甲型流感病毒H1N1 pdm09与PR8感染C57BL/6小鼠诱生特异性CD8+T细胞免疫应答的比较研究

论文摘要

目的比较甲型流感病毒H1N1两亚型毒株A/Shanghai/37T/2009（H1N1）（pdm09）临床分离株和A/Puerto Rico/8/34（H1N1）（PR8）标准株感染C57BL/6小鼠后,其病理状态的改变及诱生特异性CD8+T细胞的免疫反应。方法①用9.85×106半数组织细胞感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)的PR8和pdm09病毒分别滴鼻感染野生型C57BL/6小鼠,每日（连续14 d）观察其状态并记录死亡情况。于感染后第1、3天处死小鼠,取其肺称重计算肺指数;左叶肺经4%多聚甲醛固定后进行H&E（hematoxylin-eosin staining）染色,观察感染后肺的病理变化;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测肺病毒载量。②用0.25倍半数致死量（lethal dose 50%,LD50）的PR8和pdm09分别滴鼻感染小鼠,每日称重连续观察。于感染后第8天解剖取肺和脾,通过H&E染色比较肺部病理改变;通过流式细胞术（FACS）检测脾病毒特异性CD8+T细胞数量比例,以及IFN-γ、TNF-α、IL-2、granzyme B等细胞因子和免疫抑制检查点分子PD-1、LAG-3、Tim-3、CTLA-4的表达情况。结果①以相同TCID50流感病毒感染后,两组小鼠均出现疾病状态。PR8组小鼠感染第5天全部死亡,死亡率显著高于pdm09组（P<0.01）;第1、3天肺指数和病毒载量的结果PR8组均显著高于pdm09组;H&E染色结果显示PR8组病理损伤严重,肺泡壁增厚,出现肺实质化,血细胞渗出增多,而pdm09组小鼠肺组织病理损伤较轻,炎症浸润少;②以相同LD50流感病毒感染后,PR8组小鼠的体重损失和肺组织病理损伤均比pdm09组严重;流式结果显示PR8组诱生的病毒特异性CD8+T细胞比例高于pdm09组,但是PR8组中活化的CD8+T细胞(CD8+CD44High)表达的IFN-γ、IL-2和TNF-α显著低于pdm09组;检测该群细胞免疫功能耗竭分子,发现其表达了更多的免疫抑制分子PD-1和LAG-3。结论 PR8相对于pdm09能够对小鼠造成更严重的损伤,可能是因为其活化的特异性的CD8+T细胞出现功能耗竭导致特异的免疫保护力受损,抵抗和清除病毒的能力下降,故而造成更严重的病理损伤。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王超,刘洋,秦波音,任晓楠,谭丹,杨华,李顺,周晓辉

关键词: 甲型流感病毒,细胞,特异性细胞,免疫应答,功能耗竭

来源: 中国实验动物学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 复旦大学附属公共卫生临床中心

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500208),国家十三五传染病重大专项(2017ZX10304402-001-012,2017ZX10304402-001-006),国家自然科学基金(31601908,81471397),上海市公共卫生临床中心院内项目(KY-GW-2018-48,KY-GW-2019-19)~~

分类号: R373.13;R-332

页码: 561-570

总页数: 10

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