非洲猪瘟病毒K196R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

非洲猪瘟病毒K196R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒定量检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)早期表达基因K196R的基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,通过优化退火温度、引物及探针浓度,建立了快速检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法选择的引物具有高度灵敏性和特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系(R~2=0.998),对ASFV核酸最低检测下限为1.3拷贝,且与猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等多种病原不存在交叉反应。本研究建立的K196R基因实时荧光定量PCR检测方法为非洲猪瘟疫情提供了一种新型、灵敏和特异的早期检测方法。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料及试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 引物和探针的设计
  •     1.2.2 病毒基因组DNA的提取
  •     1.2.3 实时荧光定量PCR分析系统的建立
  •       1.2.3.1 PCR反应体系条件优化
  •       1.2.3.2 标准曲线的建立
  •       1.2.3.3 灵敏性试验
  •       1.2.3.4 实时荧光定量PCR方法的特异性检测
  •       1.2.3.5 细胞系的筛选与鉴定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 序列比对
  •   2.2 ASFV实时荧光定量PCR分析系统的优化与建立
  •     2.2.1 ASFV K196R基因实时荧光定量PCR熔解曲线
  •     2.2.2 ASFV K196R基因实时荧光定量PCR退火温度的优化
  •     2.2.3 ASFV K196R基因的引物浓度优化
  •     2.2.4 ASFV K196R基因的探针浓度优化
  •   2.3 ASFV实时荧光定量PCR方法检测质粒样品的灵敏性
  •   2.4 ASFV实时荧光定量PCR方法的特异性检测
  •   2.5 实时荧光定量PCR方法对模拟临床样品的检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 崔贝贝,仇松寅,梅琳,韩雪清,吴绍强,李霆,林祥梅

    关键词: 非洲猪瘟病毒,实时荧光定量,基因,检测

    来源: 中国兽医杂志 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国检验检疫科学研究院

    基金: 国家重点研发计划(2017YFD0502305-3)

    分类号: S852.651

    页码: 3-8

    总页数: 6

    文件大小: 2305K

    下载量: 311

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