李彦[1]2004年在《马尾藻多糖的分离、纯化及其作为免疫佐剂对猪PRRS病免疫效果的影响研究》文中研究指明以广西北海涠洲岛特有的马尾藻为原料，探索了马尾藻多糖的提取分离及纯化方法，测定了多糖的分子量及其单糖构成。并利用马尾藻多糖作为佐剂探索其对疫苗免疫效果的影响。 1．马尾藻多糖的提取分离及纯化 采用超声波细胞破壁的方法对马尾藻进行预处理，作用时间20分钟，80℃水浴1小时，过滤，离心，浓缩，用工业酒精沉淀出多糖，干燥后得粗多糖，提取率为13.12％，比传统热提法提高8.73％，比胶体磨法提高1.39％，而提取时间分别比胶体磨法和传统热提法缩短300分钟和420分钟。粗多糖再经过滤、酶解与透析后得到多糖SP。 通过DEAE—纤维素层析对马尾藻多糖SP进行分离，得出粗多糖由SP-Ⅰ、SP-Ⅱ、SP-Ⅲ叁种组分组成，其所占比例分别为31.4％、23.8％和8.1％。再经SephadexG-100凝胶柱层析进一步分离纯化得到均一的多糖组分SSP-Ⅰ、SSP-Ⅱ、SSP-Ⅲ。凝胶色谱法测定这叁种多糖组分的分子量为53862、46536和49866。高效液相色谱分析SSP-Ⅰ、SSP-Ⅱ均由阿拉伯糖、木糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比分别为0.012：0.18：0.676：0.144和0.015：0.178：0.685：0.122；SSP-Ⅲ由鼠李广西大学硕一!:学位论文糖、木糖、葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比为0.039:0.1 21:0.726:0.1 14。2.马尾藻多糖佐剂对猪pRRS疫苗免疫效果的影响 用多糖sP按低剂量组(50mg)、中剂量组(1 00mg)、高剂量组(200mg)分别与猪PRRS灭活抗原配制成完全佐剂疫苗，免疫5组非猪PRRsV免疫猪，每组5头，设空白组和普通佐剂疫苗组作对照，于首免的第0天、20天、40天、50天采血，测定体液免疫和细胞免疫水平。试验结果表明:(1)各多糖佐剂组T淋巴细胞转化率(61 .4%、65%、63.4%)均高于空白组(52.8%)及普通佐剂疫苗组(59.6%)，各多糖佐剂组与空白对照组间差异显着(p<0.05);(2)各多糖佐剂组的丁淋巴细胞亚群数量均高于空白组和普通佐剂疫苗组，其中以co3的数量差异最明显(p<0 .05)，但多糖组与普通佐剂疫苗组的CDS和NK细胞亚群的测定值差异不显着。(3)间接ELASA法测定各多糖佐剂组血清中抗体的活性(0.631、1 .015、0.688)均高于两对照组(0.518、0.568)，其中1 oomg多糖佐剂组与对照组间的差异显着 (P(0 .05)。 研究结果表明:以马尾藻多糖作为佐剂即可以提高体液免疫水平，又能增强细胞免疫功能，其中100mg多糖剂量的总体效果最佳。
王博[2]2010年在《硇洲马尾藻（S.naozhouense sp.nov.）多糖的提取、分离纯化及抑菌活性研究》文中指出本研究以硇洲马尾藻(S. naozhouense sp. nov.)为研究材料,主要分析了其基本营养成分,研究了其多糖的提取、分离、纯化、化学组成与结构,并对分离纯化后的多糖抑菌活性做了初步探讨。对硇洲马尾藻的基本营养成分分析测定,结果显示:碳水化合物、蛋白质和灰分是硇洲马尾藻的主要成分,占藻体干重的85%左右。其中不溶性膳食纤维占藻体干重的10.88%;蛋白质占13.95%;必需氨基酸丰富,占氨基酸总量的41%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为0.69;脂肪含量为2.4%,不饱和脂肪酸含量高;矿质元素含量丰富,尤其是铁和锌含量高。对硇洲马尾藻多糖提取工艺进行了优化:在单因素试验基础上,选择提取温度,提取时间,料液比为自变量,多糖得率为响应值,利用Box-Benhnken中心组合试验和响应面分析法,研究各自变量交互作用及其对硇洲马尾藻多糖得率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型,最终确定硇洲马尾藻多糖提取最佳工艺。得出的最佳提取工艺为:料液比1:21,提取温度90.7℃,提取时间5.1h;在此条件下,硇洲马尾藻多糖得率达到6.39%。热水浸提得到的粗多糖SNP(S. naozhouense sp. nov. polysaccharides)经过DEAE-52纤维素离子交换柱层析后,得到5个洗脱峰,收集其中最主要的两个峰,分别命名为SNP2和SNP3,再将SNP2和SNP3过Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析进一步纯化,得到SNP2-2和SNP3-2两个较纯的多糖组分。通过醋酸纤维薄膜电泳鉴定出SNP2-2和SNP3-2为两个组成比较均一的多糖组分;红外光谱分析得出SNP2-2和SNP3-2均具有多糖相关基团的特征吸收峰;气相色谱分析得出, SNP2-2主要是由甘露糖和葡萄糖组成,含少量木糖和半乳糖,其摩尔比木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖为0.25∶1.37∶1∶0.17;SNP3-2主要是由阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖组成,也含少量木糖和半乳糖,其摩尔比为阿拉伯糖∶木糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖为0.44∶0.28∶1.10∶1∶0.23;凝胶渗透色谱分析得出SNP2-2的分子量为8.30×104Da,SNP3-2的分子量为1.22×105Da。通过酶标仪法评定了SNP2-2和SNP3-2的体外抑菌活性,得出当浓度达到1.25mg/mL时,两种多糖组分均有较好的抑菌活性;通过扫描电镜观察初步推断SNP2-2和SNP3-2的抑菌机理可能为抑制细菌的正常分裂增殖。目前,国内外尚无有关硇洲马尾藻(S. naozhouense sp. nov.)多糖的研究报道,本试验为首次对其提取、分离纯化、化学组成、结构及生物活性进行了初步的研究。以期为硇洲马尾藻的开发与利用提供基础的理论依据。
参考文献：
[1]. 马尾藻多糖的分离、纯化及其作为免疫佐剂对猪PRRS病免疫效果的影响研究[D]. 李彦. 广西大学. 2004
[2]. 硇洲马尾藻（S.naozhouense sp.nov.）多糖的提取、分离纯化及抑菌活性研究[D]. 王博. 广东海洋大学. 2010