导读:本文包含了荧光蛋白基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:荧光,蛋白,干细胞,基因,转染,病毒,骨髓。
荧光蛋白基因论文文献综述
张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊[1]（2019）在《慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究》一文中研究指出目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。(本文来源于《现代口腔医学杂志》期刊2019年05期）
朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜[2]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。(本文来源于《延安大学学报(医学科学版)》期刊2019年03期）
韩辉,代兴亮,程宏伟,兰青[3]（2019）在《稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞可自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化》一文中研究指出背景:异种移植瘤中宿主来源间质细胞恶性转化已有报道,但是对恶变的机制知之甚少。目的:旨在使用双色荧光示踪的体内模型研究宿主来源肿瘤间质细胞的恶性转化,并探讨可能的机制。方法:将稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞(glioma-initiatingcellstransfectedwithred fluorescent protein gene,GICs-RFP)接种到表达绿光荧光蛋白的裸鼠体内,建立具有2种荧光的动物模型;通过激光共聚焦观察移植瘤的荧光表达;流式细胞仪检测和分选各种荧光细胞,包括绿色荧光蛋白细胞、红色荧光蛋白细胞和表达这2种荧光的融合细胞;体外亚克隆得到具有恶性肿瘤细胞特征的同时表达绿色荧光蛋白/红色荧光蛋白两种荧光的融合细胞;体外鉴定细胞来源、表面标记物和恶性特征,裸鼠皮下移植验证融合细胞致瘤特性。实验经苏州大学动物实验伦理委员会批准,批准号为ECSU-201800090。结果与结论:GICs-RFP在绿色荧光蛋白裸小鼠的体内致瘤率均为100%(14/14);动物移植瘤模型中均可观察到融合细胞,分选、克隆到的融合细胞不仅共表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白,而且共表达GICs-RFP标记物Nestin和骨髓间充质干细胞标记物CD44、CD105和CD29;融合细胞在体外表现出高度增殖活性,较GICs-RFP更具侵袭和迁移特征;融合细胞(1×105个/只)在无胸腺裸小鼠的致瘤率为100%(4/4)。提示GICs-RFP自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化,为肿瘤异质性的细胞来源提供了新的双色荧光示踪的证据。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年25期）
王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川[4]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的本实验研究旨在研究使用携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP的慢病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BMSCs)的方法,用于解决组织工程骨研究中种子细胞分化、增殖过程中的示踪问题。方法用携带eGFP的慢病毒转染第3代BMSCs,用流式细胞仪检测转染率,获得稳定表达eGFP的BMSCs,并通过描绘生长曲线来判定对BMSCs增殖性能的影响。结果当MOI值为70时,经eGFP慢病毒转染后的BMSCs能够得到活性较好、转染率高的eGFP-BMSCs;转染后各细胞生长曲线呈"S"形,MOI=70与MOI=0时细胞增殖最好,MOI=100会对BMSCs增殖造成影响。结论 MOI=70时携载eGFP基因慢病毒转染BMSC效果最好。(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2019年05期）
姚锦爱,张鸿,黄鹏,陈峰,余德亿[5]（2019）在《建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02的绿色荧光蛋白基因标记》一文中研究指出【目的】开展建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02的绿色荧光蛋白标记研究,直观观察尖孢镰刀菌在建兰植株上的侵染为害,明确病原菌的致病过程,为开展建兰茎腐病原菌的相关研究提供良好技术手段。【方法】采用农杆菌介导法对建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02进行绿色荧光蛋白(GFP)转化,并检测转化子的遗传稳定性。【结果】GFP基因可被成功导入到尖孢镰刀菌F-02中并获得表达,转化子在蓝色光源激发下,菌丝和分生孢子均能稳定散发绿色荧光;转化子10次继代培养后菌落生长良好,菌丝和分生孢子仍可稳定散发出绿色荧光,对寄主植物的致病力也未发生改变,【结论】GFP基因可在建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02中稳定存在,并对其致病力没有影响。(本文来源于《福建农业学报》期刊2019年01期）
朱丽萍,刘聪聪,宋书真,刁斌[6]（2019）在《甲基营养菌Methylobacterium extorquens AM1中最适荧光蛋白报告基因的鉴定》一文中研究指出近年来荧光蛋白成为基因工程中常用的遗传标记,详尽解读不同荧光蛋白基因在甲基营养菌中的表达可以鉴定最适的荧光报告基因。克隆了常用的绿色荧光蛋白eGFP、红色荧光蛋白mCherry、黄色荧光蛋白YFP以及其他来源的绿色荧光蛋白wGFP和红色荧光蛋白RFP共5种荧光基因,构建相应的表达载体并在甲基营养菌Methylobacterium extorquens AM1中进行表达。通过荧光成像观察和SDS-PAGE蛋白凝胶电泳进行荧光蛋白表达鉴定。通过细菌生长曲线、荧光总量和相对荧光强度的测定,进行荧光稳定性和表达强度的鉴定。结果在转化子中均检测到目的荧光蛋白条带,但RFP荧光表达量痕量且未检测到荧光成像;稳定性最强和相对荧光强度最高的是YFP,是常用eGFP的1.6倍,mCherry的3.4倍。在M. extorquens AM1中最适荧光蛋白为YFP。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年04期）
何凌峰[7]（2018）在《《分子生物学实验》课程教学改革实践——以绿色荧光蛋白基因的分子克隆实验为例》一文中研究指出为提升分子生物学实验课程的教学效果,以绿色荧光蛋白基因克隆构建为主题的综合性实验为例,从课题方案设计与实施、课堂效果及其存在的问题展开分析,发现了延续性主题实验对开发大学生的学习潜力和创造性,培养科研思维和发现问题的能力,以及实践动手能力具有良好推动,同时课堂把启发式和讨论式等教学方法进行综合运用,为分子生物学实验的教学改革做出了新的探索。(本文来源于《教育现代化》期刊2018年47期）
罗军[8]（2018）在《一套C末端荧光蛋白融合表达的果蝇定点转基因载体的系统性构建》一文中研究指出果蝇转基因技术是研究基因表达、基因调节和基因功能的重要工具。早期的果蝇转基因技术依赖于P因子。随着技术的发展,近年来发展出了基于噬菌体Phi C31转座酶的位点特异性转基因技术。这种技术比基于P因子的转基因技术效率更高,可以兼容更大的转基因片段,不需要对插入位点进行定位,并且不同的转基因载体可以插入相同的位点,有利于不同的转基因之间进行比较。除了转基因技术,近年来荧光蛋白技术也得到了长足的发展,新型的荧光蛋白不断出现,荧光蛋白的亮度、光稳定性和成熟时间得到了很大的改进。荧光蛋白在生物研究中有广泛应用,包括作为基因表达的标记、蛋白动态定位的标记、细胞形态的标记、亚细胞结构的标记、细胞活性的标记、蛋白相互作用的标记等。在果蝇研究中,荧光蛋白虽然也得到了广泛的应用,但许多新型荧光蛋白尚未得到普及,当我们在构建荧光蛋白融合表达载体时需要耗费额外的时间进行多步的克隆操作。在这里,我们系统性的构建了一整套基于Phi C31定点转基因技术的C末端荧光蛋白融合表达的果蝇转基因载体。这套转基因载体不仅结合了多种新型荧光蛋白,提供了从蓝色到红色多种不同波长的荧光蛋白可供选择,还结合了多种增强子或启动子来调节表达,包括果蝇转基因中常用的叁种二元表达系统、两种泛表达启动子和一种早期胚胎母源表达启动子。利用这套转基因载体,可以减少克隆步骤,缩短实验时间,普及荧光蛋白的应用,并且为基因表达、蛋白定位、活体成像以及蛋白相互作用等方面的研究提供重要的工具。另外,为了避免在行为学实验中转基因载体中的选择标记基因white对果蝇行为产生影响,我们同时原样系统性的建立了一套使用vermilion做为选择标记基因的荧光蛋白融合表达的果蝇定点转基因载体。我们对这些载体在体内进行了一些转基因测试,实验证明这些载体能有效的表达有功能的带有荧光蛋白标签的融合蛋白。(本文来源于《第十一届中国生命科学公共平台管理与发展研讨会摘要集》期刊2018-07-18）
武成聪,荣树,任静,吴铮,刘涛[9]（2018）在《腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性》一文中研究指出背景:重组腺病毒对细胞生长、存活存在一定的毒性反应,其最适感染复数的确定相关研究较少。目的:研究重组腺病毒在不同感染复数下其转染效率、细胞毒性及对骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的影响。方法:携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺毒载体分别以感染复数为0,50,100,150,200,250转染第5代骨髓间充质干细胞。转染24 h后观察细胞形态,锥虫蓝染色计数死亡率;转染48 h后荧光倒置显微镜下计算转染率,q PCR检测EGFP及Runx2基因表达量。MTT法评价不同感染复数转染对细胞活性的影响,确定最佳感染复数。结果与结论:(1)随感染复数值增加,骨髓间充质干细胞贴壁能力减弱,部分细胞老化、死亡;(2)以感染复数值为0,50,100,150,200,250转染24 h,其细胞死亡率依次为5.80%,6.67%,7.95%,7.76%,10.35%,11.18%,死亡率与感染复数值成正相关;(3)当感染复数值为100时即可达到最大转染效率,但当感染复数增大至200时,细胞活性即受到影响;当感染复数达到250时,骨髓间充质干细胞成骨分化潜能受到影响;(4)通过上述结果可以认为,腺病毒转染兔骨髓间充质干细胞的感染复数安全范围为50-150,其最适感染复数为100。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年17期）
董乐[10]（2018）在《基因编辑创制玉米母体孤雌生殖单倍体诱导系与高效双荧光蛋白单倍体鉴定体系构建》一文中研究指出玉米是重要的粮食、饲料和工业原料作物。与传统育种技术遗传纯合需要8个世代相比,双单倍体(DH)育种技术只需两代即可获得纯系,具有重要的技术优势与育种实践价值。DH育种技术包括单倍体的诱导、单倍体筛选与染色体加倍等叁个主要技术环节。前人ZmMTL/ZmPLA1基因克隆与功能鉴定研究已为基因编辑靶向突变创制高频孤雌生殖单倍体诱导系奠定了重要基础。当前玉米单倍筛选鉴定主要基于R1-nj花青素标记或胚高油性状区分单倍体与二倍体。然而,R1-nj标记在部分受体中受到抑制,且大规模人工鉴定耗时费力;高油标记仅适用于油分含量较高的受体,限制了DH技术的应用。此外,通过回交导入R1-nj与油份性状到受体耗时费力。而且,R1-nj标记与高油性状无法推广应用于玉米之外的其它重要禾本科物种。因此,创制以任意基因型为受体的高频孤雌生殖单倍体诱导系并配套稳定高效的单倍体筛选技术,具有重要的种业应用价值。本研究旨在利用基因编辑技术CRISPR/Cas9技术靶向敲除玉米Zm MTL基因创制高频孤雌生殖单倍体诱导系,同时建立一种适用于禾本科作物的单倍体筛选双荧光蛋白标记系统。鉴于MTL基因在禾本科作物中的保守性,该研究以玉米为范例,探讨了在禾本科作物中基于基因编辑创制孤雌生殖诱导系并配套以高效稳定单倍体鉴定方法的DH育种技术体系,为禾本科作物遗传育种奠定了重要技术基础。主要结果如下:1、在本研究小组前期鉴定玉米内源RNA合酶III识别启动子的基础上,构建了ZmU6-2启动子驱动靶向玉米Zm MTL基因的单分子指导RNA(single guide RNA,sgRNA)的CRISPR/Cas9表达载体。以玉米自交系ZC01为受体,通过农杆菌介导的幼胚稳定遗传转化,获得58个独立的阳性转化体。T0代株系ZmMTL基因目标区域突变(mMTL)鉴定结果表明靶向突变率达到87.06%,获得11个纯合和37个双等位突变mMTL株系,供后续分析与应用。2、分别以中单99、泽玉7和泽玉8等品种为受体,验证了创制的mMTL株系单倍体诱导能力。其中,mMTL纯合株系3-8、mMTL双等位株系3-29与3-59诱导中单99单倍体诱导率分别为9.09%、6%和5.3%。以泽玉7和泽玉8作受体,mMTL纯合株系3-8单倍体诱导率分别为11.57%和5.45%。结果表明本研究基于CRISPR/Cas9创制的MTL突变系具有较高频率的孤雌生殖单倍体诱导能力。3、从玉米自交系B73与大麦品种Morex中分别分离了胚特异性启动子ZmESP与胚乳糊粉层特异性启动子HvASP,构建了胚特异表达绿色荧光蛋白(eGFP)和胚乳特异表达红色蛋白(DsRED)双标记表达盒(DFP,double-fluorosence-proteins)。采用基因枪法转化玉米、小麦、水稻与大麦未成熟胚与胚乳瞬时表达结果验证了DFP组织表达特异性。构建了DFP稳定表达载体,以玉米自交系ZC01为受体,通过农杆菌介导的幼胚稳定遗传转化获得48个稳定转化株系,从中分离鉴定出14个单拷贝株系。4、分别通过手持式荧光激发光源、荧光体式显微镜与激光共聚焦显微镜对DFP转基因株系籽粒组织特异性荧光表达表型进行鉴定。结果表明,在全籽粒、幼胚与细胞水平于488nm激发光下胚部特异发射绿色荧光,胚乳糊粉层细胞特异发射红色荧光。表明DFP可以准确区分胚和胚乳以应用于单倍体和二倍体的区分和鉴定。5.将同为ZC01背景单拷贝DFP株系和mMTL突变株系授粉杂交,创制了5个既具有高频孤雌生殖单倍体诱导能力又具有稳定高效单倍体筛选的DFP标记株系。将DFP株系和当前较广泛应用的常规单倍体诱导系CAU5和H3杂交,创制了以CAU5和H3作为遗传背景的含有稳定高效单倍体筛选的DFP标记株系。6.构建了DFP标记表达盒与靶向编辑ZmMTL基因编辑表达盒融合载体,通过农杆菌介导稳定遗传转化受体自交系ZC01,获得了5个低拷贝转基因株系。该融合表达转基因株系为一步法创制含有高效单倍体筛选的DFP标记高频诱导系奠定了材料基础。综上所述,本研究通过基因编辑技术定点突变Zm MTL基因创制了高效的孤雌生殖单倍体诱导系,同时建立了可应用于玉米、水稻、小麦与大麦的高效单倍体筛选鉴定DFP标记,为DH育种技术在多种作物中的广泛应用奠定了技术和材料基础。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-05-01）
荧光蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
荧光蛋白基因论文参考文献
[1].张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊.慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究[J].现代口腔医学杂志.2019
[2].朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法[J].延安大学学报(医学科学版).2019
[3].韩辉,代兴亮,程宏伟,兰青.稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞可自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化[J].中国组织工程研究.2019
[4].王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法[J].昆明医科大学学报.2019
[5].姚锦爱,张鸿,黄鹏,陈峰,余德亿.建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02的绿色荧光蛋白基因标记[J].福建农业学报.2019
[6].朱丽萍,刘聪聪,宋书真,刁斌.甲基营养菌MethylobacteriumextorquensAM1中最适荧光蛋白报告基因的鉴定[J].生物技术通报.2019
[7].何凌峰.《分子生物学实验》课程教学改革实践——以绿色荧光蛋白基因的分子克隆实验为例[J].教育现代化.2018
[8].罗军.一套C末端荧光蛋白融合表达的果蝇定点转基因载体的系统性构建[C].第十一届中国生命科学公共平台管理与发展研讨会摘要集.2018
[9].武成聪,荣树,任静,吴铮,刘涛.腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性[J].中国组织工程研究.2018
[10].董乐.基因编辑创制玉米母体孤雌生殖单倍体诱导系与高效双荧光蛋白单倍体鉴定体系构建[D].中国农业科学院.2018
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