牙表皮来源的Wnt配体对牙齿分化的影响

论文摘要

不同的Wnt配体在牙齿发育过程中的上皮以及间充质具有不同的时空表达,然而,这些差异表达的Wnt配体在牙齿发育中的作用在之前的研究中并不明确。Wntless（Wls）功能的缺失会导致Wnt配体无法运输到细胞外,因而Wls的条件性敲除小鼠近年来已经成为研究Wnt配体功能的重要工具。在牙齿发育过程中,Shh特异性的在牙源性上皮特异性表达,为了研究在牙齿上皮特异性表达的Wnt配体的功能,在本研究中,我们使用Shh-Cre来敲除牙齿上皮表达的Wls来进行研究。我们发现,使用Shh-Cre对Wls进行条件性敲除WlsShh-Cre会导致牙齿分化缺陷,具体表现在成釉细胞和成牙本质细胞的极性缺失,并缺乏分化标志物（Dspp,Osterxi,Decorin,Colla1）的表达,同时伴随着牙本质含量的显著降低。我们进一步使用Wnt信号通路的报告基因小鼠BAT-GAL小鼠来研究Wls敲除对经典Wnt信号通路的影响,发现在E16.5 WlsShh-Cre小鼠牙齿中,Wnt信号通路活性在第二釉结明显下调,此外Wnt信号通路的靶基因Lef1,Axin2和Dkk1的表达显著下调。以上结果就提示,WlsShh-Cre突变牙齿中的经典的wnt信号通路活性下调。此外,我们发现Shh信号通路分子Shh,Ptc 和Gli1在E16.5的牙齿中的表达也显著下调。我们还发现,在E16.5天,Wls突变牙齿的上皮和间充质中细胞增殖发生异常;然而细胞凋亡并没有受到影响。通过染色质免疫沉淀实验我们发现成牙本质细胞分化的关键标志物Decorin和Colla1在牙齿发育过程中是Wnt信号通路的靶基因,它们在WlsShh-Cre牙齿中下调。此外,体外组织培养实验也发现,经使用LiCl诱导Wnt信号通路活性可以导致Decorin和Colla1的表达在Wls突变牙齿中显著增加。综上所述,我们的研究结果表明,牙表皮来源的Wnt配体对牙齿分化有重要的调控作用。

论文目录

致谢

摘要

Abstract

1 引言

1.1 牙齿的发育和分化过程

1.2 Wnt信号通路的功能

1.2.1 Wnt信号通路

1.2.2 Wntless的功能研究及对牙齿发育的影响

1.3 Hedgehog信号通路及对牙齿发育的影响

2 实验内容与设计

2.1 研究目的与意义

2.2 研究内容

2.3 研究路线

2.3.1 小鼠交配路线

2.3.2 实验技术路线

3 实验材料与方法

3.1 实验动物饲养与鉴定

3.1.1 实验小鼠

3.1.2 实验小鼠基因型的鉴定

3.2 实验材料的处理

3.2.1 石蜡样品的处理

3.2.2 冰冻样品的处理

3.2.3 RNA样品的处理

3.2.4 组织总RNA的提取和cDNA的制备

3.2.5 制备原位杂交探针

3.3 实验方法

3.3.1 荧光定量PCR

3.3.2 苏木精伊红染色（HE染色）

3.3.3 原位杂交

3.3.4 BRDU检测细胞增殖

3.3.5 TUNEL检测细胞凋亡

3.3.6 染色质免疫共沉淀（CHIP）

3.3.7 X-gal染色方法

3.3.8 体外器官培养

3.3.9 Masson三色染色

4 实验结果

4.1 Shh-Cre敲除Wls造成牙齿发育不全

4.2 Shh-Cre条件性敲除Wls牙齿中细胞分化标记基因的检测

Shh-Cre牙齿中信号通路的变化'> 4.3 Wls^Shh-Cre牙齿中信号通路的变化

Shh-Cre牙齿中细胞的凋亡与增殖情况'> 4.4 Wls^Shh-Cre牙齿中细胞的凋亡与增殖情况

Shh-Cre牙齿中影响胚胎成牙本质细胞分化的因素'> 4.5 Wls^Shh-Cre牙齿中影响胚胎成牙本质细胞分化的因素

5 总结与讨论

5.1 总结

5.2 讨论

参考文献

作者简历

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 熊亚楠

导师: 张遵义,朱晓静

关键词: 牙齿发育,信号通路,牙本质细胞

来源: 杭州师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 杭州师范大学

分类号: Q95-33

总页数: 48

文件大小: 2851K

下载量: 15

牙表皮来源的Wnt配体对牙齿分化的影响

论文摘要

论文目录

文章来源

相关论文文献

猜你喜欢