导读:本文包含了随机文库论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:文库,抗原,铜绿,突变,基因组,乳液,元件。
随机文库论文文献综述
郭佳,蒋韵,滕飞,尹衍新,于丽华[1]（2019）在《间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体重链CDR3随机突变哺乳动物细胞表面展示文库的构建》一文中研究指出目的采用哺乳动物细胞表面展示技术构建间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体3E1D7的重链补体决定区3(CDR3)随机突变抗体库。方法用定向进化的方法在嵌合抗体3E1D7重链CDR3内部造成基因随机突变,将其通过双酶切克隆到哺乳动物细胞展示载体pSZI-CD中构建随机突变抗体库。抗体库基因转染CHO细胞,流式细胞术检测抗体基因是否在细胞表面表达。结果 3E1D7重链CDR3随机突变抗体库构建成功,库容量达到5.52×10~6。随机挑选20个阳性克隆进行测序鉴定, 20个克隆均在不同位置发生碱基突变且没有重复突变,编码20种不同的氨基酸序列,抗体库具有较好的多样性和随机性。流式细胞术分析抗体基因库上膜情况,均检测到全长抗体在CHO细胞表面的表达。结论通过哺乳动物细胞表面展示技术,成功构建了库容量达到5.52×10~6的c-Met嵌合抗体重链CDR3随机突变抗体库。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2019年06期）
许婉婷[2]（2019）在《铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究》一文中研究指出目的旨在克服现有抗原筛选方法的不足,构建我国铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)临床分离株XN-1的全基因组文库,从中筛选PA疫苗的候选抗原,为防控PA感染打下基础。方法1.全基因组文库的构建:提取PA XN-1全基因组DNA,内切酶Sau3A I酶切DNA,内切酶BamH I酶切的载体pMal-c5x。通过连接酶将其与随机基因组片段连接,构建随机重组子质粒。转化随机重组子至大肠杆菌感受态细胞X-Blue中。挑选出随机重组子克隆,通过PCR反应和酶切鉴定等方法,对随机重组子进行初步鉴定,评价插入基因组片段的特点。IPTG诱导溶菌酶上清液的阳性重组子的MBP融合蛋白表达,SDS-PAGE检测其表达情况,从而构建PA XN-1全基因组文库。2.PA候选抗原的筛选及保护效果评价:为了进一步从随机重组子文库中筛选到PA疫苗候选抗原,本研究制备了抗MBP多克隆抗体,将其包被于ELISA板上,以捕获随机重组子表达的MBP融合蛋白。以PA感染患者恢复期血清作为一抗,检测随机重组子携带的未知抗原的反应性。测定强反应性抗原的编码序列,通过BLAST序列比对,获得强反应性抗原的基因信息。通过基因工程手段在大肠杆菌中制备候选抗原免疫Balb/c小鼠。ELISA方法检测抗原特异性IgG抗体效价。气管插管攻毒致死剂量PA XN-1,并统计小鼠生存率。综合评价候选抗原的免疫反应性、免疫原性和免疫保护效果,筛选出新的铜绿假单胞菌疫苗候选抗原。结果1.提取PA XN-1的全基因组,经过Sau3A I酶切处理后,DNA条带弥散分布在100-1000bp之间。这些基因组片段与pMal-c5x载体连接,获得随机重组子克隆若干。随机挑选3个重组子克隆,酶切鉴定发现其中2个有基因组片段的插入;PCR方法检测插入片段大小,发现其插入片段位于100-1000bp之间,具有良好的随机性;IPTG诱导随机重组子表达,SDS-PAGE检测重组子蛋白表达情况,发现随机挑选的6个重组子中,有4个成功表达出MBP融合蛋白。这些结果表明,构建PA全基因组文库成功,可用于下一步强反应性抗原的筛选。2.通过13轮试验,筛选获得随机重组子2392个,得到反应性重组子115个,其中,有13个强反应性抗原(相对于PcrV反应强度大于10%的抗原)。这13个抗原分别为:PpiA、PtsP、OprP、CAZ10_34235、HmuU_2、PcaK、CarAd、RecG、YjiR_5、LigD、KinB、RtcA、PscF。3.通过MBP亲和层析法,成功制备了这13个带有MBP标签的强反应性抗原。动物实验发现以上13个抗原免疫,可分别诱导小鼠产生抗原特异性IgG抗体,其效价与MBP诱导的抗体效价有显着统计学差异(P<0.05)。同时,动物攻毒保护实验发现,候选抗原保护率最高的前五名抗原分别是:PscF、LigD、RecG、OprP和PtsP。其中,抗原PscF的保护率最高达95%,抗原LigD和RecG的保护率达80%,抗原OprP和PtsP的保护率达65%。以上结果提示,抗原PscF的免疫保护效果最优。结论本研究成功建立了我国铜绿假单胞菌临床菌株XN-1的全基因组文库,并从中筛选到13个强反应性抗原。进一步通过动物实验证实,强反应性抗原PscF在小鼠上具有良好的免疫原性,且攻毒保护率为95%,提示其是良好的PA候选抗原。这些结果为下一步成功研制PA新型疫苗提供了新的实验依据,对PA感染的防控具有积极的意义。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
许婉婷,顾江,万闯,程新,杨峰[3]（2018）在《铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究》一文中研究指出目的构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)XN-1的全基因组文库,筛选铜绿假单胞菌新的疫苗候选抗原。方法提取我国分离的临床PA XN-1菌株全基因组,Sau3AⅠ酶切成随机片段后经连接至Bam HⅠ酶切后的pMal-c5x载体,转化至X-blue获得随机重组子。随机重组子经IPTG诱导后使用溶菌酶裂解,收集含有融合的麦芽糖结合蛋白(MBP)的随机重组子的裂解上清,制成含有PA全基因组的蛋白随机文库。通过ELISA方法分别检测单个随机文库蛋白的免疫反应性。将经典的PA强反应抗原PcrV做为参照,分别计算单个随机抗原的相对反应强度并进行比较。提取反应较强的重组子的质粒,测定DNA序列后进行翻译和比对,得到整个强反应性抗原的氨基酸信息。结果成功构建PA XN-1的全基因组文库,筛选到强反应性抗原13个,其中4个抗原的反应强度超过PcrV,分别为Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase D、Phosphoenolpyruvate-protein phosphotransferase(PtsP)、Phosphate-starvation-inducible E和Very short patch repair endonuclease。结论基于高效表达系统的PA全基因组文库构建成功,可用于PA及其它病原的疫苗候选抗原的筛选研究。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2018年12期）
陈姣[4]（2018）在《利用纳米抗体CDR3随机突变文库研究抗体结构和功能》一文中研究指出单克隆抗体是治疗性蛋白质中数目最大且发展最快的一组。目前已经有70种抗体药物获得临床用药的批准,2017年抗体药物的市场规模突破了千亿美元。到目前为止,不完全统计结果显示有500种治疗性抗体及其衍生物正在临床试验中,主要集中在癌症治疗和自身免疫性疾病。抗体药物的问世为人类攻克一些重大疾病带来了希望,随着应用的深入,大分子的单克隆抗体由于其自身结构方面的问题,一定程度上限制了它们的应用。这个问题大大激发科学家对抗体改造的热情,尤其是抗体小型化的改造。NBL42为本研究组前期发现的一个仅具有CDR3和两侧框架区的纳米抗体。该抗体对溶菌酶具有较高的特异结合活性和显着的酶抑制活性。分析其序列,发现其CDR3长度为17个氨基酸,框架区的一些氨基酸残基与已知的骆驼源的VHH抗体存在差别。因此,设想将纳米抗体NBL42作为模型,用于抗体结构与功能间联系的研究。本研究的目的主要有两方面:首先,利用NBL42-ΔCDR3随机突变文库分析纳米抗体CDR3区氨基酸的分布情况;其次,采用定点突变和移植的方法验证NBL42框架区能否作为突变文库的通用骨架或者CDR移植的框架;为设计文库和抗体的小型化改造提供借鉴,对今后新型抗体的设计提供一定的实验基础。第一部分利用NBL42-ΔCDR3随机突变文库分析纳米抗体CDR3区氨基酸的分布首先采用重迭PCR技术保留NBL42纳米抗体的框架区(FR3-FR4),对其CDR3区的17个氨基酸按照NNY的突变法则进行随机突变。通过基因合成方法获得NBL42-ΔCDR3随机突变DNA片段。构建NBL42-ΔCDR3随机突变文库,库容为4.8×10~7。随后对突变文库采用两种抗原(溶菌酶和CD47重组蛋白)进行多轮筛选。筛选完成之后,采用多克隆Phage ELISA验证文库的富集良好;分别从筛选的最后两轮中随机挑选100个单克隆进行可溶性表达,最终获得3株抗溶菌酶的纳米抗体。将抗体序列亚克隆至表达载体pET22b(+)上,诱导表达纯化获得抗体蛋白,间接ELISA结果显示3株纳米抗体的亲和力较低。为进一步了解纳米抗体CDR3区氨基酸分布情况,我们对未免疫骆驼VHH的1209159条高通量测序的数据进行分析。CDR3区的长度范围为6-33个氨基酸,分别将不同长度的序列进行频数统计,同时统计每一个位点上氨基酸的种类和频数,计算相应的实际频率,再将实际频率与理论频率进行卡方分析,发现CDR3区中的一些位点具有保守性,这些位点多存在于CDR3区的两端,105和106位上多为丙氨酸、107位的氨基酸多为甘氨酸、天冬氨酸、赖氨酸;108位的氨基酸多为精氨酸、脯氨酸、丙氨酸;115和117位上的酪氨酸。对比NBL42-ΔCDR3随机突变文库的CDR3序列,发现突变文库在以上位点的氨基酸分布与天然文库相比具有较大差异,表明突变文库具有功能性的VHH多样性较低。第二部分采用移植和定点突变的方法分析NBL42的框架区首先将从免疫文库中筛选出来的纳米抗体NBL42的FR3和FR4区作为受体,将结合PD1的纳米抗体VHH H5的CDR3区作为供体,合成NBL42-H5 CDR3重组纳米抗体DNA片段,并连接到pET22b表达载体上,进行表达纯化,获得重组纳米抗体;ELISA方法检测其与PD1的结合特性。结果显示:NBL42-H5CDR3成功构建到pET22b(+),成功表达了NBL42-H5 CDR3重组纳米抗体。ELISA结果表明,移植后的抗体NBL42-H5 CDR3具备了VHH H5部分抗原结合活性。同样的方法选择一个短肽CERX(特异性结合SIRPα的多肽),将它的12氨基酸移植进入NBL42的框架中,组成重组肽抗体,并将目的基因构建于pET22b(+)表达载体上。ELISA结果表明,移植后的抗体NBL42-CERX仍然具有很强的抗原结合活性。我们采用定点突变的方法将NBL42纳米抗体第88位的氨基酸突变,基因由南京金斯瑞生物科技公司合成,将目的片段连接到pET22b(+)表达载体上,进行表达纯化,获得纳米抗体NBL42-C88Y。通过ELISA验证该纳米抗体与溶菌酶的结合活性,结果表明,纳米抗体NBL42-C88Y与溶菌酶的结合活性,结果表明,与NBL42相比,C88Y突变的纳米抗体与溶菌酶的结合能力显着降低。(本文来源于《新疆大学》期刊2018-05-20）
郭倩,朱宁,卜萌萌,郭思超,闫雪静[5]（2017）在《基于微小RNA架构的新型随机短发夹RNA文库构建》一文中研究指出目的构建高效发夹状随机短发夹RNA(shRNA)文库。方法构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效率。在由CMV启动的EGFP下游连接shRNA的表达载体基础上,构建EGFP下游连接基于微小RNA(miRNA)架构的shRNA表达载体,转染细胞后收取RNA,用实时定量荧光PCR法检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效果。基于EGFP下游连接基于miRNA架构的shRNA表达载体实时定量荧光PCR的检测结果,构建基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结果由polⅡ启动子(CMV)驱动发夹状shRNA转录时,shRNA要位于一个大的转录本之后才能被有效转录。基于miRNA架构环境可提高shRNA的干扰效率。构建了一个容量为1.8×10~7的基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结论构建了一个大容量的新型随机shRNA文库。(本文来源于《中国医学科学院学报》期刊2017年04期）
温国霞[6]（2017）在《构建随机突变文库筛选敏感生物元件实现TNT的检测》一文中研究指出合成生物学是21世纪新出现的一门交叉学科,它将工程化的思想运用到系统生物学研究中,为解决人类在医疗、环境及能源等方面面临的难题提供了新技术、新思路。目前基于合成生物学技术构建的生物传感器在环境污染物检测领域表现出了良好的发展势头。有特定感应功能的生物识别元件和可将信号进行放大输出的报告元件构成了生物传感器的核心。其中的生物识别元件通过感应并结合被测物质后,引发自身的生物学反应,进而导致下游报告元件的信号表达,信号强度代表生物元件对靶标化合物的感应强度。目前报告元件的研究相对成熟,而感应环境中靶物质的生物识别元件还有待大量挖掘、鉴定和优化,它是生物传感器选择性测定的基础。2,4,6-叁硝基甲苯(TNT)是一种带苯环的有机化合物,因其良好的爆炸性能,常被用来制造地雷以及各种炸药。地雷的广泛使用以及TNT的长效性,导致战争遗留下来的地雷每年都在造成上百人的伤亡,严重威胁着人们的生命安全。同时泄露在环境中的TNT还是一种重要的环境污染物,不仅可以大面积地污染土壤和水域,产生极难清理和净化的"粉红水",而且TNT及其降解物还可以进入食物链,对生态环境和人类健康都造成了极大威胁,因此,研发高效、准确的检测TNT的工具,对战后雷场清除以及环境治理都有重要意义。目前的检测方法大都需要昂贵的仪器以及专业的操作流程,在实际应用中会受到很大的限制。由于生物传感器具有成本低、敏感度高、易携带及易操作等优点,因此可作为传统方法的辅助手段,用于TNT的检测。本文在合成生物学思想的指导下,大量挖掘、鉴定感应TNT的生物元件,为生物传感器的构建提供元件储备。研究内容主要包括叁个方面:(1)构建严谨型的筛选平台根据差异荧光诱导技术的原理,进行生物元件的筛选,首先需要构建良好的筛选平台。pPROBE-TT是无启动子、带有绿色荧光蛋白(GFP)、进行高拷贝复制的载体,我们用大肠杆菌的低拷贝复制子pSC101 ori替换掉pPROBE-TT载体上的pBBR1 oriV的高拷贝复制子,构建低拷贝严谨型复制的筛选载体101-pPROBE。将用于指示TNT的生物元件插入GFP上游的多克隆(MCS)位点,GFP的荧光强度即可指征生物元件对TNT的感应强度。(2)构建随机启动子文库筛选DNA元件我们采用启动子非保守序列随机化的方法构建随机启动子文库,通过分析启动子的一致序列,保留-35区及-10区,其余部分进行完全随机合成,退火后连入构建好的严谨型低拷贝筛选载体101-pPROBE内。通过对文库进行筛选,获得了一个启动元件5M6A,其对TNT及其靶标化合物表现出了较高的感应强度、灵敏度及特异性。(3)构建Xy1R突变文库筛选蛋白元件恶臭假单胞mt-2菌株中的TOL质粒上携带的Xy1R-Pu是经典的甲苯代谢通路,在甲苯类化合物存在时,调控蛋白Xy1R可以特异性地激活Pu启动子,进而启动相应甲苯代谢通路的表达。本文基于合成生物学的思想,优化设计该通路并导入遗传背景清楚、操作简单的大肠杆菌中构建全细胞生物传感器,用于检测TNT。我们以pETDuet-1为载体骨架,构建了 Xy1R-Pu基因线路,并以GFP为报告分子,GFP的荧光值可以指征结合TNT后的Xy1R蛋白对Pu启动子的诱导强度,并在基因线路中加入四串联终止序列来降低背景值。最后对Xy1R蛋白的信号识别区进行连续易错PCR,构建随机突变文库。实验表明四串联终止序列可有效降低Xy1R-Pu通路的背景值,并从随机突变体文库中筛选出的蛋白元件eX0-4,对TNT表现出良好的感应强度、灵敏度以及特异性。综上所述,我们通过采用启动子非保守序列随机化和易错PCR的方法构建随机突变文库,获得了两个全新的对TNT及其衍生物有高感应强度、灵敏度及特异性的生物元件,而且其感应灵敏度均达到了国际上报道同类元件的领先水平。获得的元件为后期成型生物传感器的完整开发提供了良好的元件储备,我们构建的启动子文库也有望成为检测各类环境污染物的工具。(本文来源于《安徽大学》期刊2017-05-01）
周雪莹,曹铁生,刘向伟,韦梦影,杨国栋[7]（2017）在《用于筛选顺式反应元件的慢病毒启动子报告载体随机文库的构建》一文中研究指出目的建立含有随机序列与miniCMV融合的启动子,驱动抗生素耐药基因的表达;用于筛选和寻找不同处理条件下的反应性元件。方法设计针对Puromycin抗性基因,即嘌呤霉素N-乙酰转移酶基因(puromycin N-acetyltransferase gene,PAC)的引物,扩增目的条带并通过PacI+Pme1限制性内切酶克隆至目的载体pWPI;然后,设计并合成接头序列+20N随机序列+miniCMV的融合片段,通过PCR的方法得到双链序列,并进行酶切,通过Cla1+PacI克隆入前述pWPI-PAC载体。克隆得到的载体组合即为慢病毒反应元件筛选报告载体文库。在此基础上,我们将报告载体文库转染细胞,并进行超声照射。超声照射剂量为10min,100mW/cm2。每天一次,一共照射3天。每次超声照射后,对细胞进行puromycin处理。4天后,收集超声照射存活细胞,提取DNA,PCR扩增含有20N的序列并进行测序鉴定。结果我们成功设计了一套文库构建方案,初步构建了20N随机序列+miniCMV+Puromycin抗性基因的文库。将该文库转染细胞,超声照射后可以增加转染有对超声反应克隆细胞中抗性基因表达;我们通过获取Puromycin处理后的存活细胞,发现了潜在的对超声反应的调控元件。结论我们构建的20N随机序列+miniCMV+Puromycin抗性基因文库,可以用于筛选对超声等特定条件有表达调控反应的顺式反应元件;进而为该元件控制基因表达提供依据。(本文来源于《西部医学》期刊2017年04期）
邓楠,梁振,边阳阳,张明建,张柯[8]（2017）在《应用随机寡核苷酸文库修饰磁性颗粒提高血浆蛋白质的鉴定覆盖度》一文中研究指出基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法。采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒(MNP@ssDNA)材料,在生理缓冲体系条件下捕获血浆样品中的蛋白质。比较了两种洗脱体系的洗脱效果,并利用nano-RPLC-ESIMS/MS对获得的蛋白质酶解液组分进行分析。结果表明,MNP@ssDNA材料处理后的血浆蛋白质鉴定数量提升了约29.5%,两种洗脱体系呈现良好的互补性(26.7%)。血浆中前10种高丰度蛋白质的谱图占有率从处理前的31.82%降低到21.31%(洗脱体系1)和26.20%(洗脱体系2)。在鉴定到的蛋白质中,丰度最低的蛋白质在血浆中的质量浓度约为0.29 ng/mL,该蛋白质仅在MNP@ssDNA材料处理后被鉴定到。结果证明MNP@ssDNA策略不仅能有效降低血浆中高丰度蛋白质的丰度,也为低丰度蛋白质的深度挖掘提供了新的思路。(本文来源于《色谱》期刊2017年03期）
邵可可,史新惠,崔蕾蕾,马达,邵启祥[9]（2016）在《乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化》一文中研究指出目的建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ss DNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率。方法构建长90 bp(含52 bp随机序列)寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成ds DNA文库,再以ds DNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ss DNA文库,并对二者进行比较。通过改变模板、聚合酶、d NTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件。结果乳液PCR能高效扩增出ds DNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ss DNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15~35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR。在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响最大,引物浓度对副产物的量影响最大。结论乳液单引物PCR能显着提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化(SELEX)技术筛选效率。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2016年11期）
高川,董华,童朝阳,穆晞惠,张金平[10]（2016）在《相思子毒素(Abrin)亲和体定点随机突变噬菌体展示文库的构建》一文中研究指出目的构建相思子毒素亲和体定点随机突变噬菌体展示文库,并筛选出高亲和力的毒素特异识别亲和体。方法通过定点随机突变获得亲和体基因组合,克隆于噬菌体展示载体,构建噬菌体展示随机组合亲和体文库。以相思子毒素为靶分子对该文库进行3轮亲和筛选,用ELISA鉴定毒素结合活性。结果成功构建噬菌体展示亲和体随机组合文库,库容量为3.4×10~7,滴度为4×10~(14)pfu/mL;获得9株高活性亲和体噬菌体抗体,测序结果表明13个位点均发生了突变,突变率100%。结论通过亲和体噬菌体展示随机组合文库筛选获得了毒素新型抗体——亲和体,获得9种新型亲和体抗体。(本文来源于《2016中国环境科学学会学术年会论文集（第四卷）》期刊2016-10-14）
随机文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的旨在克服现有抗原筛选方法的不足,构建我国铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)临床分离株XN-1的全基因组文库,从中筛选PA疫苗的候选抗原,为防控PA感染打下基础。方法1.全基因组文库的构建:提取PA XN-1全基因组DNA,内切酶Sau3A I酶切DNA,内切酶BamH I酶切的载体pMal-c5x。通过连接酶将其与随机基因组片段连接,构建随机重组子质粒。转化随机重组子至大肠杆菌感受态细胞X-Blue中。挑选出随机重组子克隆,通过PCR反应和酶切鉴定等方法,对随机重组子进行初步鉴定,评价插入基因组片段的特点。IPTG诱导溶菌酶上清液的阳性重组子的MBP融合蛋白表达,SDS-PAGE检测其表达情况,从而构建PA XN-1全基因组文库。2.PA候选抗原的筛选及保护效果评价:为了进一步从随机重组子文库中筛选到PA疫苗候选抗原,本研究制备了抗MBP多克隆抗体,将其包被于ELISA板上,以捕获随机重组子表达的MBP融合蛋白。以PA感染患者恢复期血清作为一抗,检测随机重组子携带的未知抗原的反应性。测定强反应性抗原的编码序列,通过BLAST序列比对,获得强反应性抗原的基因信息。通过基因工程手段在大肠杆菌中制备候选抗原免疫Balb/c小鼠。ELISA方法检测抗原特异性IgG抗体效价。气管插管攻毒致死剂量PA XN-1,并统计小鼠生存率。综合评价候选抗原的免疫反应性、免疫原性和免疫保护效果,筛选出新的铜绿假单胞菌疫苗候选抗原。结果1.提取PA XN-1的全基因组,经过Sau3A I酶切处理后,DNA条带弥散分布在100-1000bp之间。这些基因组片段与pMal-c5x载体连接,获得随机重组子克隆若干。随机挑选3个重组子克隆,酶切鉴定发现其中2个有基因组片段的插入;PCR方法检测插入片段大小,发现其插入片段位于100-1000bp之间,具有良好的随机性;IPTG诱导随机重组子表达,SDS-PAGE检测重组子蛋白表达情况,发现随机挑选的6个重组子中,有4个成功表达出MBP融合蛋白。这些结果表明,构建PA全基因组文库成功,可用于下一步强反应性抗原的筛选。2.通过13轮试验,筛选获得随机重组子2392个,得到反应性重组子115个,其中,有13个强反应性抗原(相对于PcrV反应强度大于10%的抗原)。这13个抗原分别为:PpiA、PtsP、OprP、CAZ10_34235、HmuU_2、PcaK、CarAd、RecG、YjiR_5、LigD、KinB、RtcA、PscF。3.通过MBP亲和层析法,成功制备了这13个带有MBP标签的强反应性抗原。动物实验发现以上13个抗原免疫,可分别诱导小鼠产生抗原特异性IgG抗体,其效价与MBP诱导的抗体效价有显着统计学差异(P<0.05)。同时,动物攻毒保护实验发现,候选抗原保护率最高的前五名抗原分别是:PscF、LigD、RecG、OprP和PtsP。其中,抗原PscF的保护率最高达95%,抗原LigD和RecG的保护率达80%,抗原OprP和PtsP的保护率达65%。以上结果提示,抗原PscF的免疫保护效果最优。结论本研究成功建立了我国铜绿假单胞菌临床菌株XN-1的全基因组文库,并从中筛选到13个强反应性抗原。进一步通过动物实验证实,强反应性抗原PscF在小鼠上具有良好的免疫原性,且攻毒保护率为95%,提示其是良好的PA候选抗原。这些结果为下一步成功研制PA新型疫苗提供了新的实验依据,对PA感染的防控具有积极的意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
随机文库论文参考文献
[1].郭佳,蒋韵,滕飞,尹衍新,于丽华.间质上皮转化因子(c-Met)嵌合抗体重链CDR3随机突变哺乳动物细胞表面展示文库的构建[J].细胞与分子免疫学杂志.2019
[2].许婉婷.铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究[D].重庆医科大学.2019
[3].许婉婷,顾江,万闯,程新,杨峰.铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究[J].免疫学杂志.2018
[4].陈姣.利用纳米抗体CDR3随机突变文库研究抗体结构和功能[D].新疆大学.2018
[5].郭倩,朱宁,卜萌萌,郭思超,闫雪静.基于微小RNA架构的新型随机短发夹RNA文库构建[J].中国医学科学院学报.2017
[6].温国霞.构建随机突变文库筛选敏感生物元件实现TNT的检测[D].安徽大学.2017
[7].周雪莹,曹铁生,刘向伟,韦梦影,杨国栋.用于筛选顺式反应元件的慢病毒启动子报告载体随机文库的构建[J].西部医学.2017
[8].邓楠,梁振,边阳阳,张明建,张柯.应用随机寡核苷酸文库修饰磁性颗粒提高血浆蛋白质的鉴定覆盖度[J].色谱.2017
[9].邵可可,史新惠,崔蕾蕾,马达,邵启祥.乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化[J].临床检验杂志.2016
[10].高川,董华,童朝阳,穆晞惠,张金平.相思子毒素(Abrin)亲和体定点随机突变噬菌体展示文库的构建[C].2016中国环境科学学会学术年会论文集（第四卷）.2016
论文知识图
