DENND1B蛋白对AP2B1蛋白细胞中表达及分布影响的研究

DENND1B蛋白对AP2B1蛋白细胞中表达及分布影响的研究

论文摘要

为探究含DENN结构域蛋白1B (DENND1B)对网格蛋白依赖性内吞接头蛋白复合体(AP-2)的β亚基(AP2B1)的影响,本实验利用si RNA干扰技术以及慢病毒包装过表达系统改变DENND1B蛋白的表达水平,通过荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及激光共聚焦技术研究DENND1B蛋白对AP2B1蛋白的表达以及细胞内定位的影响。结果显示:DENND1B蛋白沉默后能够下调AP2B1蛋白的表达,而过表达DENND1B后能够上调AP2B1蛋白的表达,并且干扰DENND1B蛋白表达后能够显著性地改变AP2B1在细胞内的定位(p<0.05),使AP2B1蛋白由核周聚集改变为胞质弥散分布。上述结果表明DENND1B蛋白能够调控AP2B1蛋白的表达以及细胞定位。本实验为研究接头蛋白以及网格蛋白依赖性的质膜内吞途径提供了新的切入点。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要实验材料
  •   1.2 s i RNA干扰试验
  •   1.3 引物合成
  •   1.4 DENND1B s i RNA干扰效果的荧光定量P CR(qP CR)检测
  •   1.5 DENND1B过表达细胞的构建与鉴定
  •   1.6 DENND1B表达对AP 2B1蛋白表达影响的检测
  •   1.7 DENND1B表达对AP 2B1定位影响的检测
  •   1.8 数据分析
  • 2 结果
  •   2.1 s i RNA干扰DENND1B基因表达效果的检测结果
  •   2.2 DENND1B过表达细胞的构建与鉴定
  •   2.2 DENND1B对AP 2B1蛋白表达水平影响的检测结果
  •   2.3 激光共聚焦检测DENND1B对AP 2B1细胞内定位影响的检测结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李奇兵,赵玉辉,王广文,温霞,梁立滨,李俊平,黄山雨,孙楠,姜丽,陈化兰,李呈军

    关键词: 干扰,过表达

    来源: 中国预防兽医学报 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室

    基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0500205)

    分类号: Q51

    页码: 940-944

    总页数: 5

    文件大小: 1657K

    下载量: 105

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