利用旁侧引物提高重叠延伸PCR定点突变效率

论文摘要

平行模板法简化重叠延伸PCR定点突变流程的思路不能成立,靠近DNA末端的低效限制性酶切才是制约其突变效率的核心原因。故以旁侧引物法提高DNA产物的酶切效率,增加定点突变的成功率。将上、下游引物匹配位点由两侧酶切位点外延50-100 bp,使目标基因两端的酶切位点处于第二轮PCR产物的两端近侧,而非末端。由此提高随后的酶切效率,节省反应时间。由于此时酶切会明显缩短DNA长度,凝胶电泳结果显示仅1 h就完成了对PCR产物的充分酶切。连接产物转化感受态大肠杆菌后形成的克隆数也明显增加,且阳性率由33%-70%提高至100%。经对比检测,旁侧引物法既节省了工作时间,也极大地提高了重叠延伸PCR定点突变过程中的菌落形成数与突变成功率。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王柳月,李慧美,马梦琪,梁明星,贺如阳,陈华波

关键词: 重叠延伸,定点突变,旁侧引物

来源: 生物技术通报 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技,医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 湖北文理学院医学院

基金: 湖北省自然科学基金项目(2016CFB318)

分类号: R346

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0358

页码: 196-202

总页数: 7

文件大小: 3049K

下载量: 198

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标签：重叠延伸论文;  定点突变论文;  旁侧引物论文;