NLRP3炎症复合体的体外构建

论文摘要

为体外构建NLRP3炎症复合体,利用PCR方法扩增目的基因NLRP3、IL-1β、ASC和Pro-Caspase-1,分别连接到相应的载体中,构建重组真核表达质粒p3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA,利用Lipofectamine2000试剂转染到HEK293T细胞后,采用Western blot方法验证各蛋白的表达情况;通过质粒共转染体外构建NLRP3炎症复合体,采用ELISA方法检测IL-1β生成情况。结果显示,3XFLAG-NLRP3、pEGFP-C1-ASC、pEGFP-C1-IL-1β、PCI-CASP-HA重组质粒均被成功构建,各蛋白于HEK293T细胞内均被成功表达;质粒共转染后ELISA检测到高水平的IL-1β生成,表明NLRP3炎症复合体体外构建成功。NLRP3炎症复合体在体外的成功构建,为进一步研究其激活机制奠定了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 石玉华,郑梦洁,徐伟,师福山

关键词: 质粒构建,炎症复合体,蛋白表达

来源: 中国兽医学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 浙江大学动物科学学院

基金: 浙江省自然科学基金资助项目(LY18C180001),中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2018QNA6032)

分类号: Q78

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.04.22

页码: 735-738+750

总页数: 5

文件大小: 416K

下载量: 85

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