导读:本文包含了克隆特性论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:石竹,草鱼,基因,转录,甘露,因子,蛋白。
克隆特性论文文献综述
孙婷婷,刘增才,王世新,王旭彤,邹莉[1]（2019）在《桑黄HMGS基因克隆、分子特性及差异表达分析》一文中研究指出目的对参与桑黄叁萜合成途径的关键酶羟甲基戊二酰辅酶A合酶(3-hydroxy-3-methylglutaryCoAsynthase,HMGS)进行基因全长克隆、分子特性及差异表达分析研究。方法采用RACE技术克隆HMGS基因全长,并对其序列进行生物信息学分析;构建桑黄HMGS基因到表达载体pET-32a (+)上,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达后SDS-PAGE检测;用荧光定量PCR的方法分析其不同发育阶段表达特性。结果 HMGS基因cDNA全长为1 930 bp,包含1个1 458 bp的完整开放阅读框,编码485个氨基酸。该基因编码蛋白的相对分子质量约为52 750,理论等电点是5.60,为亲水性蛋白,不具有跨膜结构,不含信号肽序列;系统发育分析表明,桑黄HMGS与地中海拟层孔菌Fomitiporia mediterranea中的HMGS同源性最高,属于一个分支。SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小与预测的蛋白相对分子质量基本一致。HMGS基因的转录水平在桑黄不同发育阶段呈动态变化,该基因在菌丝体阶段的转录水平要高于原基及子实体阶段的转录水平。HMGS基因的最高转录水平出现在第14天,为对照第5天的2.33倍。结论 HMGS基因的分子鉴定为进一步解析该基因在桑黄叁萜类物质合成代谢途径中的分子调控作用奠定基础。(本文来源于《中草药》期刊2019年23期）
隋娟娟,邓红祥,杨京霞,孙晶晶,屈长青[2]（2019）在《香椿TsCAD1基因的克隆与非生物胁迫下的表达特性》一文中研究指出肉桂醇脱氢酶(CAD)是木质素生物合成的关键酶之一,为探讨肉桂醇脱氢酶基因在香椿抵抗非生物胁迫方面发挥的作用,本研究从香椿转录组数据中筛选并克隆得到1个CAD基因,其开放阅读框为1 068 bp,共编码355个氨基酸,结构域分析发现香椿CAD蛋白含有1个NADP(H)辅酶结构域,2个Zn结合位点,系统进化树分析表明香椿CAD与柑橘CAD1亲缘关系最近,将其命名为Ts CAD1。实时荧光定量PCR结果显示,Ts CAD1在香椿幼苗根中的表达量显着高于茎与叶中的表达量;38℃高温胁迫24 h期间,Ts CAD1在香椿叶片中的表达量呈现先降低后显着上升的趋势;4℃低温胁迫24 h期间,Ts CAD1的表达呈现先上升后下降的趋势;200 g/L PEG6000干旱胁迫24 h期间,Ts CAD1的表达趋势为先下降后上升又下降,但其表达水平均低于对照;200 mmol/L Na Cl盐胁迫处理24 h期间,Ts CAD1的表达表现为先下降后上升,其表达水平均低于对照。根据以上结果推测香椿Ts CAD1基因可能在香椿的非生物胁迫防御机制方面发挥功能,该试验结果为通过分子生物技术改良香椿的栽培抗性提供了理论参考。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年10期）
吴忠香,张雪梅,徐婧雯,宋杰,李慧[3]（2019）在《抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定》一文中研究指出目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒p GEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E. coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204 800、1∶204 800、1∶3 200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5. 5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
梁金金,何超,刘少楠,谢文,张友军[4]（2019）在《烟粉虱MED隐种抑制蛋白基因Btarrestin的克隆及特性分析》一文中研究指出【目的】明确烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种抑制蛋白基因Btarrestin是否参与吡虫啉耐药性。【方法】根据已有烟粉虱转录组数据,利用RT-PCR克隆Btarrestin的全长序列,进行生物信息学分析。通过qPCR分析Btarrestin在烟粉虱MED隐种各个龄期(卵,1-2龄、3龄、4龄若虫,雌、雄成虫)以及吡虫啉处理(100 mg/L)后成虫中的表达量变化,明确其时空表达模式。利用RNAi技术沉默Btarrestin,观察沉默前后Btarrestin表达量和烟粉虱MED隐种成虫死亡率变化。【结果】成功克隆烟粉虱MED隐种Btarrestin的cDNA序列(GenBank登录号:MK204377),编码区全长1 227 bp,编码409个氨基酸,预测所编码的蛋白分子量约为45.33 kD,理论等电点(pI)为8.38。保守结构域分析表明,Btarrestin具有Arrestin_N和Arrestin_C两个超家族保守结构域,符合抑制蛋白家族特征。分子系统树分析表明,Btarrestin与褐飞虱Nilaparvata lugens的Arrestin亲缘关系最近。Btarrestin的表达量随烟粉虱MED隐种的生长发育逐渐升高,成虫期表达量最高。100 mg/L吡虫啉处理成虫24 h后Btarrestin的表达量较对照增加了2.39倍。RNAi干扰Btarrestin后进行生物测定,烟粉虱MED隐种成虫的死亡率上升了31.27%。【结论】Btarrestin可能与烟粉虱MED隐种对吡虫啉的耐药性有关。(本文来源于《昆虫学报》期刊2019年10期）
李玲,谭瑶,周晓榕,庞保平[5]（2019）在《沙葱萤叶甲气味结合蛋白GdauOBP20的基因克隆、原核表达及其结合特性》一文中研究指出【目的】沙葱萤叶甲(Galeruca daurica)是近年来在内蒙古草原上暴发成灾的新害虫,本文旨在克隆沙葱萤叶甲气味结合蛋白基因GdauOBP20的cDNA全长序列,明确其重组蛋白与寄主植物挥发物的结合特性,为揭示沙葱萤叶甲嗅觉的分子机理打下基础。【方法】基于沙葱萤叶甲转录组数据,利用RACE技术对沙葱萤叶甲气味结合蛋白基因GdauOBP20进行cDNA全长克隆;利用生物信息学软件预测分析其编码蛋白的理化特性和结构特征;通过原核表达系统表达目的蛋白,并使用Ni-NTA Agarose亲和层析柱进行重组蛋白纯化。最后采用荧光竞争结合的方法,以N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)为荧光探针,检测GdauOBP20重组蛋白与13种主要寄主挥发物的结合情况。【结果】GdauOBP20的cDNA全长序列为567 bp(GenBank登录号MK250532),其中5′末端非编码区长24 bp,3′末端非编码区长123 bp,具有ployA尾结构;开放阅读框(ORF)全长为420 bp,编码139个氨基酸。氨基酸序列中含有4个保守的半胱氨酸位点,属于Minus-C OBP亚家族。预测蛋白叁级结构中含有6个α螺旋和两对由半胱氨酸形成的二硫键。成功构建了重组表达载体并获得了高纯度的重组蛋白。重组蛋白GdauOBP20与荧光探针1-NPN的结合常数为12.8μmol·L-1,结合能力较好,可作为本试验的荧光报告子。在所测的13种主要寄主植物挥发物中,除与二烯丙基叁硫醚无结合能力外,GdauOBP20重组蛋白与其他12种寄主植物挥发物均有不同程度的结合能力,其中与对二甲苯和环庚叁烯的结合能力最强,解离常数分别为22.91和26.55μmol·L-1,而与月桂烯结合能力最弱,解离常数为116.29μmol·L-1。【结论】沙葱萤叶甲GdauOBP20能与寄主植物的多种主要挥发性物质结合,推测其可能在沙葱萤叶甲对寄主植物的定位过程中发挥重要的作用。(本文来源于《中国农业科学》期刊2019年20期）
万雪丽,冯依,刘庆华,王奎玲[6]（2019）在《香石竹DcHsfA4基因克隆及表达特性分析》一文中研究指出热激转录因子(heat shock transcription factors, Hsfs)是响应逆境信号的重要元件。以香石竹(Dianthus caryophyllus)品种'Fancy'为材料,克隆得到热激转录因子基因DcHsfA4的完整编码序列(GenBank No. MN096327),序列全长1 173 bp,编码390个氨基酸。生物信息学分析结果显示,DcHsfA4蛋白分子式为C1963H3051N577O625S8,分子量为44.99 kD,理论等电点为5.48,脂肪系数71.95,不稳定系数49.72,预测为不稳定蛋白。疏水性/亲水性预测表明DcHsfA4蛋白为亲水蛋白。蛋白跨膜性分析显示DcHsfA4属于非跨膜蛋白。二级结构预测显示,DcHsfA4氨基酸组成包括α-螺旋(42.56%)、延伸链(6.67%)、β-折迭(3.08%)和无规则卷曲(47.69%),属于不规则结构。氨基酸序列比对显示,DcHsfA4含有高度保守的DNA结合域,此外,还包含疏水7肽重复区,核定位信号序列和C末端激活域。系统进化分析表明,DcHsfA4与拟南芥(Arabidopsis thaliana) AtHsfA4同源性最高。利用qRT-PCR技术分析了DcHsfA4在常温或不同非生物胁迫处理下的表达特性,结果显示,在42℃胁迫、ABA或甘露醇分别处理后DcHsfA4的表达水平显着提高(P<0.05),4℃胁迫下,不同时间点DcHsfA4的表达模式不同,干旱处理24 h或NaCl处理12 h诱导了DcHsfA4的转录本上调表达。该研究结果为进一步探究香石竹热激转录因子的特性及响应逆境的生物学功能提供了依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年10期）
张婷,杨永恒,孙玉明,侯孟兰,李丕睿[7]（2019）在《甜菊耐寒相关基因SrDREB1As的克隆与转录因子特性分析》一文中研究指出AP2/ERF转录因子家族中DREB亚族的A-1亚组基因对植物耐寒性具有显着的调控作用。本研究通过同源克隆的方法在甜菊中获得2个A-1亚组基因,分别命名为SrDREB1A1和SrDREB1A2(NCBI基因登录号分别为MK163640和MK163641)。SrDREB1A1 ORF全长660 bp,编码219个氨基酸残基,预测的蛋白分子量为24.58 kDa,等电点为5.42。SrDREB1A2 ORF全长630 bp,编码209个氨基酸残基,预测的蛋白分子量和等电点分别为23.21 kDa和5.41。进化树分析发现,SrDREB1A1和SrDREB1A2分别与紫茎泽兰的AaCBF及菊花的DgDREB1A亲缘关系最近,序列分析发现二者都具有一个典型的AP2结构域。进一步对蛋白功能研究发现,SrDREB1A1和SrDREB1A2都定位在细胞核并且具有转录激活活性。本研究将通过转基因手段为提高甜菊的耐寒性提供重要的基因资源。(本文来源于《中国糖料》期刊2019年04期）
刘益,刘巧林,陈开健,乔庆,谭素梅[8]（2019）在《草鱼(Ctenopharyngodon idella)组织蛋白酶L基因克隆及表达特性分析》一文中研究指出为探究组织蛋白酶L(Cathepsin L,CtsL)是否在草鱼(Ctenopharyngodon idella)体内发挥免疫功能,根据已构建的草鱼肌肉转录组数据库中unigene序列,采用RACE技术首次克隆得到全长为1 496 bp的草鱼组织蛋白酶L基因(CiCtsL)cDNA序列。序列分析和同源建模显示该基因编码的蛋白具备组织蛋白酶前体抑制结构域I29和木瓜蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶Pept_C1结构域。系统进化分析表明,CiCtsL与斑马鱼CtsL聚为一支。CiCtsL mRNA在7个组织中均有表达,其中肝脏中的相对表达水平最高。感染GCRV后,CiCtsL在各组织中的表达量显着上调,呈现先上升后下降的趋势。研究表明CiCtsL参与了草鱼抵抗GCRV的免疫应答反应,可在草鱼先天免疫调控中发挥重要作用。(本文来源于《湖南师范大学自然科学学报》期刊2019年05期）
姜瑶瑶,李静,蔡年俊,陈剑平,张恒木[9]（2019）在《一个植物原纤维蛋白基因的克隆及其表达特性分析》一文中研究指出植物原纤维蛋白(fibrillin, FBN)作为一大类保守的蛋白,广泛分布于植物界,但其在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中的生物学特性和功能迄今尚不清楚。为了分析其表达特性和功能,采用RT-PCR技术从本氏烟中扩增并克隆了1个FBN基因(NbFBN)。进化树分析显示,NbFBN和拟南芥FBN1a、FBN1b的亲缘关系较近;同源分析表明,它与不同植物来源的FBN基因高度同源,其C-端部分尤为保守。定量分析发现,NbPAP在叶片和花中的表达水平较高,同时发现该基因受到干旱胁迫和激素ABA的诱导,表明该基因可能参与非生物逆境响应过程。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2019年09期）
许娟,石云平,苏祖祥,林茜,李小泉[10]（2019）在《白及PMM基因cDNA序列克隆及甘露糖合成相关基因的表达特性分析》一文中研究指出【目的】克隆白及磷酸甘露糖变位酶(PMM)基因(BsPMM)cDNA序列,并检测甘露糖合成相关基因的表达特性,为研究甘露糖合成相关基因的调控功能及白及多糖合成机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR克隆BsPMM基因cDNA序列,对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BsPMM和GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(BsGMP)在不同品种(桂及1号和桂及2号)、生育期(苗期、生长旺期和成熟期)和组织(叶片、茎、假鳞茎和根)中的表达特性,同时测定不同生育期假鳞茎的多糖和甘露糖含量。【结果】克隆获得的BsPMM基因c DNA全长1062 bp,包含一个759 bp的开放阅读框(ORF),编码252个氨基酸,该基因编码的蛋白BsPMM定位于细胞质,含一个从细胞内部到外部的跨膜螺旋区;不稳定系数为41.67,为不稳定蛋白;总平均疏水指数为-0.304,为亲水性蛋白,含植物PMM蛋白特有的4个保守结构域,属于HAD超家族成员。BsPMM蛋白与单子叶植物尤其是兰科植物铁皮石斛和蝴蝶兰PMM蛋白的亲缘关系较近,与罂粟、葡萄和芦笋等双子叶植物PMM的亲缘关系较远。BsPMM和BsGMP基因在不同品种、组织和生育期均有表达,且二者在假鳞茎中表达量显着高于其他组织(P<0.05),区别在于桂及1号在生长旺期的表达量最高,而桂及2号在苗期的表达量最高。桂及1号和桂及2号假鳞茎中甘露糖含量和多糖含量均随生育期推移呈逐渐升高的变化趋势。【结论】BsPMM和BsGMP基因表达具有时空、组织和品种特异性,可能是调控多糖合成代谢途径中的关键基因,参与白及甘露糖和多糖的合成。(本文来源于《南方农业学报》期刊2019年09期）
克隆特性论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
肉桂醇脱氢酶(CAD)是木质素生物合成的关键酶之一,为探讨肉桂醇脱氢酶基因在香椿抵抗非生物胁迫方面发挥的作用,本研究从香椿转录组数据中筛选并克隆得到1个CAD基因,其开放阅读框为1 068 bp,共编码355个氨基酸,结构域分析发现香椿CAD蛋白含有1个NADP(H)辅酶结构域,2个Zn结合位点,系统进化树分析表明香椿CAD与柑橘CAD1亲缘关系最近,将其命名为Ts CAD1。实时荧光定量PCR结果显示,Ts CAD1在香椿幼苗根中的表达量显着高于茎与叶中的表达量;38℃高温胁迫24 h期间,Ts CAD1在香椿叶片中的表达量呈现先降低后显着上升的趋势;4℃低温胁迫24 h期间,Ts CAD1的表达呈现先上升后下降的趋势;200 g/L PEG6000干旱胁迫24 h期间,Ts CAD1的表达趋势为先下降后上升又下降,但其表达水平均低于对照;200 mmol/L Na Cl盐胁迫处理24 h期间,Ts CAD1的表达表现为先下降后上升,其表达水平均低于对照。根据以上结果推测香椿Ts CAD1基因可能在香椿的非生物胁迫防御机制方面发挥功能,该试验结果为通过分子生物技术改良香椿的栽培抗性提供了理论参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆特性论文参考文献
[1].孙婷婷,刘增才,王世新,王旭彤,邹莉.桑黄HMGS基因克隆、分子特性及差异表达分析[J].中草药.2019
[2].隋娟娟,邓红祥,杨京霞,孙晶晶,屈长青.香椿TsCAD1基因的克隆与非生物胁迫下的表达特性[J].基因组学与应用生物学.2019
[3].吴忠香,张雪梅,徐婧雯,宋杰,李慧.抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定[J].中国生物制品学杂志.2019
[4].梁金金,何超,刘少楠,谢文,张友军.烟粉虱MED隐种抑制蛋白基因Btarrestin的克隆及特性分析[J].昆虫学报.2019
[5].李玲,谭瑶,周晓榕,庞保平.沙葱萤叶甲气味结合蛋白GdauOBP20的基因克隆、原核表达及其结合特性[J].中国农业科学.2019
[6].万雪丽,冯依,刘庆华,王奎玲.香石竹DcHsfA4基因克隆及表达特性分析[J].农业生物技术学报.2019
[7].张婷,杨永恒,孙玉明,侯孟兰,李丕睿.甜菊耐寒相关基因SrDREB1As的克隆与转录因子特性分析[J].中国糖料.2019
[8].刘益,刘巧林,陈开健,乔庆,谭素梅.草鱼(Ctenopharyngodonidella)组织蛋白酶L基因克隆及表达特性分析[J].湖南师范大学自然科学学报.2019
[9].姜瑶瑶,李静,蔡年俊,陈剑平,张恒木.一个植物原纤维蛋白基因的克隆及其表达特性分析[J].浙江农业学报.2019
[10].许娟,石云平,苏祖祥,林茜,李小泉.白及PMM基因cDNA序列克隆及甘露糖合成相关基因的表达特性分析[J].南方农业学报.2019
论文知识图
