王锋超[1]2003年在《大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因的克隆与筛选》文中研究指明目的：肠上皮细胞是构筑肠道粘膜屏障的主要部分，还具有分泌、吸收等多种功能，在维持机体生命活动中居重要的地位。在核爆炸、核事故等多种情况下可发生病死率极高的肠型放射病，目前尚无有效的救治方法。肠上皮细胞是辐射敏感细胞，受一定剂量照射后，可发生增殖抑制、结构异常、坏死脱落，而且具有克隆形成能力的隐窝干细胞不能存活和重建小肠的隐窝、绒毛系统，导致肠道屏障的破坏以及修复困难，成为肠型放射病的根本原因。由于在体分离纯化隐窝干细胞存在技术困难，目前学者大都使用具有隐窝未分化细胞特点的细胞株IEC-6作为体外研究模型。本研究利用IEC-6细胞进行大剂量辐射诱导的差异表达基因的筛选，旨在为肠上皮细胞的辐射损伤修复的分子机制研究提供新的靶点，为放射性胃肠综合症提供新的治疗线索，同时将对细胞的增殖、分化、凋亡和转化等基本的生命问题提供启示和答案。方法：本研究以35Gyγ射线照射后24h的IEC-6细胞株为模型，分为两个部分进行。第一部分：大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因消减cDNA文库的构建。包括以下内容：1）常规IEC-6细胞培养，传代致一定数量，待细胞处于对数生长期时，随机选取一半设为照射组，以60Co为辐射源, 进行35Gy一次性照射,另一半为正常对照组，两组在照射时相点后继续培养24h。2）对两组细胞进行总RNA分离，并做定量定性分析。3）照射组IEC-6来源总RNA为实验方（tester），对照组IEC-6来源总RNA为驱动方（driver），LDPCR方法合成双链cDNA。4）Rsa1酶切实验方和驱动方cDNA,产生较短的平头末端cDNA片段。5）通过连接反应，产生两种带有不同接头的Tester，而Driver不加接头。6）第一次杂交:过量的Driver cDNA和两种Tester cDNA变性、退火、杂交，使单链Tester cDNA片段实现均等化，保留了稀有转录子。第二次杂交:两种消减后的Tester cDNA同时和附加的Diver cDNA 杂交，使在第一次杂交中尚未完成杂交的单链Tester cDNA很容易找到互补序列进行退火。最终形成5ˊ末端带有不同接头的杂交体，两种接头提供了抑制性PCR的引物序列，使差异<WP=8>表达的cDNA通过两轮PCR进行特异性扩增。7）通过比较消减前后cDNA库中已知基因的丰度改变来评价消减效率。8）把正常组作为tester,照射组为driver，按上述步骤进行逆向消减杂交。9）对正向消减PCR产物进行T/A克隆，转化细菌，挑取克隆进行PCR扩增，检测插入片段大小。第二部分：1)反向Northern杂交： 用PCR法扩增插入cDNA片段，碱变性后，点样于尼龙膜上,制作相同拷贝的两张膜，标记正向消减和逆向消减的第二次PCR产物作为探针，分别与膜进行杂交，放射自显影法显示差异片段。2）将放射组和正常组的IEC-6细胞和大鼠肠上皮洗脱细胞的总RNA以及含有克隆U20的T载体质粒电泳后转印、交联在尼龙膜上，以克隆U20cDNA片段为模板标记的探针杂交，观察U20的表达情况。结果：1. 样本总RNA纯度高，完整性好，通过LD PCR 的方法获得足量的双链cDNA，Tester cDNA 片段酶切完全，至少有50％以上的片段连上相应接头。2. 以未消减的cDNA库为模板，扩增18个循环左右看见G3PDH的阳性条带，而以消减后的cDNA库为模板，扩增28个循环左右才见阳性条带，这提示差异表达的基因获得有效富集。3. 消减文库扩增后，可见2000左右的白色阳性克隆。挑选48个菌落用PCR进行分析可得97％以上的克隆含有插入片段，片段大小为250－1500bp,和与酶切和第二次PCR产物的结果相符。4. 反向Northern杂交对扩增的初筛结果:一共在96个克隆中找到12个信号有显着差别的cDNA克隆，经测序和检索，它们代表8个不同的基因，其中6个对应已克隆基因，两个是未克隆的EST序列。对其中一条已克隆但功能未知基因用Northern杂交进行鉴定分析，结果显示基因在放射组IEC－6细胞所表达水平升高，在正常对照IEC-6细胞表达弱；正常和放射组的在体洗脱细胞来源的RNA泳道上未见明显阳性条带；根据28S rRNA确定的实际分子量大小和检索结果相差7kb以上。结论：1．联合应用抑制性消减杂交和T/A克隆、反向Northern杂交、正向Northern杂交，建立了差异表达基因克隆、筛选的技术平台。2．对大鼠空肠上皮细胞IEC－6进行了一个剂量（35Gy）,一个时相点（24h）的差异表达基因分析，建立了消减cDNA文库。3．筛选到12个差异表达基因的EST片断，它们代表8个不同的基因，其中6个对应已克隆基因，两个是未克隆的EST序列。主要和细胞骨架，细胞应激、细胞<WP=9>周期、信号转导等方面有关。一条EST序列和已知mRNA序列（小鼠胚胎来源，功能未知）高度同源，但Northern Blot分析确定其实际对应mRNA的分子量和检索的靶基因不同，且可能是隐窝细胞特异表达，表明它仍代表了大鼠肠上皮未克隆基因，这为此基因的全长克隆和进一步功能研究奠定了基础。总之，大剂量辐射诱导IEC-6 细胞差异表达基因的克隆和筛选为肠上皮辐射损伤修复的分子机制研究提供了新的靶点，拓宽了我们在这一领域的认知范围，为多角度深入研究肠上皮的辐射损伤修复奠定了基础。
王锋超, 高京生, 粟永萍, 徐辉, 王军平[2]2004年在《大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因消减cDNA文库的构建》文中研究表明目的 克隆和鉴定大剂量辐射前后大鼠空肠上皮细胞IEC 6差异表达基因 ,为探索肠上皮细胞辐射损伤修复的分子机制提供线索。方法 IEC 6细胞经 3 5Gyγ射线照射后由抑制性消减杂交 (SSH)方法和T/A克隆技术进行差异表达基因消减cDNA文库的构建 ,用反向Northern杂交法对库中的EST序列进行筛选 ,挑取阳性克隆测序 ,和GenBank比对后挑选有限克隆进行正向Northern杂交进行验证。结果 扩增消减杂交cDNA文库得到约 2 0 0 0个克隆 ,随机选取 96个白色克隆进行PCR扩增 ,用反向Northern杂交法对库中的EST片段进行筛选得到 15个阳性克隆 ,代表 12个基因的转录产物 ,部分基因功能已经明确 ,涉及细胞骨架、细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面 ,另外还获得一新的cDNA序列。结论 SSH法建立了IEC 6细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,一次获得多条差异显示EST片段 ,基因种类涉及细胞骨架 ,细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面 ,这些基因可能在肠上皮细胞的辐射损伤反应中起重要作用
佚名[3]2005年在《《解放军医学杂志》2005年(第30卷)主题词索引》文中提出(按汉语拼音字母顺序排列)数字和字母Capase1Caspase1抑制剂在实验性重症急性胰腺炎中的治疗作用(朱人敏等)30(4):283CARTO系统CARTO电解剖标测系统指导下射频消融房室结折返性心动过速(刘兵等)30(5):365CARTO电解剖标
许川[4]2009年在《邻苯二甲酸酯类和多环芳烃类代表物质联合雌性生殖毒性与健康风险评价研究》文中认为环境污染物低剂量联合暴露对机体的健康危害是目前环境及毒理学界关注的重要问题。国内外多项研究显示,众多化学污染物中以POPs污染最为严重。叁峡库区水环境POPs污染的主要特点是以邻苯二甲酸酯类(Phthalates acid esters, PAEs)和多环芳烃类(Polycyclic aromatic hydrocarbons, PAHs)物质为代表的复合性污染。PAEs和PAHs类物质大多具有明确雌性生殖毒性,但两者联合是否具有协同或拮抗生殖毒性尚不得而知,探究低剂量联合作用雌性生殖毒性及其机制势在必行。基于PAEs和PAHs类物质潜在的女(雌性)性生殖危害,本研究选取PAEs和PAHs的代表性物质,具有明确雌性生殖毒性的邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-(2-ethylhcxyl) phthalate, DEHP)与苯并[a]芘(benzo[a]pyrene, B[a]P)及其代谢产物单-(2-乙基己基)邻苯二甲酸酯(MEHP)与反式二氢二醇环氧苯并芘(BPDE),以整体动物和细胞模型为手段,探讨两种毒物低剂量联合作用下的雌性生殖危害的特点,并从颗粒细胞的结构、功能以及PPARs-Arom/17β-HSD信号通路调节雌激素合成等方面探讨其机制。此外,采用统计学析因分析对DEHP和B[a]P(MEHP和BPDE)的联合生殖毒性作用进行定性评价。最后,结合叁峡库区水环境PAEs和PAHs类物质的现实污染状况,本研究构建了水环境POPs污染物健康风险评价模型,应用前期水环境污染监测资料,对叁峡库区干流主要断面6种PAEs和PAHs代表物质进行健康风险评价。研究旨在探讨DEHP与B[a]P联合作用下雌性生殖毒性危害的特点及作用机制,并对环境PAEs和PAHs暴露对人群的健康危害进行评估,研究将为POPs的防治和人群健康的保护奠定基础,为决策机构提供决策依据和参考。研究内容:第一部分DEHP和B[a]P联合暴露对雌性大鼠的生殖毒性及其机制研究1. 4～5周龄健康雌性SD大鼠随即分7组,每组12只。实验分组为:正常对照组(玉米油);B[a]P高、低剂量组(B[a]P10mg/kg和B[a]P5mg/kg);DEHP高、低剂量组( DEHP600mg/kg和DEHP300mg/kg ); B[a]P+DEHP高、低剂量组(B[a]P10mg/kg+DEHP600mg/kg和B[a]P5mg/kg+ DEHP300mg/kg)。2.采用隔日灌胃方式连续染毒60 d,受试动物于染毒30 d和60 d结束后分两批次,清晨1%戊巴比妥钠腹腔麻醉后心脏取血,进行各项指标的取材、检测。观察动物的生长发育、脏器系数、动情周期、血清激素水平、卵巢卵泡发育及组织病理学改变、颗粒细胞凋亡等指标。运用RT-PCR、Western blot和免疫组化等方法检测雌激素合成通路PPARs、P450Arom和17β-HSD等基因和蛋白的表达差异。第二部分MEHP和BPDE低剂量联合对体外卵巢颗粒细胞的毒性及其机制1.采用机械分离结合胰蛋白酶消化与低速离心的方法分离培养卵巢颗粒细胞。2.筛选MEHP和BPDE染毒剂量,建立MEHP和BPDE低剂量联合染毒颗粒细胞模型,进行联合染毒3×3析因分析。染毒分组:Control(1%DMSO); MEHP(25μM; 50μM); BPDE(10 nM; 100 nM); MEHP+BPDE(25μM+10 nM;25μM+100 nM;50μM+10 nM;50μM+100 nM)。通过MTT实验与细胞形态学观察评价MEHP和BPDE联合作用对颗粒细胞的毒性。3.采用RT-PCR、细胞免疫化学染色法检测MEHP和BPDE联合染毒后颗粒细胞PPAR-γ和P450Arom基因和蛋白表达,在细胞水平探讨联合毒性机制。第叁部分叁峡库区水环境邻苯二甲酸酯类和多环芳烃类代表物质健康风险评价1.叁峡库区干流设置7个水质监测点,采集2005年2月和8月枯、丰水期水样,采用瓦里安GC3800/MS200型气质联用仪进行水中POPs分析测定。2.介绍健康风险评价方法,建立了水环境致癌物/非致癌物健康风险评价模型。选取水中邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二乙基酯(DEP)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)、萘(NA)、芘(Pyr)、萤蒽(FLA)等6种主要PAEs和PAHs物质,分析污染数据并进行健康风险评价。研究结果:第一部分DEHP和B[a]P联合暴露雌性大鼠的生殖毒性及其机制1. B[a]P、DEHP单独与B[a]P+DEHP染毒可造成动物体重增长减缓,但与正常对照相比未见显着差异(P>0.05)。B[a]P+DEHP染毒30 d即可导致卵巢重量减轻,卵体系数下降(P<0.05)。随着染毒时间延长、剂量增加,呈现剂量与时间反应趋势。B[a]P与B[a]P+DEHP相比,卵体系数具有显着差异(P<0.05)。析因分析表明,B[a]P+DEHP染毒30 d和60 d对卵体系数无显着交互作用。2. B[a]P、DEHP单独与B[a]P+DEHP染毒导致EC延长、E逐渐缩短。染毒30 d, B[a]P10mg/kg+DEHP600mg/kg组EC和No E时间延长(P<0.05)。染毒60 d,各染毒组(B[a]P5mg/kg组除外)EC和No E时间显着延长(P<0.01),B[a]P+DEHP和DEHP染毒可导致E时间显着缩短(P<0.05);B[a]P10mg/kg+DEHP600mg/kg组分别与B[a]P5mg/kg+DEHP300mg/kg组和B[a]P10mg/kg组相比,EC和No E具有显着差异(P<0.01)。析因分析表明,B[a]P+DEHP染毒对EC和E无显着交互作用。3. B[a]P+DEHP染毒导致血清E2、P和T含量显着降低。染毒30 d,DEHP600mg/kg和B[a]P10mg/kg+DEHP600mg/kg组大鼠血清E2和P含量明显降低(P<0.05)。染毒60 d,各染毒组(B[a]P5mg/kg组除外)血清E2和P含量继续下降(P<0.05);高、低剂量B[a]P+DEHP组分别与高、低剂量B[a]P组相比,血清E2水平显着降低(P<0.05)。染毒60 d,各组(DEHP300mg/kg组除外)血清T含量与对照组相比显着降低(P<0.05)。各染毒组血清FSH和LH含量未见显着改变。析因分析表明,B[a]P+DEHP联合染毒30 d和60 d对大鼠血清E2和P无显着交互作用(P>0.05)。4. B[a]P+DEHP染毒导致卵巢原始卵泡和初/次级卵泡数目减少,闭锁卵泡数目增多。染毒30 d,B[a]P、DEHP(DEHP300mg/kg组除外)和B[a]P+DEHP染毒导致原始卵泡和初/次级卵泡数目减少(P<0.05),DEHP600mg/kg组和B[a]P10mg/kg+ DEHP600mg/kg组闭锁卵泡明显增加(P<0.05)。染毒60 d,B[a]P和B[a]P+DEHP染毒可导致原始卵泡、初/次级卵泡数目减少(P<0.05),DEHP和B[a]P+DEHP染毒可导致闭锁卵泡数目增多(P<0.05);B[a]P+DEHP组与DEHP组比较,原始卵泡数目具有显着差异(P<0.05),B[a]P10mg/kg+DEHP600mg/kg组与B[a]P10mg/kg组比较闭锁卵泡显着增加(P<0.05)。析因分析表明,B[a]P+DEHP染毒30 d和60 d对大鼠原始卵泡、初/次级卵泡、卵泡闭锁和黄体的数目无显着交互作用。5.光镜下,B[a]P、DEHP单独与B[a]P+DEHP染毒均导致颗粒细胞结构疏松,变性、脱落,细胞数量减少;B[a]P和B[a]P+DEHP染毒出现颗粒细胞与膜细胞间隙增宽,细胞坏死。电镜下,B[a]P、DEHP单独与B[a]P+DEHP染毒均造成颗粒细胞线粒体肿胀与空泡化,内质网扩张甚至髓鞘样结构形成,可见凋亡小体。随着染毒时间延长、剂量增加,颗粒细胞损伤加重,局灶性坏死和髓鞘样结构形成增多。6. B[a]P、DEHP单独与B[a]P+DEHP染毒30 d和60 d均造成颗粒细胞凋亡增加,呈现剂量-反应趋势(P<0.05),Caspase-3的激活参与了细胞凋亡启动,联合染毒卵泡闭锁增加与细胞凋亡发生高度关联。随着染毒时间延长和剂量增加,B[a]P和B[a]P+DEHP染毒组细胞凋亡反而出现下降趋势,B[a]P+DEHP组与B[a]P或DEHP组相比出现显着差异(P<0.05)。析因分析表明,B[a]P+DEHP染毒对卵巢颗粒细胞凋亡和Caspase-3表达均具有交互作用(P<0.01),提示两者联合主要表现为协同作用。7.免疫组化和Western blot蛋白检测与基因表达结果一致。无论染毒30 d或60 d,B[a]P、DEHP和B[a]P+DEHP染毒导致P450Arom mRNA和蛋白表达下调,P450Arom mRNA下调与PPAR-α和PPAR-γmRNA蛋白表达上调高度关联(P<0.05);此外,DEHP和B[a]P+DEHP染毒组卵巢17β-HSDΠmRNA表达水平显着升高(P<0.05)。在就PPARs/P450Arom通路而言,DEHP在联合作用机制中发挥主导作用。析因分析表明,B[a]P+DEHP染毒对P450Arom、PPAR-α、PPAR-γ和17β-HSDΠmRNA表达无显着交互作用,而对P450Arom和PPAR-γ蛋白表达存在交互作用(P<0.05)。第二部分MEHP和BPDE低剂量联合对卵巢颗粒细胞毒性及其机制1.采用机械分离法结合胰蛋白酶消化及低速离心法分离培养的卵巢颗粒纯度高、活性好,48 h～96 h大量增殖,生长旺盛。HE和FSHR表达染色鉴定颗粒细胞是一种简便快速的方法。2. MEHP和BPDE对体外培养卵巢颗粒细胞具有毒性,BPDE对颗粒细胞的毒性明显大于MEHP。MEHP 200μM染毒24 h颗粒细胞活性明显抑制;BPDE 10 nM染毒24 h颗粒细胞生长即出现显着抑制(P<0.05)。3. BPDE和MEHP+BPDE染毒12 h和24 h均从一定程度上抑制颗粒细胞活性(P<0.05),析因分析表明,MEHP+BPDE染毒对颗粒细胞活性不存在交互作用(P>0.05),提示联合作用表现为相加作用。BPDE和MEHP+BPDE染毒可导致细胞萎缩、胞核缩小、出现空泡化与坏死,随着染毒剂量增加,毒性作用更为明显。4. MEHP+BPDE染毒在一定剂量水平可导致颗粒细胞PPAR-γmRNA和蛋白表达上调,P450Arom mRNA和蛋白表达下调,PPARs/P450Arom途径可能是MEHP和BPDE联合作用颗粒细胞的毒性机制。析因分析表明,MEHP+BPDE染毒对颗粒细胞P450Arom和PPAR-γmRNA和蛋白表达均存在交互作用(P<0.05),提示联合毒性表现为协同作用。第叁部分叁峡库区水环境PAEs和PAHs代表物质健康风险评价1.叁峡库区2005年枯、丰水期水源水分别检出有机物178种和144种,其中属于美国环保局优先控制污染物有18种,属于我国水环境优先控制污染物7种;检出率较高的是PAHs和PAEs两类物质。在7个监测点中,水体DBP、DEP、DEHP、NA、Pyr、FLA等6种物质检出范围为ND～3.60×10-3。2.叁峡库区水源水6种有机污染物由饮水途径所致健康危害的个人年风险介于6.34×10-14 a-1～3.99×10-11 a-1范围,按年风险大小排列为:DEHP>DBP>Pyr>NA>FLA>DEP;水中6种有机污染物对人体健康危害的年平均总风险仅为8.86×10-12 a-1,远低于国际辐射防护委员会(ICRP)推荐的最大可接受值5.0×10-5·a-1。在库区各断面中,处于长江和嘉陵江汇合的寸滩断面有机物健康危害风险最大,涪陵和开县断面次之。结论1. PAEs类和PAHs类代表性物质,DEHP和B[a]P及其代谢产物(MEHP和BPDE)联合具有雌性生殖毒性,卵巢颗粒细胞是两者共同作用的靶细胞。2. DEHP和B[a]P联合染毒导致大鼠卵体系数降低,动情周期延长和动情期缩短,大鼠血清E2、P和T水平明显降低,卵巢原始卵泡、初/次级卵泡数目减少,闭锁卵泡数目增多,细胞结构出现病理损伤;DEHP和B[a]P联合对上述指标不具有交互作用,DEHP在毒性效应中发挥主导作用。MEHP和BPDE低剂量联合染毒导致体外培养颗粒细胞活性降低,细胞出现萎缩、空泡化与坏死;MEHP和BPDE低剂量联合染毒对卵巢颗粒细胞活性不具有交互作用,两者联合表现为相加作用。3. DEHP和B[a]P联合染毒诱发颗粒细胞凋亡发生增加,细胞凋亡与卵泡闭锁增加高度关联;Caspase-3的激活在细胞凋亡发生过程中发挥调控作用。DEHP和B[a]P联合染毒对卵巢颗粒细胞凋亡和Caspase-3表达具有交互作用,两者联合主要表现为协同作用。4.体内与体外实验相继证实,DEHP和B[a]P(MEHP和BPDE)联合毒性效应大于每种化学物质的单独作用,主要表现为毒性增强作用,联合类型以非交互作用为主。就毒性机制而言,DEHP和B[a]P(MEHP和BPDE)干扰PPARs/P450Arom信号通路导致雌激素合成障碍是联合毒性作用机制之一,DEHP和B[a]P(MEHP和BPDE)对P450Arom和PPARs蛋白表达具有交互作用,联合作用表现为协同作用。5.叁峡库区水环境PAEs和PAHs类有机物检出种类和含量较高,6种POPs污染物所致的健康危害年风险度目前还处于很低水平,但应引起管理部门的重视。
李金龙[5]2007年在《黑色素瘤抗原-4 DNA疫苗的构建及体内抑瘤效应的研究》文中指出本研究将人黑色素瘤抗原-4(MAGE-4)基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1+，构建真核表达载体pcDNA3.1+/MAGE-4，并对其表达进行鉴定。将pcDNA3.1+/MAGE-4转染小鼠结肠癌细胞CT26，建立表达人MAGE-4的鼠CT26细胞株。将质粒pcDNA3.1+/MAGE-4扩增后，作为核酸疫苗对小鼠进行肌肉注射，观察其对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响及对肿瘤的治疗和预防作用。结果表明，经质粒pcDNA3.1+/MAGE-4免疫治疗的小鼠其脾淋巴细胞CTL杀伤活性及脾淋巴细胞上清液中IL-2和IFN-γ明显强于或高于对照组，两者相比有显著性差异。在接种肿瘤细胞的小鼠中，经pcDNA3.1+/MAGE-4免疫治疗后能产生明显的预防和治疗肿瘤的作用。本研究提示MAGE-4作为肿瘤靶抗原可诱导产生明显的细胞免疫应答和体液免疫应答，对肿瘤的生成和发展有治疗和预防的作用。
石忠峰[6]2005年在《溃疡性结肠炎靶向治疗新药白术黄芪胶囊药学与药理学研究》文中研究指明研究背景和目的 慢性非特异性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种消化系统的常见疾病,发病原因目前仍不清楚,主要累及直肠和乙状结肠,也可侵及结肠的其它部位或全结肠。它的临床表现为腹痛、腹泻、便血、里急后重,以及便带脓样,排便习惯不正常等肠道器官受累症状。本病的发展一般为慢性,反复和交替发作,病程较长。目前已被世界卫生组织列为现代难治病之一。 现代医学一般认为溃疡性结肠炎涉及到遗传、免疫、感染、精神等多方面的因素,其中免疫因素在溃疡性结肠炎发病中的作用已经得到肯定,且成为研究的热点。现代药理学研究认为健脾益气中药黄芪、白术和甘草具有良好的免疫调节作用,尤其是其化学有效部位黄芪皂苷和甘草黄酮的免疫调节效果明显,药理学实验证实其有良好的抗消化道溃疡和胃肠道粘膜保护作用,临床报道用其治疗消化道溃疡和作为免疫调节剂亦不鲜见。我们前期研究证实甘草黄酮具有促进小肠上皮细胞(IEC-6)增殖的作用,白术提取部位B13和黄芪AS组分单用和配伍应用均具有诱导IEC-6分化或移行的作用,黄芪皂苷具有调节IEC-6分泌细胞因子的作用,故我们认为此叁类化学有效部位对溃疡性结肠炎应有一定疗效,经过我们的初步动物实验已经证实了这一点。金元四大家之一刘完素在《素问病机气宜保命集·卷中·泻痢论第十九》中说:“白术黄芪汤服前药。痢虽已除。犹宜此药和之。”其中的叁味药就是白术、黄芪和甘草,可见用此叁味药治痢由来已久。 目前治疗溃疡性结肠炎的中西成药已经不少,但存在药物病位定位性差,用药量大,疗效不很确切的缺点。目前国内外未见有治疗该病的中药有效部位的复方制剂,因此,为进一步研究黄芪、白术和甘草有效成分的药理学作用,探索合理的有效部位提取工艺,开发适合于临床的安全可靠,疗效确切的治疗UC的中药新药,我们拟采用先进的结肠靶向定位及黏附释药技术,将黄芪、白术和甘草的上述叁类有效部位制成复方结肠溶胶囊制剂,对于开展中医药治疗溃疡性结肠炎的新药研究具有重要意义。 研究方法 1.药学研究 1.1黄芪总皂苷提取分离工艺研究 采用乙醇回流法提取黄芪总皂苷,对不同浓度乙醇提取率进行比较;采用树脂吸
参考文献：
[1]. 大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因的克隆与筛选[D]. 王锋超. 第叁军医大学. 2003
[2]. 大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因消减cDNA文库的构建[J]. 王锋超, 高京生, 粟永萍, 徐辉, 王军平. 第叁军医大学学报. 2004
[3]. 《解放军医学杂志》2005年(第30卷)主题词索引[J]. 佚名. 解放军医学杂志. 2005
[4]. 邻苯二甲酸酯类和多环芳烃类代表物质联合雌性生殖毒性与健康风险评价研究[D]. 许川. 第叁军医大学. 2009
[5]. 黑色素瘤抗原-4 DNA疫苗的构建及体内抑瘤效应的研究[D]. 李金龙. 吉林大学. 2007
[6]. 溃疡性结肠炎靶向治疗新药白术黄芪胶囊药学与药理学研究[D]. 石忠峰. 广州中医药大学. 2005