魏泽庆[1]2003年在《多重耐药肺炎克雷伯菌同源性及其β-内酰胺酶基因型研究》文中认为肺炎克雷伯菌是医院感染最常见的革兰阴性杆菌之一。且其在医院感染中常以耐药菌株为主，70年代，主要流行庆大霉素耐药菌株，自83年在德国首次报道SHV-2型超广谱酶β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases，ESBLs)以来，ESBLs在肺炎克雷伯菌中流行日益严重，世界各地均有报道，且有不断增加的趋势。肺炎克雷伯菌的耐药机制主要是产生各种β-内酰胺酶，特别是ESBLs。这些酶的耐药基因往往被编码在分子量较大的质粒上，且这种质粒又可同时携带其它的耐药基因，造成肺炎克雷伯菌多重耐药，限制了抗菌药物在临床治疗中的选择。而且，这些质粒可在同种甚至不同种的细菌之间传播，极易造成医院感染的暴发流行，是临床防治非常棘手的问题。 本研究收集了我院2000年5～8月重症监护病房(ICU)临床分离的耐药谱相似的多重耐药肺炎克雷伯菌6株。采用浓度梯度法测定6株菌株对13种抗菌药物的最低抑菌浓度；脉冲场凝电泳(PFGE)分析其同源性；接合试验分析耐药基因传播机制；采用聚合酶链反应(PCR)扩增临床分离菌株及其相应接合子的耐药基因，设计引物扩增的耐药基因包括SHV-1、TEM-1、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-8组、CTX-M-9组、OXA-2组、OXA-10组及质粒介导AmpC酶FOX-1组。PCR扩增产物进行克隆测序，确定β-内酰胺酶基因型。采用等电聚焦电泳(Isoelectric Focus， 浙江大学2003届硕士学位论文IEF）测定临床分离的菌株及接合子p－内酚胺酶等电点。并对新发现的CTX－M上2基因进行原核表达，对表达重组菌进行ESBLS鉴定及表达蛋白的等电点测定。 结果显示6株临床分离的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药，耐药谱基本一致，接合子耐药谱与原始菌相似。原始菌对亚胺培南高度敏感，对派拉西林／叁陛巴坦。头抱腑酮／舒巴坦和头抱毗肪的最低抑菌浓度（MIC）值增高。对其余检测的抗菌药物高度耐药。但原始菌株加克拉维酸后，头抱他睫MIC仍3256ug／ml。6株肺炎克雷伯菌的PFGE条带及位置一致。6株细菌的接合子均有等电点…IS）5．4，7．7，8刀，8二和 8．4的条带，pI7．7的条带能被氯哇西林抑制，而其他条带则能被克拉维酸抑制。PCR扩增接合子 TEM、SHV和 CTX－M－1基因呈阳性反应，克隆测序分别为 TEM－1。SHV和一新型 p内酚胺酶 CTX－M－22。CTX－M－22基因的原核表达，重组菌为产ESBLs菌株，表达蛋白的等电点约为8．4。 以上研究表明，6株临床分离的肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物耐药，而且其接合子也有相似耐药谱；6株细菌的质粒携带多个p－内酚胺酶的耐药基因，包括TEMl。SHV、新发现的 CTX型超广谱p－内酚胺酶 CTX－M22及有待进一步研究的质粒介导的inpC酶；我院ICU病房由多重耐药肺炎克雷伯菌引起一次小的医院感染流行。
葛婧, 钟雪珊, 肖刚, 陈佑明, 陈清[2]2017年在《广州地区急性腹泻患儿粪便中多重耐药及高毒力肺炎克雷伯菌分布检测》文中进行了进一步梳理目的 了解广州地区急性腹泻患儿粪便中肺炎克雷伯菌的携带情况,以及其中具有多重耐药性和高毒力的肺炎克雷伯菌菌株的分布情况。方法 2015年5~9月,采集广州市某医院门诊腹泻患儿的粪便样本,分离鉴定肺炎克雷伯菌并进行药敏试验,同时筛检产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)菌株。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)实验检测产ESBLs菌株中具有耐药基因blaTEM、blaSHV和blaCTX-M的菌株分布情况;用PCR实验检测所有分离菌株中六种常见高毒力荚膜血清型的分布情况。结果 在87份腹泻患儿粪便样本中,肺炎克雷伯菌检出率为66.7%。分离株对青霉素类抗菌药物、第一代头孢菌素和呋喃妥因的耐药率较高;而对二、叁、四代头孢类抗菌素、喹诺酮类、氨基糖苷类抗生素耐药性较低,且未检出耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌;产ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为12.1%(7/58),其中检出4株blaCTX-M和2株blaTEM基因型菌株,未检出含blaSHV基因型菌株;所有分离株的多重耐药率为27.6%。共检出高毒力肺炎克雷伯菌K2、K20、K54型各1株,未检出K1、K5及K57型。结论 腹泻患儿粪便中肺炎克雷伯菌分离率较高,多重耐药性菌株比例较高,而且存在具有多重耐药同时高毒力的菌株,应引起重视。
何红, 黄紫嫣, 李军, 陈立华, 沈晖[3]2019年在《改良Hodge试验、CNPt及mCIM筛选肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值》文中研究说明目的 探讨改良Hodge试验(MHT)、Carba NP试验(CNPt)及改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值。方法 收集某院2016年12月—2017年11月临床分离的117株肺炎克雷伯菌,所有菌株进行药敏试验,其中碳青霉烯类耐药57株,敏感60株。以PCR法检测碳青霉烯酶基因为标准,评价3种方法检测肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的价值。结果 57株对碳青霉烯耐药的菌株中,PCR阳性40株,包括39株KPC,1株NDM-1,未检出其他耐药基因。MHT、CNPt、mCIM阳性率分别为87.7%(50/57)、89.5%(51/57)、91.2%(52/57)。60株敏感菌PCR均未检出碳青霉烯酶基因,3种表型筛选试验结果均为阴性。以PCR为金标准,MHT、CNPt、mCIM灵敏度分别为97.5%(39/40)、100%(40/40)和100%(40/40),特异度分别为85.7%(66/77)、85.7%(66/77)和84.4%(65/77)。结论 CNPt是一种可靠的表型筛选方法,可用于流行病学和医院感染的监测。mCIM操作简单,结果判断明确,更适合临床微生物实验室常规开展。
参考文献：
[1]. 多重耐药肺炎克雷伯菌同源性及其β-内酰胺酶基因型研究[D]. 魏泽庆. 浙江大学. 2003
[2]. 广州地区急性腹泻患儿粪便中多重耐药及高毒力肺炎克雷伯菌分布检测[J]. 葛婧, 钟雪珊, 肖刚, 陈佑明, 陈清. 中华疾病控制杂志. 2017
[3]. 改良Hodge试验、CNPt及mCIM筛选肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值[J]. 何红, 黄紫嫣, 李军, 陈立华, 沈晖. 中国感染控制杂志. 2019