导读:本文包含了重组人巨细胞病毒嵌合肽论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,病毒,巨细胞,高密度,巴斯德,载体,论文。
重组人巨细胞病毒嵌合肽论文文献综述
余巍[1]（2005）在《重组人巨细胞病毒嵌合肽的表达纯化及活性研究》一文中研究指出人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染在人群中非常普遍,主要是呈隐性或亚临床感染,近年来发现该病毒不只在新生儿、免疫抑制及免疫缺陷患者中导致广泛的临床症状和死亡,而且可能与人类叁大疾病--心血管疾病,恶性肿瘤及糖尿病有关,因而建立HCMV的快速检测方法具有重要意义。多种HCMV病毒蛋白可刺激机体产生相应的抗体,选用抗原性强、特异性好的蛋白抗原代替全病毒以检测HCMV感染,是提高HCMV感染诊断的敏感性和特异性的有效途径。国外的研究证实,HCMV的gp52蛋白和pp150蛋白具有较强的抗原性,在HCMV感染者的血清中其相应的抗体检出率较高,本实验室已成功构建串连有编码gp52 C末端和编码pp150 C末端两个基因片段的pPIC9K-rHCMVp表达质粒,并在毕赤酵母获得成功表达。但该质粒缺少纯化标记,不利于分离纯化,本研究将该质粒中人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)基因片段导入带纯化标志his6的pPICZαA中,重新构建、筛选了表达人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)的基因工程酵母。根据其基因序列,设计引物从pPIC9K-rHCMVp上扩增得到目的基因片段,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母GS115细胞中,筛选获得表达量较高的重组菌株,研究了该菌株生长的培养条件,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响。2L发酵罐进行了高密度发酵,经1%的甲醇、pH6.0的条件下诱导48h,最终菌体密度OD_(600)达到180,每升发酵液中含目的蛋白78.7mg,比摇瓶提高了4.8倍的产量。rHCMVp嵌合肽蛋白可通过高密度发酵大量获得。通过金属螯合亲和层析分离纯化发酵液上清,获得较高纯度的rHCMVp嵌合肽蛋白,进行了活性研究。实验结果证实该蛋白能被抗全病毒血清检测,且具有免疫原性;与市售进口的ELISA人巨细胞病毒检测试剂盒相比,两种方法的一致性较好,我们选择的gp52和pp150两个片段的嵌合肽蛋白作为包被抗原可用于HCMV感染的检测,为制备或组装高特异性和敏感性的HCMV基因工程抗原试剂盒提供依据。(本文来源于《暨南大学》期刊2005-05-01）
谢琪璇,余巍,潘善培,肖銮娟,彭雅林[2]（2005）在《重组人巨细胞病毒嵌合肽基因在毕赤酵母中的克隆和表达》一文中研究指出为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母X33细胞中 ,筛选获得表达量较高的重组菌株 ,研究了该菌株生长的培养条件 ,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响。 2L发酵罐进行了高密度发酵 ,经 1 %的甲醇、pH6 0的条件下诱导48h ,最终菌体密度OD60. 0 达到 1 80 ,每升发酵液中含目的蛋白 78. 7mg ,产量比摇瓶提高了 4 8倍。rHCMVp可通过高密度发酵大量获得。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2005年03期）
董鲁[3]（2003）在《重组人巨细胞病毒（HCMV）嵌合肽在毕赤酵母中的表达及高密度培养的研究》一文中研究指出为了在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽，将构建好的hCMVp-pPIC9K重组质粒分别经Sac Ⅰ和Bg1 Ⅱ酶切，电打孔法导入毕赤酵母GS115后，在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子。然后根据甲醇利用快速型(Mut~+)和甲醇利用缓慢型(Mut~s)菌株的不同生长特点，筛选出Mut~+和Mut~s型转化子，用PCR法进一步鉴定阳性克隆。在摇瓶中分别用甲醇诱导Mut~+和Mut~s型转化子表达蛋白4d，取培养产物冻干浓缩，进行SDS-PAGE和Western blotting，分析蛋白的含量及纯度，筛选出能特异表达目的蛋白的基因工程菌。对此工程菌的培养时间，培养基酸碱度和甲醇浓度等培养条件进行优化，并将得到的结果应用到高密度发酵的研究中。基因工程菌在发酵罐中用甲醇诱导48h，每12h取样测定细胞密度，样品进行SDS-PAGE，分析发酵产物中目的蛋白表达情况。 我们筛选到6个Mut~+型转化子和1个Mut~s型转化子，PCR法鉴定这7个转化子均为阳性克隆。经诱导表达发现只有1个Mut~+型阳性克隆可表达能与HCMV全病毒抗体发生特异性反应的蛋白，其分子量为51KD。将此阳性克隆作为基因工程菌进行培养条件优化，发现工程菌在pH为6.0，甲醇浓度1.0％的培养基中诱导2—3d目的蛋白的表达量最高。将此条件应用到高密度发酵中，甲醇诱导48h后，细胞密度可达到124(OD_(600))，比摇瓶培养10d后的细胞密度高3倍左右，目的蛋白的表达量为57.21mg/L，比摇瓶诱导4d的表达量高6.4倍，但目的蛋白占培养上清分泌蛋白的比例比摇瓶的76.5％有所下降，另外通过对高密度发酵的研究，我们发现在48h诱导时间内毕赤酵母表达蛋白的量随着细胞密度的增大而增高。 实验结果表明我们成功筛选到能特异表达重组人巨细胞病毒嵌合肽的巴斯德毕赤酵母工程菌，并利用高密度培养的方法获得了较高的表达量。(本文来源于《暨南大学》期刊2003-04-01）
董鲁,谢琪璇,潘善培,肖銮娟,刘红军[4]（2003）在《重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和甲醇利用缓慢型(Muts)菌株的不同生长特点,筛选出Mut+和Muts型转化子,用PCR法进一步鉴定阳性克隆.分别用甲醇诱导Mut+和Muts型转化子表达目的蛋白4d,取培养产物冻干浓缩,进行SDS-PAGE和Westernblotting,筛选出能特异表达目的蛋白的菌株,分析蛋白的含量及纯度.结果:重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达,其表达量约占培养上清分泌蛋白的76 5%.结论:重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达.(本文来源于《暨南大学学报(自然科学与医学版)》期刊2003年01期）
郑育声[5]（2002）在《重组人巨细胞病毒（HCMV）嵌合肽的构建及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出为了表达人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)中抗原性较强的两段蛋白片段—gp52C末端和pp150C末端的嵌合肽，用基因工程技术构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。将重组质粒转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)以此表达目的蛋白，并对表达蛋白进行鉴定。根据人巨细胞病毒糖蛋白gp52和磷酸蛋白pp150C末端的cDNA序列，设计出2对引物。利用重组PCR的方法，以病毒培养液上清为模板，把二个目的基因串联在一起。所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T_4DNA连接酶与pPIC9K载体进行连接，然后导入大肠杆菌DH5α，用PCR法筛选阳性转化子，并用双酶切和序列测定方法鉴定重组质粒。重组质粒线性化后，用电击法将重组质粒转化入巴氏毕赤酵母，在缺组氨酸的MD板上筛选阳性菌落，然后用不同浓度的G418—YPD板筛选多拷贝插入单菌落。培养多拷贝插入的酵母细胞，用甲醇诱导目的蛋白的分泌，SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白。 重组PCR扩增出两端带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的目的基因片段。目的基因经双酶切后连接载体pPIC9K，然后导入大肠杆菌DH5α中，在含氨卞青霉素(AMP)的LB板上用PCR反应筛选出阳性菌落，双酶切结果表明目的基因已插入载体中，且方向正确，测序结果进一步证明人巨细胞病毒重组基因表达质粒成功地克隆了目的基因片段。重组质粒转化巴氏毕赤酵母，G418筛选出多拷贝插入的单克隆，甲醇诱导多拷贝插入的单克隆酵母细胞分泌目的蛋白，培养液上清经SDS-PAGE电泳分析，在蛋白质印迹中检测到培养液上清有一表观分子量为36KD，能与羊抗HCMV多克隆抗体发生发应的条带。实验结果表明重组人巨细胞病毒嵌合肽成功地在巴斯德毕赤酵母中获得表达。(本文来源于《暨南大学》期刊2002-05-01）
重组人巨细胞病毒嵌合肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母X33细胞中 ,筛选获得表达量较高的重组菌株 ,研究了该菌株生长的培养条件 ,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响。 2L发酵罐进行了高密度发酵 ,经 1 %的甲醇、pH6 0的条件下诱导48h ,最终菌体密度OD60. 0 达到 1 80 ,每升发酵液中含目的蛋白 78. 7mg ,产量比摇瓶提高了 4 8倍。rHCMVp可通过高密度发酵大量获得。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组人巨细胞病毒嵌合肽论文参考文献
[1].余巍.重组人巨细胞病毒嵌合肽的表达纯化及活性研究[D].暨南大学.2005
[2].谢琪璇,余巍,潘善培,肖銮娟,彭雅林.重组人巨细胞病毒嵌合肽基因在毕赤酵母中的克隆和表达[J].中国生物工程杂志.2005
[3].董鲁.重组人巨细胞病毒（HCMV）嵌合肽在毕赤酵母中的表达及高密度培养的研究[D].暨南大学.2003
[4].董鲁,谢琪璇,潘善培,肖銮娟,刘红军.重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达[J].暨南大学学报(自然科学与医学版).2003
[5].郑育声.重组人巨细胞病毒（HCMV）嵌合肽的构建及其在毕赤酵母中的表达[D].暨南大学.2002
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