导读:本文包含了成熟朊蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:牛海绵样脑病,成熟朊蛋白,单克隆抗体,间接ELISA
成熟朊蛋白论文文献综述
朱小玲,刘永生,张杰,吴润,陈豪泰[1]（2006）在《秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定》一文中研究指出目的制备及鉴定抗秦川黄牛成熟朊蛋白的单抗。方法用重组成熟朊蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,以间接ELISA方法筛选能够稳定分泌抗成熟朊蛋白的单抗的杂交瘤细胞株。以亲和层析法纯化腹水抗体,检测其Ig类和亚类、效价、相对亲和力以及特异性,并用基因片段表达作图法初步分析抗原表位。结果获得了能够稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×105,相对亲和力为0.15μg/ml,Western blot表明该单抗具有较强的特异性。表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应。结论抗牛成熟朊蛋白的腹水单抗N64效价高、亲和力和特异性强,可以作为疯牛病免疫诊断的核心试剂。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2006年09期）
朱小玲[2]（2006）在《抗秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定》一文中研究指出【目的】本研究拟采用秦川黄牛重组成熟朊蛋白(PrP)的纯化复性产物作为免疫原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备出抗牛成熟朊蛋白的单抗(mAb),为研制疯牛病免疫诊断试剂盒奠定基础。【方法】将本实验室保存的含有秦川黄牛成熟PrP基因的重组质粒pET30a-PrP (25~242aa)转入大肠杆菌E.coli JM109(DE3)中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析鉴定表达产物。采用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,透析法复性纯化的重组表达产物,考马斯亮蓝染色法测定蛋白浓度。以SAF70进口单抗为检测抗体,Western blot分析融合蛋白的免疫反应性和对蛋白酶K的敏感性。以纯化复性的牛成熟PrP融合蛋白作为免疫原,以含有pET30a(+)空载体的E.coli JM109(DE3)的菌体蛋白作为对照免疫原,分别与弗氏完全佐剂1:1混合乳化,按100μg/只剂量皮下3～4点注射8周龄清洁级BALB/c雌性小鼠,在第4周和第8周皮下注射同等剂量的以弗氏不完全佐剂乳化的免疫原,在第12周按150μg/只剂量直接腹腔注射PBS稀释的免疫原。3d后取PrP融合蛋白免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞在PEG1500作用下室温融合,HAT培养液选择培养,融合10～15d后取细胞上清液进行间接ELISA检测。纯化的牛成熟PrP融合蛋白和pET30a(+)空载体菌体蛋白分别按25μg/mL的工作浓度包被酶标板,融合蛋白免疫小鼠血清1:960和SAF70单抗1: 300作阳性对照,SP2/0细胞上清液1:1和对照免疫鼠血清1:960作阴性对照,加入辣根过氧化酶标记的山羊抗小鼠IgG,测定OD490nm吸收值。凡杂交瘤细胞液的OD490nm值大于阴性对照3倍以上者初步判定为阳性克隆。将阳性克隆N64杂交瘤作有限稀释,3次亚克隆后液氮冻存细胞并连续传代3个月检测杂交瘤分泌抗体的稳定性。将N64杂交瘤细胞按1×10~6腹腔注射经无菌液体石蜡预处理的BALB/c小鼠制备腹水单抗。以Protein A Agarose亲和层析法纯化腹水抗体,双抗体夹心法检测N64单抗的Ig类和亚类,间接ELISA法测定纯化的腹水抗体的效价和相对亲和力,Western blot分析N64单抗的特异性,采用基因片段表达作图法初步分析抗原表位。【结果】获得了能稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×10~5,相对亲和力为0.2μg/mL。Western blot表明N64单抗具有较强的特异性,表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2006-05-10）
成熟朊蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】本研究拟采用秦川黄牛重组成熟朊蛋白(PrP)的纯化复性产物作为免疫原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备出抗牛成熟朊蛋白的单抗(mAb),为研制疯牛病免疫诊断试剂盒奠定基础。【方法】将本实验室保存的含有秦川黄牛成熟PrP基因的重组质粒pET30a-PrP (25~242aa)转入大肠杆菌E.coli JM109(DE3)中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析鉴定表达产物。采用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,透析法复性纯化的重组表达产物,考马斯亮蓝染色法测定蛋白浓度。以SAF70进口单抗为检测抗体,Western blot分析融合蛋白的免疫反应性和对蛋白酶K的敏感性。以纯化复性的牛成熟PrP融合蛋白作为免疫原,以含有pET30a(+)空载体的E.coli JM109(DE3)的菌体蛋白作为对照免疫原,分别与弗氏完全佐剂1:1混合乳化,按100μg/只剂量皮下3～4点注射8周龄清洁级BALB/c雌性小鼠,在第4周和第8周皮下注射同等剂量的以弗氏不完全佐剂乳化的免疫原,在第12周按150μg/只剂量直接腹腔注射PBS稀释的免疫原。3d后取PrP融合蛋白免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞在PEG1500作用下室温融合,HAT培养液选择培养,融合10～15d后取细胞上清液进行间接ELISA检测。纯化的牛成熟PrP融合蛋白和pET30a(+)空载体菌体蛋白分别按25μg/mL的工作浓度包被酶标板,融合蛋白免疫小鼠血清1:960和SAF70单抗1: 300作阳性对照,SP2/0细胞上清液1:1和对照免疫鼠血清1:960作阴性对照,加入辣根过氧化酶标记的山羊抗小鼠IgG,测定OD490nm吸收值。凡杂交瘤细胞液的OD490nm值大于阴性对照3倍以上者初步判定为阳性克隆。将阳性克隆N64杂交瘤作有限稀释,3次亚克隆后液氮冻存细胞并连续传代3个月检测杂交瘤分泌抗体的稳定性。将N64杂交瘤细胞按1×10~6腹腔注射经无菌液体石蜡预处理的BALB/c小鼠制备腹水单抗。以Protein A Agarose亲和层析法纯化腹水抗体,双抗体夹心法检测N64单抗的Ig类和亚类,间接ELISA法测定纯化的腹水抗体的效价和相对亲和力,Western blot分析N64单抗的特异性,采用基因片段表达作图法初步分析抗原表位。【结果】获得了能稳定分泌抗牛成熟朊蛋白的杂交瘤细胞株N64,分泌的抗体属于IgG2a,腹水效价为1×10~5,相对亲和力为0.2μg/mL。Western blot表明N64单抗具有较强的特异性,表位分析显示N64单抗仅与羧基端重组朊蛋白反应。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
成熟朊蛋白论文参考文献
[1].朱小玲,刘永生,张杰,吴润,陈豪泰.秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J].中国人兽共患病学报.2006
[2].朱小玲.抗秦川黄牛成熟朊蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[D].甘肃农业大学.2006