点实验室山东果蔬优质高效生产协同创新中心山东农业大学园艺科学与工程学院

    基金: 国家自然科学基金(31872041),山东省自然科学基金(ZR2018MC023和ZR201702200074),山东省现代农业产业技术体系果品创新团队项目(SDAIT-06-01)~~

    分类号: Q943.2;S662.1

    DOI: 10.13592/j.cnki.ppj.2018.0415

    页码: 503-510

    总页数: 8

    文件大小: 1474K

    下载量: 309

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