牛支原体病PCR检测方法的建立及初步应用

牛支原体病PCR检测方法的建立及初步应用

论文摘要

为快速确诊肉牛牛支原体病,根据牛支原体OPPD/F基因序列设计1对引物,通过反应条件的优化,建立牛支原体PCR诊断方法。结果表明:该方法可从牛肺、鼻拭子临床样本和其临床样本的培养物中直接检测到牛支原体病病原核酸,该方法可检测的病原核酸最小浓度约为1×10-7μg,整个检测过程仅需3.5h。该方法具有快速、灵敏性高、特异性强等特点,对牛支原体感染的诊断、防治与预后评估具有重要意义。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 参考菌株
  •     1.1.2 引物
  •     1.1.3 生化试剂
  •     1.1.4 主要仪器
  •   1.2 支原体培养基及精氨酸溶液的配制
  •     1.2.1 PPLO液体培养基
  •     1.2.2 PPLO固体培养基
  •     1.2.3 10%精氨酸溶液
  •   1.3 样本的采集
  •   1.4 病原菌的分离培养
  •   1.5 样本DNA的提取
  •     1.5.1 组织样本
  •     1.5.2 分离培养菌株
  •     1.5.3 参考菌株DNA
  •   1.6 牛支原体特异性片段的PCR扩增
  •     1.6.1 反应体系
  •     1.6.2 反应条件
  •   1.7 PCR反应条件的优化
  •   1.8 PCR法扩增的特异性及敏感性测定
  •     1.8.1 特异性
  •   1.9 临床样品的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 PCR产物的鉴定
  •   2.2 PCR反应条件的优化
  •   2.3 特异性及敏感性
  •     2.3.1 特异性
  •     2.3.2 敏感性
  •   2.4 临床样品的检测
  • 3 结论与讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 吴位珩,徐景峨,余波,张涛,余国富,杨莉,冯明祥,孙启跃,刘镜,黄波,杨茂生,姜玲玲

    关键词: 牛支原体,基因

    来源: 贵州农业科学 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 贵州省农业科学院畜牧兽医研究所

    基金: 贵州省农业攻关计划项目“肉牛支原体病防控关键技术研究”[黔科合支撑(2016)2503],贵州省农业产业技术体系建设专项“贵州省现代肉牛产业技术体系建设项目”(GZCYTX-0301),贵州省工程技术研究中心建设项目“贵州省肉牛养殖工程技术研究中心建设项目”[黔科合平台人才(2016)5201],贵州省农业领域科技重点项目“贵州优质专用肉牛品种选育”[黔科合NY(2015)3002],贵州省科技厅创新能力建设项目“贵州省肉牛现代农业产业技术体系建设项目”(GZCYTX2014-03)

    分类号: S852.62

    页码: 66-69

    总页数: 4

    文件大小: 397K

    下载量: 112

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