微生物法生产甘油酸的发酵及提取工艺研究

微生物法生产甘油酸的发酵及提取工艺研究

论文摘要

甘油酸(2,3-二羟基丙酸,Glyceric acid,简称GA),是一种有机酸,广泛存在于自然界的各种植物中,其衍生物作为代谢产物存在于人体内,在化工、医药、食品等方面均有用途。本文研究了Gluconobacter japonicus HD1025转化甘油生产甘油酸的发酵及提取工艺。对摇瓶发酵条件进行优化,最适的培养条件为:培养温度31℃,摇床转速220 rpm,初始pH 6.0,装液量30 mL,接种量10%。进行了5 L发酵罐的放大实验,结果表明,发酵过程中使用NaOH控制pH值为5,溶解氧控制在10%的条件下发酵效果较好,在30 L发酵罐的验证试验中,底物浓度为150 g/L,pH为5,溶解氧10%,通气量0.8 vvm,转速300 rpm的条件下发酵90 h后,甘油酸产量为73.17 g/L。研究了静息细胞转化法生产甘油酸时转化条件对转化效率的影响,在单因素实验的基础上进行了响应面实验设计,结果表明,静息细胞转化甘油生产甘油酸的最佳条件为菌体浓度2.05%、底物甘油浓度143.24 g/L、培养温度30.4℃,在此条件下甘油酸产量达到64.27 g/L。对静息细胞的重复利用能力和转化稳定性进行了实验,结果表明,在连续转化的六个批次中,静息细胞在初始4个批次均有较为稳定的甘油酸产生,转化率也维持在70-90%,平均体积产率达到1.15 g·L-1·h-1。研究了固定化细胞在转化甘油生产甘油酸上的应用,通过正交实验设计确定了制备固定化细胞的条件为:菌体浓度10%,海藻酸钠1%,卡拉胶0.4%,在该条件下制备的固定化细胞转化生产甘油酸的产量达到46.87 g/L,试验还确定了适合固定化细胞生长产酸的温度为30℃,pH为7,底物浓度为150 g/L。对固定化细胞和静息细胞的生产曲线进行了对比,结果表明,静息细胞具有较好的稳定性,在连续转化三代后还能保持较高的酶活,较之固定化细胞更具优势。建立了分离提取路线,发酵液经过陶瓷膜设备除菌体,再经纳滤膜设备除去蛋白,进行活性炭脱色处理,最后浓缩结晶和重复结晶,干燥后得到甘油酸钙精品,含量达99.1%。对甘油酸发酵和提取过程中的成本进行了初步估算,1吨甘油酸钙所需的生产成本约为36000元,具有良好的工业应用前景。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 1 绪论
  •   1.1 甘油的概述
  •   1.2 甘油酸的概述
  •     1.2.1 甘油酸的结构与理化性质
  •     1.2.2 甘油酸的功能与应用
  •   1.3 甘油酸的合成方法
  •     1.3.1 化学合成法
  •     1.3.2 微生物法
  •   1.4 研究背景及意义
  •   1.5 静息细胞转化技术
  •     1.5.1 静息细胞技术概述
  •     1.5.2 静息细胞技术的工艺优势
  •   1.6 固定化细胞技术
  •     1.6.1 细胞固定化概述
  •     1.6.2 制备固定化细胞的方法
  •   1.7 甘油酸的分离提取
  •     1.7.1 浓缩结晶法
  •     1.7.2 超滤膜分离法
  •     1.7.3 萃取法
  •   1.8 主要研究内容
  • 2 甘油酸发酵工艺的研究
  •   2.1 引言
  •   2.2 材料与方法
  •     2.2.1 实验菌种
  •     2.2.2 主要试剂
  •     2.2.3 主要仪器
  •     2.2.4 培养基成分与培养方法
  •     2.2.5 分析方法
  •   2.3 实验方法
  •     2.3.1 摇瓶发酵培养条件的优化
  •     2.3.2 5L发酵罐放大实验
  •     2.3.3 30L发酵罐验证实验
  •   2.4 结果与讨论
  •     2.4.1 摇瓶发酵培养条件的优化
  •     2.4.2 5L发酵罐放大实验
  •     2.4.3 30L发酵罐验证实验
  •   2.5 本章总结
  • 3 静息细胞法转化甘油生产甘油酸
  •   3.1 引言
  •   3.2 材料与方法
  •     3.2.1 主要仪器与试剂
  •     3.2.2 实验菌种
  •     3.2.3 培养基
  •     3.2.4 静息细胞培养
  •     3.2.5 分析方法
  •   3.3 实验方法
  •   3.4 结果与讨论
  •     3.4.1 单因素实验结果
  •     3.4.2 响应面分析法优化固定化条件
  •     3.4.3 反复分批转化实验
  •   3.5 本章总结
  • 4 固定化细胞转化甘油生产甘油酸
  •   4.1 引言
  •   4.2 材料与方法
  •     4.2.1 主要仪器与试剂
  •     4.2.2 实验材料
  •     4.2.3 固定化细胞制备方法
  •     4.2.4 分析方法
  •   4.3 实验方法
  •   4.4 结果与讨论
  •     4.4.1 单因素实验结果
  •     4.4.2 正交优化固定化细胞制备条件
  •     4.4.3 固定化细胞性质研究
  •   4.5 本章总结
  • 5 甘油酸钙的分离提取工艺条件研究
  •   5.1 引言
  •   5.2 材料与方法
  •     5.2.1 试剂与材料
  •     5.2.2 主要仪器
  •     5.2.3 实验方法
  •     5.2.4 主要原材料成本核算
  •   5.3 结果与讨论
  •     5.3.1 菌体去除
  •     5.3.2 蛋白去除
  •     5.3.3 发酵液脱色
  •     5.3.4 浓缩结晶
  •     5.3.5 重结晶及晶体烘干
  •     5.3.6 甘油酸钙精品质量分析
  •     5.3.7 成本核算结果
  •   5.4 本章总结
  • 6 讨论
  • 参考文献
  • 攻读学位期间发表的学术成果目录
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 姚浩轲

    导师: 刘宇鹏

    关键词: 甘油酸,静息细胞,固定化细胞,分离提取

    来源: 河南大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,一般化学工业

    单位: 河南大学

    分类号: TQ921

    总页数: 78

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