生物土壤结皮中解磷微生物群落结构和多样性及其作用研究

生物土壤结皮中解磷微生物群落结构和多样性及其作用研究

论文摘要

荒漠化严重阻碍了全球经济和社会的可持续发展,由荒漠化引发的环境问题已成为全球十大环境问题之一。目前,荒漠化已影响到世界1/5的人口和全球1/3的陆地。在中国,内蒙古是受荒漠化影响较严重的省区之一。生物土壤结皮(Biological soil crusts,BSCs)是荒漠生态环境中的自然景观之一,在荒漠化遏制、植被恢复和荒漠生态系统稳定中扮演重要的角色。BSCs中缺乏磷,生物可利用磷(Bio-available phosphorus,BAP)的含量也较低。BAP的缺乏极大地限制了 BSCs 的形成和发育。解磷微生物(Phosphorus-solubilizing microorganism,PSM)在驱动磷的转化过程中起重要作用,可能对BSCs的形成和发育有重要影响和作用。目前,对解磷微生物的研究主要集中于根际土中,而缺乏BSCs中解磷微生物群落结构和多样性的研究,其对BSCs形成和发育的影响和作用也尚不清楚。本研究采集内蒙古荒漠不同类型BSCs,以高通量二代测序和微生物分离培养的方法对内蒙古荒漠BSCs中解磷微生物群落结构和多样性进行分析,阐述了影响解磷微生物群落结构和组成的环境因子,基于CoNet软件预测解植酸磷细菌群落中的核心物种,通过接种模拟实验验证PSM对BSCs形成和发育的影响和作用,从营养水平和微生物互作等角度初步探究了其可能的作用机制。本研究得到以下结果:1.内蒙古库布齐沙漠东部BSCs中解植酸磷细菌丰富度和多样性低。在二类BSCs中,苔藓结皮层解植酸磷细菌丰富度和多样忡最高,丰富度指数和多样性指数分别为1214.89和4.64:大部分解杭酸磷细菌为不可培养细菌(90%),其余主要为 Proteobacteria 和 Actinobacteria。在 Proteobacteria 中,多数为α-Proteobacteria,少量为 β-Proteobacteria 和 γ-Proteobacteria,包括Brevundimonas、.Microvirga、Pseudomonas、Novosphingobium、Streptomyces 和 Sphingomonas 等29个属。在藻结皮中,以Microvirga居多;在地衣结皮中,优势属为Brevundimonas而在苔藓结皮中,优势属为 Streptomyces。Brevundimonas、Microvirga、Streptomyces和Sphingomonas在三类BSCs层中的相对丰度均高于相应的下层土壤。在属水平,Novosphingobium、Singulisphaera、Streptomyces 和 Aeromicrobium 是植酸磷细菌群落中的核心物种。速效磷(Available phosphorus,AP)是影响解植酸磷细菌群落结构和组成的主要环境因子。2.分离得到230株解磷酸钙-磷细菌(Bacillus、Sphingomonas和Pseudomonas为优势菌)和25株解磷酸钙-磷真菌(Trihoderma为最优势菌)。细菌解磷酸钙-磷和植酸钙-磷能力分别为0.15~38.05 μg/mL和2.83~78.89 IU/mL,真菌解磷酸钙-磷和植酸钙-磷能力分别为0.43~7.31 μg/mL和89.00~96.32 IU/mL;真菌解磷酸钙-磷能力低于细菌,但其解植酸钙-磷能力远远高于细菌。Bacillus、Sphingomnas、Pseudomonas和Trichoderma同时具有解磷酸钙-磷和植酸钙-磷能力,这可能是这些物种成为BSCs中优势菌的原因之一。3.接种实验结果表明,230株细菌和25株真菌中分别有13株细菌和1株真菌对BSCs的形成和发育具有较明显的促进效果;而其中的5株菌,即编号为PD3、Bbqt10、NJT15-9、Bbqz14 和 TZ1-1(TZ1-1 为真菌,其余为细菌)的效果最突出,它们分别属于Bacillus、Sphingomonas和Trichodwals和复合添加磷矿粉(磷酸钙-磷)和植酸钙的进一步接种研究发现,分别接种这5株菌后,形成的 BSCs 厚度较 CK 提高了 12.11%~130.10%;土壤 OM、Ch1 a、AP 和 AN的含量较 CK 分别提高了 25.78%~218.34%、12.11%~89.22%、16.18%~61.67%和34.18%~365.86%:土壤磷酸酶和植酸酶活力分别较CK提高了 34.56%~81.86%和26.79%~31.40%。接种后的微生物群落结构发生明显变化,门水平上,Proteobacteria(57.59%~89.19%)、Ascomycota(70.94%~99.15%)和 Ochrophyta(0.03%~37.79%)的相对丰度增加;属水平上,Methylophilus(3.61%~20.37%)、Meyerozyma(0.08%~89.86%)、Ochromonas(0.03%~43.61%)和Filamoeba(0.18%~38.56%)的相对丰度也增加;接种引起细菌16S rRNA基因、固氮菌nifH基因和蓝藻16S rRNA基因拷贝数显著增加,表明接种解磷微生物可能促进了细菌、固氮菌和蓝藻的生长,从而促进BSCs的形成和发育。而细菌和真菌同时接种的结果表明,相比单接细菌或真菌,其促进效果更加明显。综上,内蒙古荒漠BSCs中解植酸磷细菌多样性偏低,多为不可培养细菌;而解磷酸钙-磷细菌多样性较高,且优势菌同时具有解磷酸钙-磷和解植酸钙-磷能力,其促进BSCs形成和发育的效果明显。本研究为认识和利用荒漠BSCs中解磷微生物提供了基础理论依据和实践材料。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 缩略语表
  • 第一章 绪论
  •   1 生物土壤结皮
  •     1.1 生物土壤结皮的定义、类型及演替变化
  •     1.2 生物土壤结皮的生态功能
  •     1.3 微生物在生物土壤结皮形成和发育中的作用
  •   2 土壤中磷的种类和解磷微生物
  •     2.1 磷的种类
  •     2.2 解磷微生物的种类、应用及其解磷机制
  •       2.2.1 解磷微生物的种类
  •       2.2.2 解磷微生物的应用
  •       2.2.3 解磷微生物的解磷机制
  •   3 研究内容、目的及意义
  •   4 本研究技术路线
  • 第二章 生物土壤结皮中解植酸磷细菌群落结构和多样性
  •   1 研究背景
  •   2 材料与方法
  •     2.1 材料
  •       2.1.1 生物土壤结皮样品
  •       2.1.2 实验仪器和试剂
  •     2.2 实验方法
  •       2.2.1 样品采集
  •       2.2.2 土壤理化性质测定
  •       2.2.3 微生物群落结构和组成分析
  •       2.2.4 生物信息学分析
  •   3 结果与分析
  •     3.1 土壤理化性质
  •     3.2 解植酸磷细菌群落结构和多样性
  •       3.2.1 样品序列数
  •       3.2.2 稀释曲线
  •       3.2.3 多样性分析
  •       3.2.4 群落结构和组成分析
  •       3.2.5 环境因子对群落结构和组成的影响
  •       3.2.6 共现性网络分析
  •   4 讨论
  •     4.1 生物土壤结皮中解植酸磷细菌群落结构和核心物种
  •     4.2 影响群落结构和组成的环境因子
  •   5 结论
  • 第三章 生物土壤结皮中可培养解磷酸钙-磷微生物的多样性及其解磷能力
  •   1 研究背景
  •   2 材料与方法
  •     2.1 材料
  •       2.1.1 生物土壤结皮样品
  •       2.1.2 实验仪器和药品
  •     2.2 方法
  •       2.2.1 生物土壤结皮样品采集
  •       2.2.2 解磷酸钙-磷微生物的分离鉴定
  •       2.2.3 真菌孢子培养
  •       2.2.4 微生物保藏
  •       2.2.5 菌株解磷能力测定
  •   3 结果分析
  •     3.1 解磷酸钙-磷细菌的分离鉴定
  •     3.2 解磷酸钙-磷真菌的分离鉴定
  •     3.3 菌株解磷能力
  •       3.3.1 解磷酸钙-磷能力
  •       3.3.2 解植酸钙-磷能力
  •   4 讨论
  •     4.1 内蒙古荒漠BSCs中可培养解磷酸钙-磷微生物的多样性
  •     4.2 解磷微生物的解磷能力
  •     4.3 生物可利用磷和培养液pH相关性
  •   5 小结
  • 第四章 解磷微生物对生物土壤结皮形成和发育的影响
  •   1 研究背景
  •   2 材料与方法
  •     2.1 材料
  •       2.1.1 实验仪器和试剂
  •       2.1.2 菌株
  •     2.2 方法
  •       2.2.1 Microcoleus sp. MDM25的分离鉴定
  •       2.2.2 菌悬液制备
  •       2.2.3 基质处理
  •       2.2.4 磷矿粉和植酸钙添加量优化
  •       2.2.5 接种培养和取样
  •       2.2.6 土壤理化指标测定
  •       2.2.7 土壤酶活力测定
  •       2.2.8 高通量测序
  •       2.2.9 生物信息学分析
  •       2.2.10 实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR,qPCR)
  •       2.2.11 菌株解磷矿粉-磷和卵磷脂-磷能力
  •   3 结果与分析
  •     3.1 Microcoleus sp. MDM25的分离鉴定
  •     3.2 磷矿粉和植酸钙添加量的优化
  •     3.3 促进BSCs形成和发育解磷微生物菌株的初步筛选
  •     3.4 菌株解磷矿粉-磷和卵磷脂-磷能力
  •     3.5 接种PD3对BSCs形成和发育的影响
  •       3.5.1 PD3对BSCs表观的影响
  •       3.5.2 PD3对BSCs理化性质的影响
  •       3.5.3 PD3对BSCs酶活力的影响
  •       3.5.4 PD3对BSCs微生物群落结构和组成的影响
  •       3.5.5 环境中细菌、蓝藻和固氮菌丰度
  •     3.6 接种Bbqt10对BSCs形成和发育的影响
  •       3.6.1 Bbqt10对BSCs理化性质的影响
  •       3.6.2 Bbqt10对BSCs中微生物群落结构和组成的影响
  •     3.7 接种NJT15-9对BSCs形成和发育的影响
  •     3.8 接种Bbqz14对BSCs形成和发育的影响
  •     3.9 解磷真菌对BSCs形成和发育的影响
  •   4 讨论
  •     4.1 解磷微生物对BSCs理化性质的影响
  •     4.2 解磷微生物对土壤微生物组成和群落结构的影响
  •     4.3 土壤理化性质对微生物群落结构和组成的影响
  •   5 结论
  • 第五章 总结
  •   5.1 讨论
  •   5.2 结论
  •   5.3 不足和展望
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录
  • 作者简介
  • 文章来源

    类型: 博士论文

    作者: 贾丽娟

    导师: 冯福应

    关键词: 高通量二代测序,微生物分离和培养,解植酸磷细菌,解磷酸钙磷细菌,解磷酸钙磷真菌

    来源: 内蒙古农业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 内蒙古农业大学

    基金: 国家自然科学基金(31560030),内蒙古自治区科技创新引导项目(2017),内蒙古自治区自然科学基金(2018MS03042),中央引导地方科技发展专项基金(2017)

    分类号: Q938.1

    总页数: 158

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