OsCPK12基因功能研究和互作蛋白筛选

OsCPK12基因功能研究和互作蛋白筛选

论文摘要

通过反向遗传学研究方法,构建OsCPK12基因敲除和超表达突变体,用150 mmol/L的NaCl进行盐胁迫处理,结果显示:超表达株系无论株高、根长还是叶片状态都优于野生型,而基因敲除突变体相比于野生型株高明显矮化,根的发育形态差,叶片枯黄,证实OsCPK12对水稻耐盐有正调控作用。用real-time PCR对突变体株系的根、叶鞘、叶片多个部位的激素信号转导路径基因的表达量进行分析,结果显示:超表达株系的多个激素受体编码基因和下游调控基因表达量显著上调,说明OsCPK12参与激素的信号转导并影响水稻抗逆反应。为进一步研究OsCPK12的基因功能,通过在水稻原生质体中表达融合蛋白进行OsCPK12的亚细胞定位,确定OsCPK12定位于质膜。用酵母双杂交的方法在水稻中花11膜蛋白文库中筛选到2个水通道蛋白OsPIP1-1和OsPIP2-7,且酵母点对点验证为阳性,推测OsCPK12可能通过与OsPIP1-1和OsPIP2-7互作,调控水分子进出细胞,提高了水稻的耐盐性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 OsCPK12基因敲除载体的构建
  •   1.3 OsCPK12超表达载体的构建
  •   1.4 农杆菌侵染法转化水稻
  •   1.5 转化植株分子检测
  •     1)转基因植株阳性检测。
  •     2)植株基因组编辑检测。
  •     3)超表达植株的拷贝数检测(Southern blot法)。
  •   1.6 OsCPK12突变体盐胁迫处理
  •   1.7 激素信号路径基因表达量分析
  •   1.8 OsCPK12的亚细胞定位
  •   1.9 OsCPK12互作蛋白筛选
  • 2 结果与分析
  •   2.1 OsCPK12突变体构建和检测
  •   2.2 OsCPK12提高水稻耐盐性
  •   2.3 OsCPK12的亚细胞定位
  •   2.4 OsCPK12参与多个激素信号通路
  •   2.5 OsCPK12互作蛋白筛选
  •   2.6 候选互作蛋白的验证
  • 3 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 周非凡,刘瑜,常鑫磊,林拥军

    关键词: 信号转导,水稻,基因敲除,盐胁迫,酵母双杂交

    来源: 华中农业大学学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,农作物

    单位: 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室/国家植物基因研究中心

    基金: 国家自然科学基金项目(31571753)

    分类号: S511;Q943.2

    DOI: 10.13300/j.cnki.hnlkxb.2019.06.007

    页码: 48-55

    总页数: 8

    文件大小: 1564K

    下载量: 279

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